【摘要】：目的:1.明確地塞米松對(duì)AQPs表達(dá)的影響。2.探索地塞米松對(duì)SUMOs表達(dá)的影響。3.探究SUMO化修飾與AQPs之間的調(diào)控關(guān)系。方法:1.地塞米松對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及對(duì)AQPs表達(dá)的影響。選取A549細(xì)胞作為研究對(duì)象,代替人肺泡II型上皮細(xì)胞,加入不同濃度的地塞米松后培養(yǎng)不同時(shí)間,顯微鏡下觀察細(xì)胞的圖像,CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A549細(xì)胞的活力,TUNNEL實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。Western Blot分別檢測(cè)GR、AQP1、AQP4、AQP5蛋白在A549細(xì)胞中的表達(dá)水平。2.地塞米松對(duì)SUMO1、SUMO2/3及UBC9表達(dá)的影響。不同濃度的地塞米松作用于A549細(xì)胞不同時(shí)間,通過Western Blot分別檢測(cè)SUMO1、SUMO2/3及UBC9蛋白在A549細(xì)胞中的表達(dá)水平。3.地塞米松作用于A549細(xì)胞后,檢測(cè)SUMOs及AQPs的時(shí)空分布;敲低A549細(xì)胞中SUMO2/3后檢測(cè)AQPs的表達(dá)。地塞米松作用A549細(xì)胞不同時(shí)間后,免疫熒光染色檢測(cè)SUMO1、SUMO2/3、GR、AQP1、AQP4、AQP5的時(shí)空分布。構(gòu)建SUMO2/3干涉質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞,PCR檢測(cè)SUMO2和SUMO3的干涉效果,Western Blot檢測(cè)SUMO2/3、UBC9、AQP1、AQP4、AQP5的表達(dá)水平。結(jié)果:1.顯微鏡下發(fā)現(xiàn),高濃度的地塞米松作用后,A549細(xì)胞的形態(tài)無明顯改變,排列稀疏,數(shù)量減少,而低濃度的地塞米松作用后A549細(xì)胞變化不明顯;CCK-8及TUNNEL實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,低濃度的地塞米松對(duì)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)沒有明顯的抑制作用。地塞米松作用A549細(xì)胞后,GR的表達(dá)逐漸上升在36小時(shí)達(dá)到峰值。AQP1的表達(dá)無明顯變化。AQP4的表達(dá)逐漸上升,在48小時(shí)達(dá)到峰值。AQP5的表達(dá)逐漸上升,24小時(shí)達(dá)峰值,后下降至正常水平。2.Western Blot結(jié)果顯示,地塞米松作用A549細(xì)胞后,結(jié)合狀態(tài)的SUMO1沒有明顯變化,游離狀態(tài)的SUMO1輕微上升,結(jié)合狀態(tài)的SUOMO2/3明顯增加,在10~(-7)、5x10~(-7)、10~(-8)M濃度時(shí)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,游離的SUOMO2/3無明顯變化。選取10~(-7)M濃度的地塞米松作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的作用濃度。再次檢測(cè)SUMO1、SUMO2/3及UBC9蛋白在A549細(xì)胞中的表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)地塞米松對(duì)SUMO1的表達(dá)無明顯影響,SUMO2/3的表達(dá)增加,對(duì)UBC9的表達(dá)無明顯影響。3.免疫熒光染色結(jié)果顯示,地塞米松作用A549細(xì)胞后,SUMO1、SUMO2/3發(fā)生漿核移位,AQP1、AQP4的表達(dá)增加,AQP5的表達(dá)在24小時(shí)增加在48小時(shí)下降,GR遵循與AQP5相似的規(guī)律。PCR結(jié)果證實(shí),SUMO2/3干涉質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后,SUMO2和SUMO3的表達(dá)降低。Western Blot結(jié)果顯示,敲低SUMO2/3轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后,在SUMO2/3表達(dá)下降的同時(shí)AQP4的表達(dá)也下降。結(jié)論:低濃度的地塞米松對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無明顯抑制作用,可以促進(jìn)AQP4蛋白表達(dá),同時(shí)也可以促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)蛋白的SUMO化修飾,當(dāng)敲低SUMO2/3時(shí),AQP4蛋白的表達(dá)量也下降。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R563

【參考文獻(xiàn)】

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1 朱s，

本文編號(hào)：2710269