本文關(guān)鍵詞：TRPV4介導(dǎo)的小鼠氣管平滑肌舒張機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的闡明花生四烯酸細(xì)胞色素P450(cytochrome P450,CYP)表氧化酶代謝產(chǎn)物14,15-環(huán)氧化二十碳三烯酸(14,15-epoxyeicosatrienoic acid,14,15-EET)對(duì)小鼠氣管平滑肌收縮功能的影響及其機(jī)制。本研究采用離體氣管環(huán)張力實(shí)驗(yàn)和免疫共沉淀法檢測(cè)14,15-EET對(duì)卡巴膽堿引起的小鼠氣管收縮的影響以及TRPV4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)通道蛋白與小電導(dǎo)鈣激活鉀通道(small conductance Ca2+-activated K+channels,SKCa)蛋白在小鼠氣管平滑肌組織中的相互作用。方法1.離體氣管環(huán)制備雄性小鼠,昆明種,體重在20~25g,清潔級(jí),6周齡。經(jīng)CO2窒息法處死后,迅速取出喉部以下主支氣管,放入通有混合氣體(95%O2和5%CO2)的Krebs-Henseleit緩沖液中,維持p H在7.4±0.05。輕柔地去除氣管外周結(jié)締組織,用粗糙的金屬絲小心去除氣管內(nèi)皮,然后沿縱軸將氣管剪成長(zhǎng)約2 mm氣管環(huán)。2.等長(zhǎng)張力實(shí)驗(yàn)運(yùn)用BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)采集張力信號(hào)數(shù)據(jù),記錄經(jīng)不同阻斷劑和300nmol/L 14,15-EET預(yù)處理后,不同濃度卡巴膽堿的量效關(guān)系。3.免疫共沉淀使用免疫共沉淀方法檢測(cè)TRPV4和SKCa蛋白在小鼠氣管平滑肌中是否存在相互作用。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均以sx±,并運(yùn)用Sigma Plot 12.5軟件進(jìn)行多因素方差分析作圖,P0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果1.卡巴膽堿可以濃度依賴的引起小鼠氣管環(huán)收縮(10-10~10-3 mol/L),與對(duì)照組相比,300 nmol/L 14,15-EET預(yù)處理使卡巴膽堿引起的小鼠氣管收縮顯著減弱(*P0.05)。2.大、中電導(dǎo)鈣激活鉀通道阻斷劑50μmol/L Ib TX和10μmol/L TRAM-34沒有顯著影響300 nmol/L 14,15-EET對(duì)卡巴膽堿引起的小鼠氣管收縮的抑制效應(yīng);而SKCa阻斷劑1μmol/L Apamin顯著阻斷了14,15-EET對(duì)卡巴膽堿引起的小鼠氣管收縮的抑制作用(*P0.05)。3.TRPV4通道阻斷劑20μmol/L RN-1734與對(duì)照組相比,明顯減弱了14,15-EET對(duì)卡巴膽堿引起的小鼠氣管收縮的抑制效應(yīng)(*P0.05)。4.TRPV4蛋白和SKCa通道蛋白第三亞型SK3可以彼此相互共沉淀,TRPV4通道蛋白與SKCa通道蛋白存在相互作用。結(jié)論在小鼠氣管平滑肌中,14,15-EET通過TPRV4-SKCa鈣信號(hào)復(fù)合物調(diào)節(jié)氣管平滑肌的收縮。目的TRPV4作為非選擇性陽離子通道對(duì)鈣離子具有較高通透性,且在組織內(nèi)分布廣泛。被敏感性刺激激活后,通道開放引起胞漿內(nèi)鈣離子濃度顯著升高,鈣離子濃度變化會(huì)直接影響氣道平滑肌的收縮/舒張狀態(tài)。胞內(nèi)1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)可以激活三磷酸肌醇受體(IP3R)介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)鈣離子由肌質(zhì)網(wǎng)釋放。TRPV4通道激活導(dǎo)致的鈣離子內(nèi)流,引起局部Ca2+濃度增加,可以促進(jìn)Na+/Ca2+交換體(NCX2)發(fā)揮作用。因而,本實(shí)驗(yàn)利用離體小鼠氣管環(huán)張力測(cè)定、免疫共沉淀等方法,觀察在小鼠氣管收縮調(diào)節(jié)中TRPV4、IP3R1、NCX2是否存在相互作用。方法1.離體氣管環(huán)制備同第一部分實(shí)驗(yàn)方法。2.等長(zhǎng)張力實(shí)驗(yàn)BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)采集張力信號(hào)數(shù)據(jù),記錄不同藥物處理和卡巴膽堿收縮后,不同濃度TRPV4通道激動(dòng)劑GSK1016790A對(duì)氣管舒張作用的量效關(guān)系。3.免疫共沉淀使用免疫共沉淀方法檢測(cè)TRPV4和NCX2及IP3R1蛋白在小鼠氣管平滑肌中是否存在相互作用。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均以sx±,并運(yùn)用Sigma Plot 12.5軟件進(jìn)行多因素方差分析作圖,P0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。結(jié)果1.TRPV4通道激動(dòng)劑GSK106790A可以濃度依賴的使卡巴膽堿收縮的小鼠氣管環(huán)舒張,與對(duì)照組相比,NCX阻斷劑5μmol/L KB-R7943和Li Cl預(yù)處理引起的小鼠氣管舒張顯著被抑制(*P0.05)。2.與對(duì)照組相比,TRPV4通道阻斷劑10μmol/L HC067047預(yù)處理后,GSK106790A引起的小鼠氣管舒張作用顯著減弱(*P0.05)。3.與對(duì)照組相比,4μmol/L TG預(yù)處理后,明顯抑制了GSK106790A引起的小鼠氣管的舒張效應(yīng)(*P0.05)。4.與對(duì)照組相比,10μmol/L Ryanodine預(yù)處理后,對(duì)GSK106790A引起的小鼠氣管舒張作用沒有顯著效應(yīng)。5.TRPV4蛋白和IP3R1通道蛋白及NCX蛋白第二亞型NCX2可以彼此相互共沉淀,存在相互作用。結(jié)論在小鼠氣管平滑肌中,存在TPRV4-IP3R1-NCX2的鈣信號(hào)復(fù)合物調(diào)節(jié)氣管平滑肌的舒張與收縮效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：鈣激活鉀通道 小電導(dǎo)鈣激活的鉀通道 瞬時(shí)受體電位通道 14 15-EET 氣管平滑肌 TRPV4TRPV4通道 鈉鈣交換體 IP3受體 氣管平滑肌
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R56
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-7
• 1. 14, 15-EET通過TRPV4-SKCa復(fù)合物調(diào)節(jié)氣管平滑肌收縮機(jī)制研究7-31
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-25
• 討論25-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-31
• 2. TRPV4-NCX2-IP3R1信號(hào)復(fù)合物對(duì)氣管平滑肌的收縮調(diào)節(jié)作用31-50
• 中文摘要31-33
• 英文摘要33-36
• 前言36-37
• 材料與方法37-38
• 結(jié)果38-45
• 討論45-47
• 結(jié)論47-49
• 參考文獻(xiàn)49-50
• 附錄50-51
• 致謝51-52
• 綜述 鈣庫操縱鈣內(nèi)流分子組成及其機(jī)制52-60
• 參考文獻(xiàn)58-60

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8 張偉,梅彤,劉磊,于文生,姜云香,牟曉華,周盛年;扶正通宣理肺湯的藥理研究[J];中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào);1996年04期

9 張斯?jié)h;周遠(yuǎn)大;何海霞;;野馬追對(duì)小鼠氣管沖洗液中左氧氟沙星濃度的影響[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年12期

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本文編號(hào)：307194