哮喘是一種以氣道慢性炎癥、氣道高反應(yīng)性和氣道阻塞為特征的疾病,它的確切發(fā)病原因目前還不清楚,有幾個因素影響它的發(fā)生,遺傳因素、環(huán)境因素和生活方式。近年來,哮喘發(fā)病率和死亡率呈持續(xù)增加趨勢。 目前常用的平喘藥有三類:⑴支氣管擴張藥,如長效β2受體激動劑、抗膽堿藥、緩釋茶堿;⑵抗炎性平喘藥,如糖皮質(zhì)激素、白三烯調(diào)節(jié)劑;⑶抗過敏平喘藥,如色甘酸鈉。上述治療藥物能有效減輕哮喘患者癥狀和氣道炎癥,但不能根治,長期使用就會產(chǎn)生耐受,而且對于有些哮喘如激素抵抗性哮喘和重癥哮喘,上述藥物療效欠佳,因此,臨床上需要研制一些其它治療哮喘的藥物作為對上述治療的補充。 目前針對哮喘異常免疫反應(yīng)的免疫治療包括細(xì)胞因子拮抗劑的藥物研究發(fā)展很快,其它針對氣管炎癥復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)中各種靶點的藥物如基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、腺苷受體調(diào)節(jié)劑、NF-κB抑制劑、黏附分子拮抗劑、內(nèi)皮素-1(ET-1)受體拮抗劑等也引起人們的重視。近年來具有藥理作用的天然中草藥正日益受到重視。研究發(fā)現(xiàn)一些中藥如黃芪、丹參、麻黃、防風(fēng)、廣地龍、桃仁、甘草等合用治療哮喘具有改善哮喘患者免疫功能,緩解氣道炎性反應(yīng)的作用,許多研究顯示,麻杏石甘湯、小青龍湯具有抗炎和提高機體免疫水平的作用。但中藥也存在一些不足之處,如起效慢,作用較弱,中藥成分復(fù)雜,某些成分可能產(chǎn)生一些毒副作用。所以如何提取中藥方中的有效成分,提高中藥的療效,減少一些成分的毒副作用是一個值得研究的課題。 本實驗基于防治哮喘的傳統(tǒng)中藥珠貝定喘丸(含牛黃、珍珠、川貝、麻黃等)和本課題組對膽酸同系物抗化學(xué)吸入性肺水腫的研究結(jié)果,對我院申請新藥“膽麻片”方中主要成分牛黃和麻黃進(jìn)行了離體器官藥理學(xué)研究,以期達(dá)到增強藥效減少副作用的目的,為抗哮喘新藥開發(fā)提供實驗依據(jù)。實驗設(shè)計如下:1.在組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮模型上,比較麻黃堿的四個手性異構(gòu)體對組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮的拮抗作用強弱,篩選出拮抗作用較強的一種。2.在此模型上比較膽酸各種同系物對組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮的拮抗作用強弱,篩選出拮抗作用較強的一種。3.將篩選出的麻黃堿和膽酸按一定比例配伍進(jìn)行上述實驗,并與單用比較其對組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮的拮抗作用強弱,分析兩者單用及合用的量-效關(guān)系,比較兩者單用及合用的ED50,以評價不同藥物的藥效。 實驗方法釆用離體豚鼠氣管片法。在組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮模型上,用Med-lab-u/4cs生物信號釆集處理系統(tǒng)記錄加藥后氣管張力的變化,以抑制率、舒張率為觀察指標(biāo):①藥物對組胺所致氣管片收縮的預(yù)防作用,以抑制率表示。②藥物對組胺所致氣管片收縮的治療作用,以舒張率表示。麻黃堿不同手性異構(gòu)體及膽酸同系物的藥理作用比較的統(tǒng)計分析采用單因素k水平方差分析,顯著性水平為0.05。量效曲線擬合采用OriginPro 7.0 S形曲線擬合。配伍實驗相互作用分析采用映射法。 實驗結(jié)果顯示:在相同濃度下(終濃度5 mM),左旋麻黃堿和右旋麻黃堿對氣管片的舒張作用比較強,右旋麻黃堿對組胺的預(yù)防作用較強,右旋麻黃堿對組胺的治療作用最強,綜合三個觀察指標(biāo)實驗結(jié)果來看,右旋麻黃堿對組胺引起的氣管片收縮作用的拮抗作用最強。 在相同濃度下(終濃度2.5 mM),膽酸、去氧膽酸和鵝去氧膽酸對氣管片的舒張作用較強,去氧膽酸和鵝去氧膽酸對組胺的預(yù)防作用較強,鵝去氧膽酸對組胺的治療作用最強,去氧膽酸次之,綜合三個觀察指標(biāo)實驗結(jié)果來看,去氧膽酸和鵝去氧膽酸對組胺引起的氣管片收縮的拮抗作用較強,鑒于去氧膽酸價廉易得,因此我們擬選用去氧膽酸與右旋麻黃堿配伍進(jìn)行實驗。 右旋麻黃堿和去氧膽酸對氣管片的作用呈劑量依賴性的特點,量效曲線呈典型的S型,將右旋麻黃堿和去氧膽酸按4:1比例同時作用于離體氣管片(兩藥分別配制),量效曲線與兩者單用比較,均顯著左移,提示有增效作用。右旋麻黃堿與去氧膽酸合用的ED50值均比單用小,說明兩者合用后有協(xié)同或相加作用。采用映射法分析右旋麻黃堿與去氧膽酸合用的相互作用,結(jié)果顯示小劑量(單用時20%最大效應(yīng)劑量)右旋麻黃堿(1.9 mM)與去氧膽酸(0.8 mM)合用時Q值1,說明兩者合用有協(xié)同作用,提示兩者合用治療支氣管哮喘的效果可能比麻黃堿和膽酸單用更好,兩者合用可降低麻黃堿的劑量,從而降低副作用。 討論:“膽麻片”方中主要成分之一膽酸及其同系物具有廣泛的藥理作用,如鎮(zhèn)靜,利膽,抗炎,退熱等。本課題組通過對膽酸同系物抗化學(xué)吸入性肺水腫的研究顯示,膽酸的同系物抗肺水腫作用強弱順序為去氧膽酸鵝去氧膽酸異去氧膽酸熊去氧膽酸膽酸,此結(jié)果也與本實驗?zāi)Ｐ偷慕Y(jié)果一致。由于膽酸同系物的藥理作用強度與其表面活性順序一致,推測其藥理作用機制可能與表面活性有關(guān)。 “膽麻片”方中另一主要成分之一麻黃堿是非選擇性α、β受體激動劑,能擴張支氣管,可用于輕癥哮喘或預(yù)防哮喘發(fā)作。麻黃堿和偽麻黃堿都可引起心血管、神經(jīng)系統(tǒng)副作用,可能與其對α、β受體的非選擇性作用有關(guān)。麻黃堿有四種同分異構(gòu)體,兩個天然的,即1 R,2 S-(-)麻黃堿和1S,2 S -(+)偽麻黃堿,兩個人工合成的,即1S,2R-(+)麻黃堿和1 R ,2R-(-)偽麻黃堿。本實驗在組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮模型上的研究發(fā)現(xiàn)右旋麻黃堿拮抗組胺作用最強。據(jù)文獻(xiàn)報道,麻黃堿四種異構(gòu)體對β1腎上腺素受體作用強弱順序為左旋麻黃堿右旋麻黃堿右旋偽麻黃堿=左旋偽麻黃堿,對β2腎上腺素受體作用強弱順序為左旋麻黃堿左旋偽麻黃堿=右旋偽麻黃堿右旋麻黃堿。麻黃堿四種異構(gòu)體對α受體的作用強弱順序未見報道。本實驗結(jié)果與文獻(xiàn)報道有一定差異,考慮可能是由于不同的實驗?zāi)Ｐ秃头椒ㄋ稹?通過以上研究,我們發(fā)現(xiàn),在組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮模型上,去氧膽酸和右旋麻黃堿對組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮的拮抗作用較強,右旋麻黃堿和去氧膽酸合用(4:1比例)拮抗組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮的作用比兩者單用強,證實了兩者小劑量合用具有協(xié)同作用,從而達(dá)到增強藥效、降低單藥劑量,減少副作用的目的。本研究為抗哮喘新藥開發(fā)提供了實驗依據(jù),對發(fā)掘中醫(yī)藥寶庫,利用現(xiàn)代科技手段和方法研究中藥有一定意義。
【學(xué)位單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R562.25
【部分圖文】：

遺傳因素（如哮喘家族史、遺傳性過敏癥）、環(huán)境因素（染、對過敏原的暴露）和生活方式（如吸煙、食物）。道對變應(yīng)原產(chǎn)生反應(yīng)由三個階段組成，誘導(dǎo)階段、速發(fā)反段。每個階段有不同的細(xì)胞因子參與，在誘導(dǎo)階段，Th細(xì)在速發(fā)反應(yīng)階段，肥大細(xì)胞產(chǎn)生各種細(xì)胞因子；在遲發(fā)反、中性粒細(xì)胞、T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、細(xì)胞均產(chǎn)生各種各樣的細(xì)胞因子。長期慢性氣道炎癥可引氣道炎癥和氣道重構(gòu)的結(jié)果�，F(xiàn)進(jìn)行抗炎治療后，哮喘仍會持續(xù)和發(fā)展，其機制是[3]：氣子之間的相互作用及Th2細(xì)胞和其它炎性細(xì)胞之間的相互作道重構(gòu)。Th2細(xì)胞在氣道持續(xù)有活性，IL-13 和其它Th2細(xì)胞，導(dǎo)致疾病的持續(xù)和發(fā)展。

2S)-(+)偽麻黃堿 (1R,2R)-(-)偽麻黃堿圖 2 麻黃堿和偽麻黃堿的一對對映體的分子結(jié)構(gòu)式文獻(xiàn)報道，麻黃堿四種異構(gòu)體對β1腎上腺素受體作用強弱順序為左旋麻黃堿>右旋偽麻黃堿=左旋偽麻黃堿，對β2腎上腺素受體作用強旋麻黃堿>左旋偽麻黃堿=右旋偽麻黃堿>右旋麻黃堿，對β3腎上腺素弱順序為左旋麻黃堿>右旋麻黃堿>右旋偽麻黃堿=左旋偽麻黃堿[15]。異構(gòu)體對α受體的作用強弱順序未見報道。節(jié)研究目的：在組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮模型上，比較麻黃堿異構(gòu)體對組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮的拮抗作用強弱，篩選出拮抗一種。方法 豚鼠，雄性，體重 250-300 g，購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心

時間（秒）力（克）張圖3 加入不同藥物后氣管片張力變化圖。注：a：基線穩(wěn)定后加入組胺張力增加值；b：用K-H氏液沖洗基線穩(wěn)定后加入受試藥物張力下降值；c：受試藥物作用張力穩(wěn)定后再加組胺的張力增加值；d：用K-H氏液沖洗基線穩(wěn)定后加入組胺的張力增加值；e：組胺作用張力穩(wěn)定后加入受試藥物后張力下降值。軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 2008
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本文編號：2850630