【摘要】： 創(chuàng)傷應(yīng)激是機(jī)體對(duì)創(chuàng)傷刺激所做出的適應(yīng)性反應(yīng),其中糖皮質(zhì)激素受體(glucocoticoid receptor,GR)是機(jī)體抗應(yīng)激反應(yīng)的主要信號(hào)分子。熱休克蛋白(Heat shockprotein,Hsp)90是GR必需的分子伴侶,承擔(dān)了“分子開關(guān)”的作用。生理情況下,Hsp90通過改變GR的立體構(gòu)象,使之形成與糖皮質(zhì)激素(glucocortidoid,GC)結(jié)合的“口袋”而處于與GC結(jié)合的預(yù)備狀態(tài)。只有Hsp90與GR結(jié)合后GR才有對(duì)GC的高親和性;如缺乏Hsp90,GR的GC結(jié)合域由于立體結(jié)構(gòu)的塌陷而掩蓋,使其結(jié)合效率極低。 有人提出,可能體內(nèi)存在兩種GR:高親和力GR和低親和力GR,這兩種受體分子量不同,亞細(xì)胞分布不同,當(dāng)應(yīng)激反應(yīng)使得體內(nèi)的高親和力受體顯著下降后,低親和力受體就發(fā)揮主要的保護(hù)作用。但這種觀點(diǎn)長(zhǎng)期以來(lái)未得到證實(shí),因此我們?cè)O(shè)想,可能存在另外一種情況:同一種分子量和三維結(jié)構(gòu)的GR,其在胞漿內(nèi)以不同的復(fù)合物形式存在,當(dāng)復(fù)合物中缺少某一成分時(shí),受體就可能表現(xiàn)為“低親和力受體”。 創(chuàng)傷后GR結(jié)合活性急劇下降,在多種模型中都得到證實(shí),其原因是什么?目前尚存不同的看法,有文獻(xiàn)報(bào)道稱,結(jié)合Hsp90的GR對(duì)配體的親和力較高,而未結(jié)合Hsp90的GR對(duì)配體的親和力極低,同時(shí)由于Hsp90的含量在創(chuàng)傷后常發(fā)生顯著升高,因此我們推測(cè),Hsp90含量相對(duì)不足或其與GR的比例不當(dāng),使結(jié)合Hsp90的GR減少,從而使親和力較高的結(jié)合狀態(tài)的GR減少,而成為創(chuàng)傷后GR結(jié)合活性下降的原因之一。 因?yàn)槿绻僭O(shè)成立,采用合理的方法調(diào)節(jié)胞漿Hsp90的表達(dá)量,則有可能早期糾正Hsp90/GR的比例失調(diào),使“高親和力”的GR增加或不下降,以達(dá)到減少GC用量、降低副作用的目的。故本研究在放射配體結(jié)合試驗(yàn)和免疫印跡分別檢測(cè)小鼠油酸型肺損傷模型GR的配體親和力和蛋白水平變化規(guī)律的基礎(chǔ)上,試圖對(duì)應(yīng)激后GR的變化趨勢(shì)加以分析,以了解GR及其分子伴侶間的相互作用。應(yīng)用熱應(yīng)激預(yù)處理和生長(zhǎng)抑素干預(yù)體內(nèi)Hsp90及Hsp70的表達(dá)水平,觀察其對(duì)小鼠肺組織損傷,GR結(jié)合活性和親和力的影響,初步驗(yàn)證“Hsp90與GR的合理比值是影響GR與GC親和力高低的重要原因”的假說。 1.動(dòng)物采用尾靜脈注射油酸的方法,造成急性肺損傷(ALI)的模型,在大體、病理特點(diǎn)、動(dòng)脈血?dú)�、肺體指數(shù)和肺含水量等各指標(biāo)中出現(xiàn)典型的急性肺損傷表現(xiàn)。 2.動(dòng)物ALI后肺組織胞漿的GR蛋白在1h左右一過性升高,3h開始下降,12h達(dá)最低點(diǎn),24h開始恢復(fù),而Hsp90和Hsp70傷后蛋白表達(dá)顯著升高,在12h達(dá)最大值;放射配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)顯示,ALI后GR的結(jié)合容量(B_(max))和配體親和力顯著下降,B_(max)在3h、12h較對(duì)照組顯著下降(P＜0.01),24h略有回升(P＜0.01);同時(shí)Kd值在1h較對(duì)照組輕度升高,但無(wú)顯著性差異(P＞0.05),3h、12h和24h均顯著升高(P＜0.05)。 3.熱應(yīng)激預(yù)處理后制作ALI模型,小鼠的大體、病理、動(dòng)脈血?dú)�、肺體指數(shù)和肺含水量等指標(biāo)均較單純油酸致傷組有所改善,其各時(shí)相點(diǎn)GR、Hsp90和Hsp70的表達(dá)量也較OA組相應(yīng)時(shí)相點(diǎn)的表達(dá)量增加,但各時(shí)相點(diǎn)的GR的結(jié)合容量(B_(max))和配體親和力較OA組相應(yīng)時(shí)相點(diǎn)無(wú)顯著性差異。 4.SOM可以專一性地升高Hsp90的蛋白水平,對(duì)其他Hsp的表達(dá)無(wú)顯著影響,使用SOM預(yù)處理后制作ALI模型,小鼠的大體、病理、動(dòng)脈血?dú)夥治�、肺體指數(shù)和肺含水量等指標(biāo)均較OA組有所改善,與OA組比較GR和Hsp90在傷后各時(shí)相點(diǎn)均顯著升高,而Hsp70僅12h和24h輕度升高。而GR的結(jié)合容量(B_(max))和配體親和力與OA組不同,在1h時(shí)顯著下降。 上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在油酸型急性肺損傷的小鼠模型中,GR的配體親和力下降可能是造成嚴(yán)重應(yīng)激不良的重要原因之一,而傷后1小時(shí)GR水平的升高使Hsp90相對(duì)不足可能是GR早期親和力下降的重要原因;熱應(yīng)激預(yù)處理和生長(zhǎng)抑素通過不同的方式誘導(dǎo)的合成,均可增加GR的保護(hù)效應(yīng),特別是生長(zhǎng)抑素不僅維持了ALI早期B_(max)和親和力不下降,而且使傷后的GR水平不僅不下降還略有所升高。初步證實(shí)了Hsp90與GR的比例不當(dāng)可能是影響創(chuàng)傷后早期GR親和力高低的重要因素,以適當(dāng)方法降低創(chuàng)傷早期Hsp90與GR的比值可以有效地提高GC的效應(yīng),改善創(chuàng)傷應(yīng)激反應(yīng),減輕組織損傷程度。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R641;R563
【圖文】：

ALI后肺體指數(shù)(LBl)及肺含水量的變化

下圖Hsp90和Hsp70印跡，p一aetin為內(nèi)參。 1.GR由圖1一3，1一4和表1一3可見，與鹽水對(duì)照相比，OA組GR在傷后lh升高(P<0.05)，傷后 3hGR的免疫印跡則顯著下降(P<0.05)，至 12hGR的免疫印跡達(dá)最低值(P<0.01)，24h后略有升高，但仍低于鹽水對(duì)照組(P<0.05)。 2.HsP90由上列圖表可見，與鹽水對(duì)照相比，OA組HspgO在注射OA后lh蛋白的表達(dá)量即開始升高(p<0.05)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2723907