本文關(guān)鍵詞：肺癆康對耐異煙肼肺結(jié)核小鼠miRNA-29b和caspase-3及caspase-7的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：檢測肺癆康治療耐異煙肼肺結(jié)核小鼠肺組織中caspase-3、caspase-7和miRNA-29b的表達(dá)水平,探討肺癆康治療耐異煙肼肺結(jié)核的機(jī)制,為中醫(yī)藥治療耐藥肺結(jié)核的機(jī)制提供新思路。方法：1.SPF級昆明種小鼠尾靜脈注射耐異煙肼結(jié)核分枝桿菌菌懸液,建立耐異煙肼肺結(jié)核小鼠模型,以生理鹽水、肺癆康、異煙肼、肺癆康聯(lián)合異煙肼灌胃56天；尾靜脈注射H37RV標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核分枝桿菌菌懸液,建立肺結(jié)核小鼠模型,以生理鹽水灌胃56天；另設(shè)空白對照組,以生理鹽水灌胃56天；2.免疫組化檢測各組小鼠肺組織中caspase-3、caspase-7表達(dá)水平；3.采用Real time quantity-PCR(實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng))技術(shù)檢測各組小鼠肺組織中miRNA-29b的表達(dá)水平；4.采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對實驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果：1.空白對照組小鼠肺組織未檢測出結(jié)核分枝桿菌；耐異煙肼肺結(jié)核模型組小鼠、標(biāo)準(zhǔn)菌肺結(jié)核模型組小鼠肺組織均檢測出結(jié)核分枝桿菌。2.根據(jù)免疫組化評價標(biāo)準(zhǔn),與空白對照組小鼠肺組織比較,caspase-3在標(biāo)準(zhǔn)菌肺結(jié)核模型組小鼠肺組織中高表達(dá)(P0.01),在耐異煙肼肺結(jié)核模型組小鼠肺組織中高表達(dá)(P0.05)；經(jīng)過肺癆康干預(yù)后,caspase-3的表達(dá)高于空白對照組(P0.05),但比治療前下降；經(jīng)過肺癆康聯(lián)合異煙肼干預(yù)后,caspase-3的表達(dá)與空白對照組無顯著差異(P0.05)；經(jīng)過異煙肼干預(yù)后,caspase-3的表達(dá)高于空白對照組(P0.05)。3.根據(jù)免疫組化評價標(biāo)準(zhǔn),與空白對照組小鼠肺組織比較,caspase-7在標(biāo)準(zhǔn)菌肺結(jié)核模型組小鼠肺組織中高表達(dá)(P0.01),在耐異煙肼肺結(jié)核模型組小鼠肺組織中高表達(dá)(P0.01)；經(jīng)過肺癆康聯(lián)合異煙肼干預(yù)后,caspase-7的表達(dá)與空白對照組無顯著差異(P0.05)；經(jīng)過肺癆康干預(yù)后,caspase-7的表達(dá)與空白對照組無顯著差異(P0.05)；經(jīng)過異煙肼干預(yù)后,caspase-7表達(dá)與空白對照組無顯著差異(P0.05)。4.在空白對照組小鼠肺組織中,MiRNA-29b的表達(dá)最低；與空白對照組比較,MiRNA-29b在標(biāo)準(zhǔn)肺結(jié)核模型組小鼠肺組織中高表達(dá)(P0.01),在耐異煙肼肺結(jié)核模型組小鼠肺組織中高表達(dá)(P0.01),且在耐異煙肼肺結(jié)核模型組小鼠肺組織中最高；與耐異煙肼肺結(jié)核模型組比較,miRNA-29b的表達(dá)在肺癆康干預(yù)后降低(P0.01),在異煙肼干預(yù)后降低(P0.01),在肺癆康聯(lián)合異煙肼干預(yù)后降低(P0.05),其中肺癆康、肺癆康聯(lián)合異煙肼干預(yù)后,下降幅度大于異煙肼干預(yù)后的結(jié)果。肺癆康、肺癆康聯(lián)合異煙肼干預(yù)后miRNA-29b的表達(dá)相近,且都低于在標(biāo)準(zhǔn)肺結(jié)核模型中的表達(dá)。結(jié)論：1.小鼠尾靜脈注射耐異煙肼結(jié)核桿菌菌懸液,7天后,小鼠肺組織中檢測出結(jié)核桿菌,說明這種方法造�？尚�。2.在耐異煙肼肺結(jié)核小鼠肺組織中,caspase-3的免疫組化染色表達(dá)升高,經(jīng)過肺癆康干預(yù)后降低,說明肺癆康治療耐異煙肼肺結(jié)核,可能與caspase-3引起的細(xì)胞凋亡有關(guān)。3.在耐異煙肼肺結(jié)核小鼠肺組織中,caspase-7的免疫組化染色表達(dá)升高,經(jīng)過肺癆康干預(yù)后降低,說明肺癆康治療耐異煙肼肺結(jié)核,可能與caspase-7導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡有關(guān)。4.MiRNA-29b在耐異煙肼肺結(jié)核小鼠模型肺組織中呈高表達(dá),經(jīng)過肺癆康干預(yù)后降低,說明肺癆康抗耐異煙肼肺結(jié)核,可能通過miRNA-29b的降低而發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：肺癆康 耐異煙肼肺結(jié)核小鼠 MiRNA-29b Caspase-3 Caspase-7
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R521
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• 英文摘要4-7
• 英文縮略詞表7-11
• 引言11-13
• 實驗研究13-38
• 第一部分 耐異煙肼肺結(jié)核小鼠模型的建立13-19
• 1 實驗材料13-14
• 1.1 實驗動物13
• 1.2 實驗試劑及配置13
• 1.3 實驗儀器、設(shè)備和器材13
• 1.4 實驗菌株13-14
• 1.5 實驗場地14
• 2 實驗方法14
• 2.1 實驗動物分組14
• 2.2 造模方法14
• 3 觀察指標(biāo)及方法14-15
• 3.1 小鼠體征和體重14
• 3.1.1 小鼠體征14
• 3.1.2 小鼠體重14
• 3.2 肉眼下小鼠肺部形態(tài)觀察14
• 3.3 小鼠肺部細(xì)菌培養(yǎng)與菌落計數(shù)14-15
• 4 統(tǒng)計學(xué)處理方法15
• 5 實驗結(jié)果15-17
• 5.1 小鼠體征和體重變化15-16
• 5.1.1 一般體征變化15
• 5.1.2 體重變化15-16
• 5.2 小鼠肺部形態(tài)變化16-17
• 5.3 小鼠肺部結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)四周的菌落計數(shù)17
• 6 數(shù)據(jù)分析及小結(jié)17-19
• 第二部分 肺癆康對耐異煙肼肺結(jié)核小鼠中caspase-3和caspase-7的影響19-33
• 1 實驗材料19-20
• 1.1 實驗動物19
• 1.2 實驗藥物19
• 1.3 實驗試劑及配置19
• 1.4 實驗儀器、設(shè)備和器材19-20
• 1.5 實驗菌株20
• 1.6 實驗場地20
• 2 實驗方法20-21
• 2.1 干預(yù)用藥的制備及用法用量20-21
• 2.2 實驗動物分組21
• 2.3 造模方法21
• 2.4 藥物干預(yù)方法21
• 3 觀察指標(biāo)及方法21-24
• 3.1 小鼠體征及體重21
• 3.2 小鼠肺部形態(tài)21-23
• 3.2.1 肉眼下形態(tài)觀察21-22
• 3.2.2 光鏡下形態(tài)觀察22-23
• 3.3 小鼠肺部細(xì)菌培養(yǎng)與菌落計數(shù)23-24
• 4 小鼠caspase-3和caspase-7的測定24-25
• 4.1 標(biāo)本準(zhǔn)備24
• 4.2 標(biāo)本檢測24-25
• 4.3 染色判定25
• 4.4 圖像采集及觀察25
• 5 統(tǒng)計學(xué)處理方法25
• 6 實驗結(jié)果和分析25-30
• 6.1 小鼠體征、體重改變25-27
• 6.1.1 一般形態(tài)變化25-26
• 6.1.2 體重變化26-27
• 6.2 小鼠肺部形態(tài)變化27-28
• 6.2.1 肉眼觀察下的變化27-28
• 6.2.2 HE染色光鏡下小鼠肺部病理形態(tài)改變28
• 6.3 小鼠肺部結(jié)核桿菌培養(yǎng)與菌落計數(shù)28-29
• 6.4 小鼠肺組織caspase-3的表達(dá)29
• 6.5 小鼠肺組織caspase-7的表達(dá)29-30
• 7 實驗結(jié)果分析和小結(jié)30-33
• 7.1 體重統(tǒng)計結(jié)果分析30-31
• 7.2 肉眼下觀察結(jié)果分析31
• 7.3 光鏡下觀察結(jié)果分析31
• 7.4 小鼠肺部結(jié)核桿菌培養(yǎng)與菌落計數(shù)31
• 7.5 免疫組化caspase-3統(tǒng)計結(jié)果分析31-32
• 7.6 免疫組化caspase-7統(tǒng)計結(jié)果分析32
• 7.7 小結(jié)32-33
• 第三部分 肺癆康抗治療異煙肼肺結(jié)核小鼠中MiRNA-29b的表達(dá)意義33-38
• 1 實驗材料33
• 1.1 實驗試劑33
• 1.2 實驗儀器和設(shè)備33
• 1.3 標(biāo)本準(zhǔn)備33
• 1.4 實驗場地33
• 2 實驗方法33-35
• 2.1 RNA的提取和鑒定33-34
• 2.2 引物設(shè)計34
• 2.3 Real time quantity-PCR34-35
• 2.4 分析方法35
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)方法35
• 3 實驗結(jié)果35-36
• 4 實驗結(jié)果分析及小結(jié)36-38
• 討論38-49
• 1 肺結(jié)核的研究及治療概論38-40
• 1.1 中醫(yī)對肺結(jié)核的研究及治療38-39
• 1.1.1 中醫(yī)對肺結(jié)核病因病機(jī)認(rèn)識38-39
• 1.1.2 中醫(yī)對肺結(jié)核的防治39
• 1.2 西醫(yī)對肺結(jié)核的治療概論39-40
• 2 耐藥肺結(jié)核的研究40-42
• 2.1 耐藥肺結(jié)核的產(chǎn)生和分子機(jī)制探討41
• 2.2 耐藥肺結(jié)核的治療41-42
• 2.2.1 中醫(yī)藥對耐藥肺結(jié)核的治療41-42
• 2.2.2 西醫(yī)對耐藥肺結(jié)核的治療42
• 3 肺癆康的探討42-44
• 3.1 肺癆康來源、應(yīng)用42-43
• 3.2 藥物分析43-44
• 3.3 配伍意義44
• 4 對耐異煙肼結(jié)核小鼠模型的評價44-45
• 5 對陽性藥物的評價45
• 6 對caspase-3和caspase-7在肺癆康抗耐異煙肼肺結(jié)核中的探討45-47
• 6.1 caspase的概況46
• 6.2 Caspase-3、caspase-7在結(jié)核中的表達(dá)46-47
• 6.3 Caspase-3在肺癆康抗耐異煙肼肺結(jié)核中的表達(dá)及意義47
• 6.4 Caspase-7在肺癆康抗耐異煙肼肺結(jié)核中的表達(dá)及意義47
• 7 對MiRNA-29b在肺癆康抗耐異煙肼肺結(jié)核中的探討47-49
• 7.1 MiRNA的概況47-48
• 7.2 MiRNA與結(jié)核病的研究48
• 7.3 MiRNA-29b與肺癆康抗耐異煙肼肺結(jié)核的表達(dá)及意義48-49
• 結(jié)論49-50
• 問題和展望50-51
• 致謝51-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 附件1：附圖58-61
• 附件2：文獻(xiàn)綜述61-67
• 參考文獻(xiàn)65-67
• 附件3：在讀期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、專著及科研成果67-68

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本文編號：267570