【摘要】：目的：在細(xì)胞水平上研究脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激活血清補(bǔ)體對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的作用和影響。評(píng)價(jià)特定抗補(bǔ)體活性物質(zhì)對(duì)LPS激活補(bǔ)體損傷內(nèi)皮細(xì)胞以及LPS致急性肺損傷(acute lung injury, ALI)的保護(hù)作用。 方法：研究LPS激活血清補(bǔ)體的作用方式和特點(diǎn),觀察LPS激活補(bǔ)體對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子和凋亡的影響。采用ELISA法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞釋放P-selectin、E-selectin和ICAM-1的變化,化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)Caspase-3/7的活化情況,SRB法檢測(cè)LPS激活補(bǔ)體對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。在前期工作中發(fā)現(xiàn),香椿果活性多酚是一個(gè)高活性的抗補(bǔ)體物質(zhì),能強(qiáng)烈地抑制補(bǔ)體激活。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定內(nèi)皮細(xì)胞P-selectin、E-selectin、ICAM-1和Caspase-3/7的變化情況,評(píng)價(jià)香椿果抗補(bǔ)體活性多酚對(duì)LPS激活血清補(bǔ)體損傷內(nèi)皮細(xì)胞的作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)采用LPS致ALI模型,其中控制補(bǔ)體的實(shí)驗(yàn)組分別提前2h給予蛇毒新型抗補(bǔ)體蛋白Atrase A和提前24 h給予眼鏡蛇毒因子(cobra venom factor, CVF)。在給予LPS后1h、6h、12h采集標(biāo)本,測(cè)定各組血清補(bǔ)體活性和肺含水量,取支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)測(cè)定細(xì)胞數(shù)、蛋白含量、TNF-α、P-selectin含量,比色法測(cè)定肺組織勻漿中髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)含量,取肺組織行病理切片檢查,評(píng)價(jià)兩種抗補(bǔ)體蛋白對(duì)大鼠ALI的保護(hù)作用。 結(jié)果：LPS能夠激活血清補(bǔ)體,這種激活呈現(xiàn)量效、時(shí)效性。LPS激活血清補(bǔ)體可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞瞬時(shí)顯著釋放P-selectin, E-selectin和ICAM-1表達(dá)也明顯上調(diào),同時(shí)可導(dǎo)致Caspase-3/7的活化。在本實(shí)驗(yàn)條件下,LPS激活血清補(bǔ)體對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)未產(chǎn)生抑制。香椿果抗補(bǔ)體活性多酚不能下調(diào)LPS激活補(bǔ)體損傷內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子和誘導(dǎo)凋亡。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,模型組給予LPS后出現(xiàn)了典型的ALI癥狀,大鼠血清補(bǔ)體活性明顯下降�？寡a(bǔ)體蛋白實(shí)驗(yàn)組均能明顯降低大鼠血清補(bǔ)體水平、肺組織MPO含量和BALF中細(xì)胞數(shù)、TNF-a和P-selectin含量,減輕肺組織炎癥反應(yīng)；但對(duì)肺含水量和BALF中蛋白含量的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：LPS激活血清補(bǔ)體可損傷內(nèi)皮細(xì)胞,導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞顯著表達(dá)粘附分子以及發(fā)生凋亡。香椿果抗補(bǔ)體活性多酚雖能強(qiáng)烈抑制補(bǔ)體經(jīng)典途徑和替代途徑激活,但對(duì)LPS激活補(bǔ)體損傷內(nèi)皮細(xì)胞沒(méi)有保護(hù)作用。采用兩種不同類型的抗補(bǔ)體蛋白能有效減輕ALI的病理?yè)p傷,但兩者的保護(hù)作用特點(diǎn)存在顯著差異,其中Atrase A明顯優(yōu)于CVF,提示Atrase A所作用的某些補(bǔ)體特定靶標(biāo)成分在ALI中具有重要作用。
【圖文】：

3.1LPS激活血清補(bǔ)體誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的情況 3.1.1LPS+NHS孵育混合物加入量的確定不同比例稀釋度的溶血活性顯示，1:10為最佳稀釋度(圖2)。LPS在預(yù)孵條件下，能激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑和替代途徑，，這種激活具有劑量依賴性(圖3)和時(shí)間依賴性(圖4)。在預(yù)孵Zh的條件下，對(duì)經(jīng)典途徑和替代途徑溶血的ICS。分別為 118.48mg·L一1、 195.82mg·L一l。100 275505

本文編號(hào)：2681136