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博萊霉素大鼠肺微血管內皮細胞屏障功能變化與肺纖維化相關性研究

發(fā)布時間:2020-06-23 08:48
【摘要】: 目的: EC作為血管基本的結構和功能單位,其重要的生理功能就是發(fā)揮其屏障功能,調節(jié)血管內外的物質交換,維持內環(huán)境的穩(wěn)定,使得鄰近或遠端的組織器官免受損害。細胞外基質與EC粘附形成完整的內皮屏障。在PF的發(fā)病過程中,起始階段的肺泡炎和纖維化形成階段均有血管通透性增高、EC間連接持續(xù)開放。這種內皮屏障功能的異常為大分子物質跨內皮交換提供了旁路途徑,對肺損傷時炎癥細胞進入肺泡、肺間質及激活Fb增殖具有重要意義。EC連接蛋白與肌動蛋白相連,與細胞骨架一起受細胞內[Ca2+]i的影響。本實驗通過電鏡、細胞培養(yǎng)、免疫組化、激光共聚焦掃描技術,觀察肺炎及PF大鼠PMVEC形態(tài)學改變,比較PF及正常大鼠PMVEC內[Ca2+]i差異,并分析其負反饋調節(jié)因素—中電導鈣激活鉀通道蛋白質1(Kca3.1)的表達特點,探討博萊霉素損傷時大鼠肺PMVEC屏障功能變化和機制以及PMVEC在PF發(fā)生中的地位和作用。 方法: SD大鼠20只,體重150±20 g,雌雄不拘(第四軍醫(yī)大學實驗動物中心)。隨機分為對照組和博萊霉素組(BLM組),每組各10只。博萊霉素A5(天津太河制藥,8mg/支,批號041103)用生理鹽水稀釋成4 g/L,按5 mg/kg體重氣管內滴入0.15~0.2 ml制作PF模型,對照組氣管內滴入等量生理鹽水。兩組分別行PMVEC原代培養(yǎng),以100μL Fluo-3 /AM熒光指示劑(美國Molecular Probe公司)負載,激光掃描共聚焦顯微鏡檢測細胞內[Ca2+]i熒光強度,應用免疫細胞化學法及免疫熒光法分別測定Kca3.1在EC的表達。透射電鏡觀察肺炎、BLM組及對照組PMVEC形態(tài)(電鏡標本由第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院放射科殷茜博士提供)。 結果: 1.肺微血管內皮細胞透射電鏡觀察 ①.EC緊密連接:對照組EC管腔面光滑,沒有鑭顆粒附著,緊密連接未見開放。肺炎7 d組EC腔面有少量絮狀鑭顆粒,緊密連接開放,EC呈增生狀態(tài)。肺炎14 d組恢復光滑表面,未見鑭顆粒附著,EC恢復正常狀態(tài),EC周圍有少量膠原沉積。BLM各組緊密連接持續(xù)開放,EC腔面可見絮狀、線狀鑭顆粒及血小板附著。EC表面不光整,可見指狀突起,EC呈增生狀態(tài),以7d、14 d、21 d組明顯。②.EC吞飲小泡:肺炎7 d組EC內吞飲小泡明顯減少,而BLM各組吞飲小泡均較豐富,特別是BLM 7 d組,胞質中出現(xiàn)大量吞飲小泡,且體積增大。EC旁可見較多膠原沉積,局部EC與Fb直接接觸。 2.肺微血管內皮細胞內游離Ca2+主要位于細胞漿。內皮細胞[Ca2+]iBLM組(166.56±24.17)明顯高于對照組(95.79±13.51,p0.01),兩者比較差異具有統(tǒng)計學意義 3.肺微血管內皮細胞Kca3.1主要表達在細胞膜上。間接免疫熒光法BLM組Kca3.1(679.29±206.98)明顯低于對照組(958.75±188.84,p0.01);免疫細胞化學法BLM組Kca3.1(169.08±14.81)明顯低于對照組(189.78±13.73,p0.01),兩者比較差異具有統(tǒng)計學意義。 結論: 1.血管通透性增高、EC粘附性增加及EC轉運功能增強提示BLM組PMVEC的血管屏障功能發(fā)生異常,是炎癥細胞及血管活性物質進入組織間的重要因素之一。 2. EC內鈣過載是PMVEC屏障功能異常的重要原因,EC[Ca2+]i過載與EC表型轉換及EC功能變化密切相關。 3. PMVEC細胞膜中電導鈣激活鉀通道蛋白質1活性下降是EC鈣過載的原因之一。
【學位授予單位】:第四軍醫(yī)大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2007
【分類號】:R563.9
【圖文】:

結構模式,肺泡


肺泡結構模式圖

電鏡圖,氣血屏障,電鏡


氣血屏障結構電鏡圖

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本文編號:2727096

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