目的：研究白介素-6(interleukin-6，IL-6)、白藜蘆醇(resveratrol，Res)對肺泡上皮細胞A549增殖的影響，觀察其對內(nèi)毒素(endotoxin，LPS)誘導的A549細胞損傷中的干預作用。探討白藜蘆醇誘導A549細胞凋亡的機制，并構建A549細胞白介素-6 RNA干擾模型。 方法：本實驗通過A549細胞培養(yǎng)，按預設方案添加白介素-6、白藜蘆醇、內(nèi)毒素處理細胞樣品；采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法(MTT法)檢測A549細胞的增殖效應及不同藥物對其增殖效應的影響；運用TUNEL染色檢測白藜蘆醇誘導的A549細胞凋亡；運用蛋白免疫印跡技術(Western blotting)檢測A549細胞凋亡相關蛋白的表達變化；化學合成法合成白介素-6 SiRNA，通過脂質(zhì)體轉染干擾A549細胞白介素-6的表達；運用逆轉錄聚合酶聯(lián)反應(RT-PCR)檢測A549細胞內(nèi)IL-6的表達及LPS刺激后的變化。 結果： 1．內(nèi)毒素能損傷體外培養(yǎng)的A549細胞，其作用具有明顯的時間、濃度依賴性；外源性白介素-6對內(nèi)毒素誘導的A549細胞損傷的干預作用不明顯。 2．白藜蘆醇對內(nèi)毒素誘導的A549細胞損傷的干預作用不明顯。白藜蘆醇對A549細胞的增殖具有明顯的抑制作用，這種作用具有明顯的時間、濃度依賴性。白藜蘆醇對A549細胞的增殖抑制作用部分是通過誘導A549細胞凋亡而實現(xiàn)的。白藜蘆醇誘導A549細胞凋亡可能是通過抑制Akt的表達及其磷酸化，從而調(diào)節(jié)線粒體凋亡途徑相關蛋白的表達而實現(xiàn)的，其對死亡受體途徑的相關蛋白影響不明顯。 3．體外培養(yǎng)的A549細胞存在白介素-6基因的表達，內(nèi)毒素刺激A549細胞能導致其表達量的變化，通過脂質(zhì)體轉染的白介素-6 SiRNA能干擾A549細胞中白介素-6的表達。 結論： 外源性的白介素-6和白藜蘆醇對內(nèi)毒素誘導的A549細胞損傷的干預作用不明顯；白藜蘆醇對A549細胞存在明顯的增殖抑制作用，能夠通過調(diào)節(jié)凋亡相關蛋白的表達誘導A549細胞凋亡；體外培養(yǎng)的A549細胞能表達白介素-6，內(nèi)毒素能誘導其表達量的變化，并成功構建了白介素-6 SiRNA。
【學位單位】：四川大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2007
【中圖分類】：R563
【部分圖文】：

漸上升(見圖l一3)。30、60、90林mol幾白黎蘆醇處理A549細胞24、45、72h后的OD值隨作用時間逐漸下降(見表1一5)，相應的細胞生長抑制率逐漸上升(見圖1一4)。經(jīng)單因素方差分析，以上各組OD值、細胞抑制率之間有顯著差異(P<0.01)。以上結果表明白黎蘆醇對人肺癌A549細胞有較強的增殖抑制作用，而且這種作用有明顯的濃度、時間依賴性。表1一1不同濃度LPS處理A549細胞24h后OD值的變化(又士s)濃度(mg/L)OD值 2.360士 0.1672.015士 0.2141.582士 0.1781.124士 0.1850.995士0.157注:以上各濃度組A549細胞的吸光值之間均有顯著性差異 (p<0.01) 11100「 「 8880卜 卜易易60卜*__」 」七七已一比多夯么到不夕多;;州 州母母40卜*階努價到隴捻捻材 材 2220卜一腸扮彌么胳拔叼貶么論攏么 么 OOO‘esesesesesesesesesesesesesesesJ一』z‘自2若 desss 00015102000濃 濃度(叱 /L)))圖1一1不同濃度LPs對A549細胞的增殖抑制作用(*p<0

00061224487222時 時間 (h)))圖1一 2LPs處理A549細胞后生長抑制率隨時間的變化(*p<0.01)表1一 3IL一6、白黎蘆醇對LPS刺激A549細胞損傷的干預作用(24h)(見士s)IL一6ReS正常對照組模型組干預組 2.351士0.181 1.132士0.124 1.241士0.251八 1.086士0.107八 1.134士0.097八 2.197士0.204* 2.218士0.157* 2.214士0.267* 2.257士0.351 1.114士0.098高劑量組中劑量組低劑量組高劑量組中劑量組低齊日量組 1.009士0.103 0.989士O一099 1.105士0.107八八八八△△藥物對照組 1.407士0.124** 1.561士0.141** 1.687士0.201**注:干預組，J模型組相比無差異(△p一住679>0.05、△△p一住370>0.05);藥物對照組與正常對照組IL一6無明顯差異(*p二0.786>0.05)，白瑩蘆醇有顯著差異(**p=0.008<0.01)

00061224487222時 時間 (h)))圖1一 2LPs處理A549細胞后生長抑制率隨時間的變化(*p<0.01)表1一 3IL一6、白黎蘆醇對LPS刺激A549細胞損傷的干預作用(24h)(見士s)IL一6ReS正常對照組模型組干預組 2.351士0.181 1.132士0.124 1.241士0.251八 1.086士0.107八 1.134士0.097八 2.197士0.204* 2.218士0.157* 2.214士0.267* 2.257士0.351 1.114士0.098高劑量組中劑量組低劑量組高劑量組中劑量組低齊日量組 1.009士0.103 0.989士O一099 1.105士0.107八八八八△△藥物對照組 1.407士0.124** 1.561士0.141** 1.687士0.201**注:干預組，J模型組相比無差異(△p一住679>0.05、△△p一住370>0.05);藥物對照組與正常對照組IL一6無明顯差異(*p二0.786>0.05)，白瑩蘆醇有顯著差異(**p=0.008<0.01)

【參考文獻】

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1 宋勇,毛寶齡,孫慶華;LPS對大鼠肺泡Ⅱ型細胞Fas抗原表達及細胞凋亡的影響[J];第三軍醫(yī)大學學報;1998年06期

2 張明靜,王興勇,盧仲毅;白藜蘆醇苷對內(nèi)毒素休克肺損傷大鼠Th1/Th2失衡的干預作用[J];兒科藥學雜志;2003年03期

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4 王興勇 ,舒仕瑜 ,盧仲毅;白藜蘆醇甙對休克性肺損傷的干預機制[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2003年03期

本文編號：2831231