目的肺炎克雷伯菌是引起醫(yī)院獲得性感染的常見(jiàn)革蘭氏陰性條件致病菌之一。自上世紀(jì)80年代隨著耐藥性肺炎克雷伯菌出現(xiàn),多重耐藥肺炎克雷伯菌造成的復(fù)雜感染治療愈加困難。隨著全耐藥性肺炎克雷伯菌的報(bào)道不斷增多,迫使我們尋求治療耐藥性肺炎克雷伯菌感染的新型治療策略與方法。本研究以莢膜型KN1型菌株Kp409為宿主菌,成功分離并鑒定一株裂解性噬菌體IME321,并對(duì)其進(jìn)行全基因組高通量測(cè)序及相關(guān)生物信息學(xué)分析。在體外克隆表達(dá)噬菌體解聚酶、明確其抗菌活性后,在小鼠感染模型中評(píng)估該解聚酶的治療及預(yù)防效果。方法以臨床分離的肺炎克雷伯菌Kp409為宿主菌,從解放軍總醫(yī)院第五醫(yī)學(xué)中心南院區(qū)（原解放軍307醫(yī)院）未經(jīng)處理污水中篩選噬菌體;利用雙層平板培養(yǎng)法測(cè)定噬菌體IME321的滴度,同時(shí)繪制噬菌體的最佳感染復(fù)數(shù)及一步生長(zhǎng)曲線(xiàn);經(jīng)透射電鏡觀察負(fù)染法處理的噬菌體形態(tài);提取噬菌體核酸,利用Ilumina Miseq高通量測(cè)序平臺(tái)對(duì)噬菌體IME321進(jìn)行全基因組測(cè)序,并進(jìn)行有關(guān)生物信息學(xué)分析。PCR擴(kuò)增噬菌體IME321解聚酶基因ORF42,將目的基因克隆進(jìn)pEasy-BluntE1Expression Vector... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

IME321在Kp409鋪雙層平板所形成的噬菌斑塊和暈環(huán)A：感染24h后，噬菌斑的周?chē)霈F(xiàn)半透明暈環(huán)，并隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而擴(kuò)大

圖 2 噬菌體 IME321 透射電鏡下形態(tài)Fig 2 Transmission electron microscopy of phage IME321染復(fù)數(shù)I分別為0.01、0.1、1、10和100混合噬菌體原液和宿主菌液培養(yǎng)

噬菌體IME321一步生長(zhǎng)曲線(xiàn)


本文編號(hào)：2956678