目的觀察Wnt經典通路對ARDS時MSC向肺上皮細胞定向分化時細胞自噬的調節(jié)作用,并觀察MSC的PTEN-PI3K/Akt/mTOR通路信號分子變化,明確Wnt經典通路對MSC向肺泡上皮細胞定向分化過程中細胞自噬調控的分子機制,為進一步提高MSC治療ARDS的療效提供實驗基礎。方法首先,用全骨髓細胞貼壁法進行MSC的培養(yǎng)和純化,并通過觀察形態(tài)（MSC呈梭形,類似于成纖維細胞）、用流式細胞儀檢測其表面標志物（CD90[+]、CD29[+]、CD45[-]）和是否能誘導分化為脂肪細胞和骨細胞來鑒定是否為MSC。其次,將8¹0周的C57BL/c小鼠分為對照組和實驗組,實驗組通過氣管注入5mg/Kg的LPS復ARDS模型,對照組氣管注入等體積的NS,來建立ARDS小鼠模型。再將ARDS小鼠模型復制后1h將小鼠處死,提取肺細胞。然后,將懸掛式transwell小室,將小鼠肺細胞、小鼠骨髓MSC建立體外共培養(yǎng)實驗模型。之后,將體外培養(yǎng)誘導MSC向肺上皮細胞定向分化模型進行以下分組和處理:a.空白組:MSC單獨培養(yǎng);b.對照組:MSC+正常肺細胞;c.損傷肺細胞組:MSC+LP... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數】：55 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Tranawell小室實物圖

實驗結果實驗結果骨髓間充質干細胞的分離培養(yǎng)和鑒定結果觀察代培養(yǎng)時，全骨髓貼壁法分離的骨髓細胞呈圓形，胞體透亮，大小不細胞等血系細胞相互混雜。72h 半量換液后可見大量貼壁細胞，6~7d 成不同大小、分散的細胞集落， 9~10d 細胞逐漸融合成片，相互緊密貼化傳代至第 3 代，可見細胞呈均勻分布的紡錘形平均生，呈典型的漩渦1。

圖 3.2 流式細胞儀鑒定 BMSCs 表面分子標志 Fig 3 BMSCs surface molecules identified by flowcytometry3.骨髓間充質干細胞成骨、成脂分化能力鑒定①骨髓間充質干細胞的成骨分化能力鑒定大鼠骨髓間充質干細胞經骨向誘導后形態(tài)由原來的紡錘形逐漸轉化為多角形、形等，較對照組細胞體積更大，細胞外基質分泌逐漸增多，胞外可見許多黑色細小粒(見圖 3.3) 。骨向誘導 12d 后以改良鈣鈷法進行堿性磷酸酶染色，胞漿內呈現深棕或深黑色顆粒狀或大片狀黑色沉淀(見圖 3.4)，同時堿性磷酸酶活力明顯升高 (P<0.0見圖 3.5)；骨向誘導 21d 后運用茜素紅進行礦化結節(jié)染色，光鏡下誘導組可見細胞合重疊生長，形成明顯的紅色致密結節(jié)，周圍呈放射狀突起，表明細胞形成礦化結節(jié)

【參考文獻】：
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