【摘要】：背景 防御素(defensins)是一類廣泛存在于動植物體內的富含半胱氨酸的陽離子內源性抗微生物肽,它們的抗菌活性及廣泛表達提示它們在多種組織中參與先天免疫反應。研究表明防御素作為T細胞和樹突狀細胞的化學增活素而對適應性免疫系統(tǒng)起信號傳導作用。β-防御素-2(beta-defensin-2)是1997年在銀屑病患者皮膚中發(fā)現(xiàn)的一種由41個氨基酸殘基組成、富含半胱氨酸、具有3對二硫鍵的陽離子抗菌肽。它主要分布于皮膚和呼吸道上皮細胞,對多種病源微生物有高效的殺傷活力性,并且對樹突狀細胞和記憶型T細胞有強的趨化作用,在機體的免疫炎癥反應中發(fā)揮重要作用。國外文獻報道,重組β-防御素-2在體外對多種革蘭陽性及陰性菌有殺傷作用,而且目前未發(fā)現(xiàn)耐藥性。但其發(fā)揮殺傷作用依賴周圍離子環(huán)境,在過高的離子濃度下殺傷作用會減退。另外,它在體外可被IL-17A、IL-17F誘導表達,但在體內二者之間有何聯(lián)系目前還不得而知。肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是一種常見的醫(yī)院內感染致病菌。它引起的肺炎進展快,易累及多肺葉、并且對多種抗生素耐藥,嚴重時可發(fā)生全身炎癥反應綜合癥(Systemic inflammatory response syndrome, SIRS)或多器官功能障礙綜合征(Multiple organ dysfunction syndrome, MODS),成為臨床治療的棘手問題。國內外學者正積極研究β-防御素-2在細菌感染中的免疫調控和殺菌作用,從而探索它在治療耐藥菌感染中的作用,改變單一使用抗生素治療耐藥菌感染的局面。 第一部分:構建SD大鼠肺炎實驗模型 目的 直視下經氣管滴入肺炎克雷伯菌標準株菌液建立SD大鼠肺炎實驗模型,為研究β-防御素-2及IL-17F在肺炎模型中的表達及二者之間的關系創(chuàng)造平臺。 方法 健康SPF級SD雄性大鼠50只,體重190-220g,7周齡,隨機分為兩組①肺炎組(n=25):氣管內直接滴入肺炎克雷伯菌菌液(濃度相當于0.9×109CFU/ml)0.2ml復制肺炎模型;②對照組(n=25):同樣方法滴入等量生理鹽水,肺炎組與對照組又分別按不同時間點分為5個小組,每組5只,接種后分別于4、12小時、1、3、5天分批處死動物,分別取每組大鼠左上肺及右上肺進行組織勻漿菌落計數和病理學檢查。根據細菌學和病理學指標對建立的肺炎模型進行評價。 結果 1.肺炎組大鼠臨床癥狀明顯重于對照組。 2.病理結果:肺炎組大鼠肺組織大體觀察可見雙側多葉出現(xiàn)明顯充血、出血、水腫,鏡下可見肺泡結構破壞,肺泡腔及間質顯著充血及水腫,中性粒細胞浸潤明顯,3天組病變最為嚴重。對照組大鼠肺組織大體觀察可見表面光滑,色澤粉紅,質軟,彈性良好,各時間點無明顯差異。 3.組織勻漿菌落計數:肺炎組大鼠肺組織勻漿均可培養(yǎng)出菌落,4小時組計數最高,此后逐漸降低,第5天時已顯著降低,對照組所有大鼠均未培養(yǎng)出任何細菌。經本院細菌室API細菌鑒定系統(tǒng)驗證培養(yǎng)出的菌落均為肺炎克雷伯菌標準株。 第二部分:β-防御素-2及IL-17F的測定 目的 測定大鼠β-防御素-2 (rat beta-defensin-2,rBD-2)及IL-17F(Interleukin-17F)在大鼠肺炎模型中的表達,觀察其變化規(guī)律,探討兩者之間的相關性。 方法 分別取肺炎組及對照組大鼠右中肺提取總RNA保存于-80℃,采用FQ-PCR檢測β-防御素-2相對表達量,取下腔靜脈血,留血清ELISA法檢測IL-17F濃度。 結果 相同時間點β-防御素-2在肺炎組的表達顯著高于對照組(P0.05),其中肺炎組第3天與同組其他各時間點比較表達明顯高于其他各時間點(P 0.05)。IL-17F在肺炎組中的表達顯著高于對照組(P0.05),其中肺炎組第1天與同組其他各時間點比較表達明顯高于其他各時間點(P 0.05)。 結論 1.直視下氣管內滴入肺炎克雷伯菌液可成功復制大鼠克雷伯菌肺炎模型。 2.β-防御素-2與IL-17F在大鼠肺炎模型中顯著表達,分別于造模后第3天和第1天達到高峰。 3.IL-17F與β-防御素-2呈正相關性,R=0.732 P 0.05。
【學位授予單位】：廣州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R563.1
【圖文】：

不同時間點肺炎組大鼠組織勻漿菌落計數不同時間點菌落計數（×105CFU/g）組別4h 12h 1d 3d 5d肺炎組 0.96 0.83 0.56 0.29 0.016對照組 均未培養(yǎng)出菌落1.3.3 肺組織病理改變1.肉眼觀察：對照組肺組織外觀色澤粉紅，表面光滑，未見明顯異常改變。肺炎組雙肺呈暗紅色，彌漫性充血、水腫，肺組織內散在分布大小不等的實變灶，形狀不規(guī)則，色灰紅或灰黃色，可見點狀和片狀出血，彈性差。見圖 22.光鏡檢查：對照組支氣管粘膜上皮完整，肺小葉結構清晰，肺泡腔結構完整，肺泡壁無增厚，肺泡間質無炎性浸潤。肺炎組肺泡萎陷，腔內滲出、出血，肺組織結構消失，細支氣管及其周圍肺泡腔內充滿膿性滲出物及少量纖維素。肺泡間隔增寬、斷裂，肺泡間隔內血管擴張充血，炎癥細胞浸潤。見圖 2

不同時間點肺炎組大鼠組織勻漿菌落計數不同時間點菌落計數（×105CFU/g）組別4h 12h 1d 3d 5d肺炎組 0.96 0.83 0.56 0.29 0.016對照組 均未培養(yǎng)出菌落1.3.3 肺組織病理改變1.肉眼觀察：對照組肺組織外觀色澤粉紅，表面光滑，未見明顯異常改變。肺炎組雙肺呈暗紅色，彌漫性充血、水腫，肺組織內散在分布大小不等的實變灶，形狀不規(guī)則，色灰紅或灰黃色，可見點狀和片狀出血，彈性差。見圖 22.光鏡檢查：對照組支氣管粘膜上皮完整，肺小葉結構清晰，肺泡腔結構完整，肺泡壁無增厚，肺泡間質無炎性浸潤。肺炎組肺泡萎陷，腔內滲出、出血，肺組織結構消失，細支氣管及其周圍肺泡腔內充滿膿性滲出物及少量纖維素。肺泡間隔增寬、斷裂，肺泡間隔內血管擴張充血，炎癥細胞浸潤。見圖 2

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 王荷花,韓明哲;NK細胞的免疫生物學特性[J];國外醫(yī)學.輸血及血液學分冊;2004年05期

2 魏海明,鄔鵬,田志剛;NK細胞識別的新模式——壓力誘導模式[J];中國腫瘤生物治療雜志;2005年02期

本文編號：2725029