【摘要】： 研究背景與目的:早在1986年Mosmann等依據(jù)小鼠分泌的細胞因子譜不同首次將Th細胞分為Th1和Th2兩個功能不同的獨立亞群。Th1細胞主要分泌IL-2、、IL-12、IFN-γ和TNF-α等細胞因子,介導(dǎo)與細胞毒和局部炎癥有關(guān)的免疫應(yīng)答,參與細胞免疫及遲發(fā)型超敏反應(yīng)。Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL13等細胞因子,其主要功能為刺激B細胞增殖并產(chǎn)生抗體,與體液免疫相關(guān)。近來發(fā)現(xiàn),機體還存在一類不同于Th1和Th2細胞的第3群CD4+效應(yīng)T細胞--Th17細胞�，F(xiàn)已明確,Th17細胞由幼稚T細胞分化而來,具有獨立的分化和發(fā)育調(diào)節(jié)機制。IL-6、TGF-β以及轉(zhuǎn)錄因子ROR-γt在Th17細胞的定向分化過程中是必須的;而IL-2、IFN-γ、IL-4以及轉(zhuǎn)錄因子T-bet、Ets-1能抑制Th17細胞的產(chǎn)生;IL-23則有助于其存活和數(shù)量的維持。大量研究提示,該細胞亞群能特異性產(chǎn)生IL-17,導(dǎo)致組織器官慢性炎癥和纖維化,是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、EAE以及慢性腸炎等慢性炎癥性疾患的關(guān)鍵因素。而且越來越多的證據(jù)顯示Th17細胞在縮主抗細胞外細菌、霉菌感染和自身免疫性疾病方面扮演著重要的角色。目前Th17細胞與肺部疾病的關(guān)系也有很多的研究,主要涉及肺部的慢性炎癥性疾病,如慢性阻塞性肺病(COPD)、結(jié)核、哮喘、肺部纖維囊性病、肺卡氏囊蟲病等。 而Th17細胞在炎癥的各個階段的作用,以及反復(fù)炎癥的不同階段對Th17細胞分化的促進作用是否有別于其他CD4+T細胞(Th1、Th2),以及調(diào)節(jié)機制,需進一步的研究加以充實。本文通過建立OVA致敏小鼠動物模型,檢測急性和慢性炎癥不同階段與Th17細胞亞群相關(guān)的細胞因子、轉(zhuǎn)錄因子好流式細胞等,旨在探討除急性炎癥外,反復(fù)炎癥刺激對OVA致敏小鼠Th-17細胞亞群分化的促進作用,從而試圖對Th17復(fù)雜的分化過程和生理效應(yīng)的某些環(huán)節(jié)能有進一步闡述。目前已知Th1主要產(chǎn)生IFN-γ,Th2主要產(chǎn)生IL-4、IL-5和IL-13,而Th17主要產(chǎn)生IL-17,我們首先通過支氣管肺泡灌洗液(BALF)檢測細胞因子IL-4、IL-5、IL-13、IL-17和IFN-γ,而BALF標(biāo)本來源于小鼠急、慢性哮喘模型不同階段,以此間接反映反復(fù)炎癥刺激對Th1、Th2細胞和Th17細胞分化和分泌細胞因子有無促進作用。我們再通過細胞流式儀分析這些不同炎癥階段BALF中Th17細胞比率,了解反復(fù)炎癥激發(fā)對Th17細胞數(shù)量的促進作用,目前同樣已知TGF-β在Th17分化的啟動中是必須的。而IL-23在Th17的分化過程中起重要的正向調(diào)節(jié)作用,我們又檢測了不同炎癥階段肺勻漿調(diào)節(jié)因子TGF-β、IL-6和IL-23的濃度變化,觀察其是否與Th17細胞數(shù)量IL-17變化趨勢一致,從而證實反復(fù)炎癥是通過IL-23-IL-17軸的途徑促進Th17細胞分化。我們還通過PCR方法檢測了一種核受體RORγt--調(diào)節(jié)Th17分化的主要轉(zhuǎn)錄因子。進一步證實反復(fù)炎癥對Th17細胞分化的促進作用。 方法:分為實驗組和對照組,兩組小鼠均用OVA腹腔注射的方法致敏,在d18-d24用OVA霧化吸入的方法連續(xù)激發(fā)建立急性哮喘模型,在此基礎(chǔ)上,分別于d35和d55再次用OVA霧化吸入的方法激發(fā)而建立慢性哮喘模型,而對照組則在OVA致敏基礎(chǔ)上,僅予以PBS霧化吸入。小鼠在d24、d35和d55被處死,取BALF檢測細胞因子INF-γ、IL-4、IL-5、IL-13和IL-17,進行中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞和嗜酸性粒細胞分類計數(shù)。取肺和氣管旁淋巴結(jié)進行細胞流式分析,進行Th-17細胞含量分析,取肺組織勻漿檢測細胞因子TGF-β、IL-23和IL-6。再取肺組織和脾臟,用PCR的方法檢測轉(zhuǎn)錄因子RORγt。分析以上細胞因子、細胞含量和轉(zhuǎn)錄因子等在炎癥不同階段以及和對照組的差異。 結(jié)果:1.在急慢炎癥不同階段(d24、d35和d55),和Th-17細胞相關(guān)細胞因子IL-17含量逐步升高且顯著高于對照組,組間比較差異顯著(P0.05),對照組則無明顯變化;其他因子INF-γ在慢性炎癥逐步升高但不高于對照組;IL-4、IL-13從急性階段起即顯著高于對照組但并不隨時間延長繼續(xù)升高;而IL-5則從急性階段起即顯著高于對照組但隨時間延長逐步降低。2.來自肺和氣管旁淋巴結(jié)的細胞流式分析顯示:d24、d35和d55,Th-17細胞含量逐步升高,統(tǒng)計學(xué)差異顯著。3.肺勻漿TGF-β和IL-6在d24、d35和d55逐步升高,且均顯著高于對照組;而IL-23則在d24、d35無顯著變化但在d55顯著升高。4.經(jīng)PCR檢測,在急慢炎癥不同階段,來自脾臟和肺組織的轉(zhuǎn)錄因子RORγt含量逐步升高。 結(jié)論:在OVA致敏小鼠哮喘模型急慢性炎癥的不同階段,隨著時間延長,Th-17細胞含量逐步增加,分泌IL-17逐步增加,對Th-17細胞分化起正向調(diào)節(jié)作用的細胞因子TGF-β、IL-6、IL-23和轉(zhuǎn)錄因子RORγt含量逐步升高。提示炎癥反復(fù)激發(fā)有利于OVA致敏小鼠Th-17細胞亞群的分化。
【圖文】：

Thl和ThZ分泌的變化。1.1炎癥不同階段IFN一Y含量的變化如圖IA所示，IFN一Y含量在急性哮喘模型BALF中低于PBS組，，隨炎癥延長逐步升高，d55和d35相比以及和d24相比均有統(tǒng)計學(xué)差異顯著性(P<0.05)。最終和PBS組相仿。提示反復(fù)OVA攻擊并不能促進Thl細胞分泌IFN一丫。O、AOVA廠PBS002二日j油d

本文編號：2704855