目的:觀察香煙抽提物對氣道上皮細胞黏蛋白（Mucin）5AC表達的影響及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。方法:（1）體外培養(yǎng)人氣道上皮細胞系A(chǔ)549細胞,予以不同濃度的香煙抽提物（CSE）刺激24 h,觀察刺激前后細胞的生長和增殖情況,并分別采用ELISA技術(shù)及PCR檢測各組細胞中MUC5AC蛋白含量及轉(zhuǎn)錄水平的變化情況,測定活性氧成分的含量。（2）以未予任何處理的細胞為空白對照,分別設(shè)立CSE單純刺激組;腫瘤壞死因子轉(zhuǎn)換酶抑制劑-1（TAPI-1）預(yù)處理組;活性氧清除劑DMTU預(yù)處理組。各孵育24 h后,采用RT-PCR檢測處理前后細胞中MUC5AC mRNA含量;ELISA檢測培養(yǎng)上清中MUC5AC、可溶性轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）-α蛋白含量;Western印跡分析磷酸化表皮生長因子（p-EGFR）、磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（p-ERK）、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）蛋白水平。（3）分別以JNK特異性抑制劑SP600125、Src激酶的特異性抑制劑PP2、活性氧清除劑DMTU為干預(yù)條件。采用RT-PCR技術(shù)檢測干預(yù)前后細胞中黏蛋白MUC5AC轉(zhuǎn)錄水平的改變、ELISA測定培養(yǎng)上清液中M... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

未予CSE刺激的A549細胞（×200）

圖 1-2 未予 CSE 刺激的 A549 細胞（×200） 圖 1-3 CSE刺激24h后的 A549細胞（×200）Fig 1-2 A549 cells before stimulation （×200） Fig 1-3 A549 cells treated with CSE 24hours later （×200）00.10.20.30.40.50.60.70.80.91正常對照 5%CSE 10%CSE 20%CSECSE刺激前后各相關(guān)指標的變化ROS MUC5AC protein MUC5AC mRNA圖 1-4 CSE 刺激前后各相關(guān)指標的變化Fig 1-4 The levels of Mucin expression andROS content after dilutions of CSE stimuliCSE刺激后細胞生長曲線00.10.20.30.40.50.60.70.80.914h 8h 12h 24h時間(h)光吸值A(chǔ)()normal 5%CSE 10%CSE20%CSE 30%CSE 40%CSE

CSE刺激前后MUC5ACmRNA變化

【參考文獻】：
期刊論文
[1]慢性阻塞性肺疾病患者氣道粘蛋白分子表型的研究[J]. 周向東,童瑾,蘭箭.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2002(07)



本文編號：3370259