【摘要】： 目的通過建立LPS誘導體外原代培養(yǎng)的大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡的損傷模型,觀察抗IL-6R單克隆抗體對大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡的保護作用。 方法分離、純化、電鏡鑒定的大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞,培養(yǎng)于24孔培養(yǎng)板中,每孔1×106個細胞,原代培養(yǎng)23h后,按如下方式分5組(每組4個復孔):A組:空白對照組,僅含DMEM培養(yǎng)基;B組:LPS損傷組,DMEM培養(yǎng)基+LPS10μg/ml;C組:DMEM培養(yǎng)基+LPS10μg/ml組+抗IL-6R單克隆抗體5μg/ml;D組:DMEM培養(yǎng)基+LPS10μg/ml組+抗IL-6R單克隆抗體10μg/ml;F組:DMEM培養(yǎng)基+LPS10μg/ml組+抗IL-6R單克隆抗體20μg/ml。培養(yǎng)48小時后,收集細胞行PI單染法流式細胞儀(FCM)凋亡檢測,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定細胞培養(yǎng)上清液中IL-6、TNF-α的含量,記錄結果。 結果流式細胞儀檢測顯示,與A組相比,B組、C組、D組、E組肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡率顯著增加,而C組、D組、E組同B組相比肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡率顯著降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),提示抗IL-6R單克隆抗體對肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡具有保護作用。本研究同時分析了肺泡Ⅱ型上皮細胞培養(yǎng)上清液中IL-6和TNF-α濃度,發(fā)現(xiàn)與A組相比,B組、C組、D組、E組IL-6和TNF-α濃度顯著增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);C組、D組、E組IL-6和TNF-α濃度分別與B組比較以及C組、D組、E組三組間IL-6和TNF-α濃度比較均無明顯變化,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論1、LPS可誘導體外培養(yǎng)的肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡,且可以刺激肺泡Ⅱ型上皮細胞增加IL-6、TNF-α分泌;2、抗IL-6R單克隆抗體對LPS所致大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡具有保護作用,并呈濃度依賴關系,但其確切機制有待進一步的研究;3、抗IL-6R單克隆抗體對肺泡Ⅱ型上皮細胞分泌IL-6、TNF-α無明顯影響。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R563
【圖文】：

圖 1 肺泡Ⅱ型上皮細胞堿性磷酸酶染色 圖 2 正常肺泡Ⅱ型上皮細胞透射電鏡照片（×200） （×20,000）圖3 新鮮分離的肺泡Ⅱ型上皮細胞 圖4 正常原代培養(yǎng)1天后的肺泡Ⅱ型上皮細胞（×400） （×200）

圖 1 肺泡Ⅱ型上皮細胞堿性磷酸酶染色 圖 2 正常肺泡Ⅱ型上皮細胞透射電鏡照片（×200） （×20,000）圖3 新鮮分離的肺泡Ⅱ型上皮細胞 圖4 正常原代培養(yǎng)1天后的肺泡Ⅱ型上皮細胞（×400） （×200）

圖 1 肺泡Ⅱ型上皮細胞堿性磷酸酶染色 圖 2 正常肺泡Ⅱ型上皮細胞透射電鏡照片（×200） （×20,000）圖3 新鮮分離的肺泡Ⅱ型上皮細胞 圖4 正常原代培養(yǎng)1天后的肺泡Ⅱ型上皮細胞（×400） （×200）圖 5 正常原代培養(yǎng) 3 天后的肺泡Ⅱ型上皮細胞（×400）

【參考文獻】

相關期刊論文 前6條

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本文編號：2791233