【摘要】：目的 通過研究全氟己烷對肺泡巨噬細胞所分泌的各種細胞因子的蛋白質表達、凋亡和細胞周期以及吞噬功能的影響,探討急性肺損傷時應用PFC治療的分子作用機理及其對肺局部防御機能的影響。 方法 健康雄性Wistar大鼠放血處死后全肺灌洗獲取AM,貼壁純化。采用4種方法干預將AM分為4組:(1)正常對照(C)組:不做任何干預;(2)脂多糖(LPS)組:按10ug/ml的劑量加入LPS刺激;(3)全氟己烷(PFH)組:按30%體積比(PFH:培養(yǎng)液)加入的PFH;(4)脂多糖+全氟己烷(LPS+PFH)組:加入PFH和LPS。在預培養(yǎng)20h后重懸AM,分4組干預處理4h后,收集AM,與1%雞紅細胞懸液培育后制片,瑞氏染色觀察并計算吞噬率和吞噬指數(shù),采用單因素方差分析比較組間差異;提取各組細胞的蛋白質應用蛋白質芯片飛行時間質譜技術比較組間的蛋白質表達差異;在純化后即用無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)并分為4組干預24h。收集AM,應用透視電鏡進行形態(tài)學觀察,并聯(lián)合流式細胞技術采用單因素方差分析比較各組間凋亡率和細胞周期的差異。 結果 (1)LPS組與C組、PFH組與C組及LPS組和LPS+PFH組相比較共發(fā)現(xiàn)有15個相對分子量的差異表達蛋白質,分別為:3343 Da、4796 Da、4968 Da、5175 Da、5546 Da、7600 Da、7918 Da、9776 Da、10934 Da、11529 Da、14853 Da(接近14849 Da)、15257 Da、15823 Da、13763 Da、14001 Da。其對應的Swiss—prot蛋白數(shù)據(jù)庫中共發(fā)現(xiàn)了47種相應的蛋白質。(2)LPS組和LPS+PFH組的凋亡率分別明顯高于C組和LPS組(10.06±1.72%/24.10±3.19% vs 1.06±0.13%/10.06±1.72%,P0.01),而PFH組與C組的凋亡率比較無顯著統(tǒng)計學意義(2.81±0.41%vs1.06±0.13%,P0.05);細胞周期的各指標在4組間均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。(3)AM的吞噬率和吞噬指數(shù)呈線性相關性關
【圖文】：

.蛋白質.在芯片表面可直接被捕獲，保留和純化(親合捕獲)0.芯片表面可通過表面增強的激光解吸附和離子化《S且刀D儀進行閱讀保留在芯片上的蛋白質可直接進行質譜分析。儼1比目戶Poretni晰尹燦加y圖7蛋白質芯片和SELDI的原理示意圖

PFH組PFH十LPS組圖IC組:未吞噬雞紅細胞的AM體積較大，核呈紫紅色，位于中央。雞紅細胞呈梭形，有濃染的核;LPS組:可見吞噬了兩個紅細胞的AM;PFH組:吞噬了PFH的AM體積較大;被吞噬的PFH不被染色，，進入胞漿后呈圓形;PFH+LPs組:吞噬了PFH和雞紅細胞的AM(wright，5stain，X1000)
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R563

【參考文獻】

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本文編號：2696220