蘿卜硫素和N-乙酰半胱氨酸對香煙煙霧提取物刺激后的肺泡上皮細胞的保護作用及其與IGFBP-3的關系
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【摘要】:目的:觀察蘿卜硫素(Sulforaphane,SFN)和N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)對香煙煙霧提取物(Cigarette smoke extract,CSE)所致的A549細胞損傷是否具有保護作用,是否引起胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3(Insulin-like growth factor binding protein-3,IGFBP-3)的表達水平變化,從而進一步揭示上述損傷與保護的機制。 方法:將A549細胞分為四組,分別為未經(jīng)任何處理的對照組(Control),20%CSE處理組(20%CSE),5μM SFN預處理+20%CSE處理組,1mM NAC+20%CSE處理組。使用MTT比色法,分別測算各組細胞的存活率。利用流式細胞術(shù),熒光染色和AnnexinV-FITC/PI雙標記染色,分別計算各組細胞的周期阻滯情況和凋亡情況。使用活性氧熒光探針(DCFH-DA),測定各組細胞內(nèi)的活性氧簇(ROS)變化。最后,利用RT-qPCR技術(shù)和Western Bolt技術(shù)分析各組IGFBP-3表達水平的變化。 結(jié)果:20%CSE處理后,細胞的存活率明顯下降,SFN和NAC能在一定程度上拮抗CSE對細胞的影響。根據(jù)流式細胞術(shù)的分析,20%CSE可以使細胞周期阻滯在G1期,并增加其凋亡率,SFN和NAC可以有效地緩解CSE對細胞周期和生長的影響,形態(tài)學表現(xiàn)也符合上述變化。除此之外,SFN和NAC可以抑制CSE暴露后細胞內(nèi)ROS水平。同時,CSE作用后IGFBP-3在mRNA水平和蛋白水平都明顯增高,而在SFN和NAC處理后,IGFBP-3表達水平相比CSE處理組有所下降。 結(jié)論:CSE造成肺泡上皮細胞的損傷呈量效依賴關系,表現(xiàn)為細胞周期阻滯和凋亡率增高,SFN和NAC可以有效地緩解這種損傷,具有一定的保護作用。同時IGFBP-3的表達水平在上述過程中有明顯改變,提示IGFBP-3可能是參與CSE損傷下肺泡上皮細胞生長調(diào)控的重要分子。
【關鍵詞】:香煙煙霧提取物 IGFBP-3 蘿卜硫素 N-乙酰半胱氨酸 肺泡Ⅱ型上皮細胞
【學位授予單位】:蘭州大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2013
【分類號】:R563;R96
【目錄】:
- 中文摘要3-4
- Abstract4-8
- 主要英文縮寫詞中英文對照表8-9
- 第一章 蘿卜硫素和N-乙酰半胱氨酸對香煙煙霧提取物刺激后肺泡上皮細胞的保護作用及其與IGFBP-3的關系9-35
- 1 引言9-10
- 2 材料和方法10-21
- 3 結(jié)果21-30
- 4 討論30-32
- 5 結(jié)論32
- 參考文獻32-35
- 第二章 香煙煙霧引起的氧化應激在肺泡Ⅱ型上皮細胞損傷中的作用(綜述)35-43
- 摘要35
- Abstract35
- 1 引言35-36
- 2 香煙煙霧引起的氧化應激導致細胞損傷的始動因素36
- 3 香煙煙霧引起的氧化應激對AECⅡ的損傷作用以及相關機制36-39
- 4 結(jié)論和討論39-40
- 參考文獻40-43
- 第三章 一種用于醫(yī)學研究的香煙煙霧提取物制備裝置的設計43-50
- 摘要43
- Abstract43-44
- 1 引言44
- 2 總體設計原理44-45
- 3 硬件設計及原理45-46
- 4 系統(tǒng)軟件設計46-49
- 5 在實驗中的使用效果49
- 6 結(jié)束語49-50
- 參考文獻50
【參考文獻】
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本文編號:267841
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