【摘要】： 目的:大量研究表明,再灌注可以觸發(fā)一系列損傷反應(yīng),引起相應(yīng)臟器致命性損傷。人們發(fā)現(xiàn)肺移植、體外循環(huán)手術(shù)、肺動脈血栓內(nèi)膜剝除術(shù)、肺栓塞溶栓治療等多種臨床情況下發(fā)生肺缺血后再灌注,肺損傷不但沒有減輕反而加重,臨床上將這種現(xiàn)象稱為肺缺血再灌注損傷(ischemia-reperfusion lung injury, IRLI)。其特征性變化是肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞受損,表現(xiàn)為肺血管通透性增加、肺血管阻力增加、肺動脈高壓等。目前,再灌注肺損傷的確切發(fā)生機(jī)制尚不十分清楚,可能與炎性介質(zhì)、氧自由基、肺泡上皮和肺血管內(nèi)皮損傷等多種因素有關(guān)。熱休克蛋白(heat shock protein, HSP)是細(xì)胞在遭受到熱或其他損傷因素(如缺血、缺氧、重金屬)作用后誘導(dǎo)生成的一組蛋白質(zhì)。在維持組織細(xì)胞的自身穩(wěn)定和環(huán)境適應(yīng)性及抵御外界損傷等方面具有保護(hù)作用。研究發(fā)現(xiàn),熱休克蛋白對心肌、肝臟、腦的缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用,但對肺的缺血再灌注損傷的保護(hù)作用尚有待于進(jìn)一步研究。本文旨在探討兔肺動脈栓塞缺血再灌注模型中血管內(nèi)皮損傷時釋放的因子內(nèi)皮素-1(endothelin-1, ET-1),一氧化氮(nitric oxide, NO),血管假血友病因子(von Wilebrand factor, vWF)的變化和熱休克蛋白(heat shock protein, HSP)的表達(dá)研究肺損傷的可能機(jī)制及熱休克蛋白的保護(hù)作用。 方法:選取健康新西蘭白兔30只,體重2.5~3.5kg,雌雄不拘。將Berman球囊漂浮導(dǎo)管的球囊置于左下肺動脈開口處,充盈球囊,堵塞左下肺動脈,建立肺動脈栓塞模型。然后球囊放氣,復(fù)制肺動脈栓塞缺血再灌注模型。隨機(jī)分為5組:(1)假手術(shù)組(n=6),(2)肺動脈栓塞1h組(n=6),(3)肺動脈栓塞2h組(n=6),(4)肺動脈栓塞2h再灌注1h組(n=6),(5)肺動脈栓塞2h再灌注2h組(n=6)。各組動物分別于栓塞前、栓塞1h、栓塞2h、栓塞2h再灌注1h、栓塞2h再灌注2h抽取靜脈血,抗凝、離心、取上清液,分裝后放入-20℃保存,分別采用放射免疫法測定血漿內(nèi)皮素(ET)的含量,酶聯(lián)免疫法測定血管性假血友病因子(vWF)的含量,硝酸還原酶顯色法測定一氧化氮(NO)的含量。實(shí)驗(yàn)動物分別在相應(yīng)時間點(diǎn)處死,取少量左肺組織分別用4%多聚甲醛、4%戊二醛固定,采用免疫組織化學(xué)方法測定熱休克蛋白(HSP70)的表達(dá)及進(jìn)行組織病理分析觀察組織超微結(jié)構(gòu)變化。采用SPSS 11.5版統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。 結(jié)果:(1)血漿中ET-1、NO及NO/ET-1比值的變化:除假手術(shù)組外,肺栓塞1h組、肺栓塞2h組、肺栓塞2h再灌注1h組、肺栓塞2h再灌注2h組血漿中的ET-1、NO含量均高于栓塞前水平,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與假手術(shù)組相比,肺栓塞1h、2h血漿中ET-1、NO的含量明顯增多;再灌注后進(jìn)一步增高,再灌注2h升高最為明顯。與栓塞前及假手術(shù)組相比,肺栓塞1h、栓塞2h、再灌注1h、再灌注2h血漿中NO/ET-1明顯降低。(2)各組血漿中vWF的含量變化:除假手術(shù)組外,肺栓塞1h組、肺栓塞2h組、肺栓塞2h再灌注1h組、肺栓塞2h再灌注2h組血漿中的vWF含量均高于栓塞前水平,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與假手術(shù)組相比,肺栓塞1h、2h血漿中vWF的含量明顯增多;再灌注1h后進(jìn)一步增高,并于再灌注2h達(dá)到高峰。(3)肺缺血再灌注的發(fā)生,免疫組織化學(xué)染色顯示兔肺組織中HSP70陽性細(xì)胞主要在肺泡上皮細(xì)胞、部分支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)大量表達(dá)。與假手術(shù)相比,肺栓塞1h、2h、再灌注1h、2h時,兔肺組織HSP70的陽性面積均顯著增高(P0.05)。并且再灌注1h、2h組明顯高于栓塞1h、2h組,再灌注2h組高于再灌注1h組(P0.05)。(4)肺栓塞再灌注后透射電鏡顯示超微結(jié)構(gòu)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、空泡化、部分胞漿溶解,核染色質(zhì)濃縮,線粒體部分或大部分嵴和膜融合消失。 結(jié)論:(1)本實(shí)驗(yàn)通過介入方法使用Berman球囊漂浮導(dǎo)管成功制作肺缺血再灌注動物模型,具有可控性強(qiáng)、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn),是基礎(chǔ)研究的理想動物模型。(2)肺電鏡超微結(jié)構(gòu)變化提示肺缺血再灌注過程中存在血管內(nèi)皮損傷。(3)ET-1、NO、vWF均可作為內(nèi)皮細(xì)胞損傷的標(biāo)志,本文結(jié)果顯示內(nèi)皮細(xì)胞損傷及功能障礙參與肺缺血再灌注損傷。(4)HSP70在肺栓塞缺血再灌注過程中表達(dá)增加,推測HSP70參與了肺缺血再灌注損傷的保護(hù)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R563.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2681780