發(fā)布時間：2017-03-22 10:15

  本文關鍵詞：過繼轉(zhuǎn)移日本血吸蟲感染小鼠CD8α~-樹突狀細胞通過IL-10抑制OVA誘導的過敏性哮喘，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探究日本血吸蟲(SJ)感染小鼠哪種樹突狀細胞(DC)亞群對抑制OVA誘導的過敏性哮喘有關鍵作用,并研究其抑制作用的機制。方法:取SJ感染小鼠和正常小鼠各10只,采用MACS方法從脾臟中提取CD8α+DC和CD8α-DC,分別表示為:NCD8α+DC,NCD8α-DC,SJCD8α+DC,SJCD8α-DC。另取24只小鼠,隨機分為4組:Normal組、Asthma組、SJCD8α+組和SJCD8α-組。SJCD8α+組:過繼轉(zhuǎn)移SJCD8α+DC后,用OVA誘發(fā)哮喘的小鼠;SJCD8α-組:過繼轉(zhuǎn)移SJCD8α-DC后,用OVA誘發(fā)哮喘的小鼠;Asthma組:不過繼轉(zhuǎn)移DC,僅與SJCD8α+組和SJCD8α-組小鼠在同一時間用OVA誘發(fā)哮喘的小鼠;Normal組:正常對照小鼠,不過繼轉(zhuǎn)移DC,也不誘發(fā)哮喘。對SJCD8α+組、SJCD8α-組和Asthma組小鼠誘發(fā)哮喘結(jié)束后,處死各組小鼠。1.取肺組織,制作石蠟切片,HE染色后,觀察各組小鼠肺組織病理變化。2.分別提取NCD8α+DC,NCD8α-DC,SJCD8α+DC,SJCD8α-DC的總RNA,反轉(zhuǎn)錄為c DNA,采用q-PCR的方法檢測DC亞群IL-12和IL-10 m RNA水平。3.收集各組小鼠的支氣管肺泡灌洗液(BALF),用ELISA法檢測各組小鼠BALF中IL-10蛋白水平。4.取各組小鼠脾臟,制備脾細胞懸液,在一定濃度OVA的刺激下,對脾細胞進行體外培養(yǎng)。72h后,收集脾細胞培養(yǎng)上清(SCS),用ELISA方法檢測各組小鼠SCS中IL-10蛋白水平。結(jié)果:1.與Asthma組小鼠相比,SJCD8α+組小鼠肺組織病理性炎癥減輕:肺間質(zhì)仍有炎細胞浸潤,支氣管管腔可見黏液潴留,但管壁較完整,增厚不明顯。然而,與Asthma組和SJCD8α+組小鼠相比,SJCD8α-組小鼠肺組織病理性炎癥明顯減輕:肺間質(zhì)炎性細胞浸潤明顯減輕,支氣管管壁完整,增厚不明顯,管腔內(nèi)黏液潴留少見。過繼轉(zhuǎn)移SJCD8α-DC對過敏性哮喘的抑制作用強于SJCD8α+DC。2.NCD8α+DC、NCD8α-DC、SJCD8α+DC和SJCD8α-DC的IL-12 m RNA水平分別為23.14±0.40、18.74±2.92、37.96±1.36和25.34±4.31(GAPDH%),SJCD8α-DC IL-12 m RNA表達水平低于SJCD8α+DC(P0.01),與NCD8α+DC、NCD8α-DC相比無明顯差異。NCD8α+DC、NCD8α-DC、SJCD8α+DC和SJCD8α-DC的IL-10 m RNA水平分別為79.74±1.39、89.50±13.95、103.17±3.69和172.68±29.39(GAPDH%),SJCD8α-DC IL-10mRNA表達水平高于NCD8α-DC和SJCD8α+DC(P0.05,P0.05)。3.Normal組、Asthma組、SJCD8α+組和SJCD8α-組小鼠SCS中IL-10蛋白水平分別為(142.23±11.96)pg/ml、(164.42±26.47)pg/ml、(254.16±26.28)pg/ml和(841.53±9.49)pg/ml。SJCD8α-組小鼠SCS中IL-10蛋白表達水平明顯高于Normal組、Asthma組和SJCD8α+組(P0.001,P0.001,P0.001)。4.Normal組、Asthma組、SJCD8α+組和SJCD8α-組小鼠BALF中IL-10蛋白水平分別為(151.63±10.40)pg/ml、(144.54±10.18)pg/ml、(202.88±30.98)pg/ml和(411.21±7.81)pg/ml。SJCD8α-組BALF中IL-10蛋白水平明顯高于Normal組、Asthma組和SJCD8α+組(P0.001,P0.001,P0.001)。結(jié)論:1.SJCD8α-DC對OVA誘導的過敏性哮喘的抑制有關鍵作用。2.SJCD8α-DC是耐受型DC。3.SJCD8α-DC通過增加IL-10表達量抑制過敏性哮喘。
【關鍵詞】：日本血吸蟲 過敏性哮喘 樹突狀細胞 IL-10 調(diào)節(jié)性T細胞
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R562.25;R532.21
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 對象和方法14-35
• 1 實驗準備14-16
• 1.1 陽性釘螺14
• 1.2 實驗動物14
• 1.3 主要試劑14-15
• 1.4 主要儀器設備15
• 1.5 液體配制15-16
• 2 實驗方法16-35
• 2.1 建立日本血吸蟲感染小鼠模型16-17
• 2.2 提取DC亞群17-20
• 2.3 流式細胞術檢測DC純度20
• 2.4 建立實驗動物模型20-21
• 2.5 取材21-25
• 2.6 肺組織病理學檢查25-27
• 2.7 樹突狀細胞亞群IL-12和IL-10 mRNA表達量的檢測27-32
• 2.8 支氣管肺泡灌洗液和脾細胞培養(yǎng)上清中IL-10蛋白水平的測定32-34
• 2.9 統(tǒng)計學分析34-35
• 結(jié)果35-41
• 1 小鼠肺組織病理變化35-36
• 1.1 Normal組小鼠肺組織病理35
• 1.2 Asthma組小鼠肺組織病理35
• 1.3 SJCD8α+組小鼠肺組織病理35-36
• 1.4 SJCD8α-組小鼠肺組織病理36
• 2 樹突狀細胞亞群IL-12和IL-10 mRNA表達量36-38
• 3 小鼠脾細胞培養(yǎng)上清中IL-10蛋白水平38-40
• 4 小鼠支氣管肺泡灌洗液中 IL-10 蛋白水平40-41
• 討論41-44
• 1 關于SJCD8α-DC是抑制過敏性哮喘的關鍵DC亞群的討論41
• 2 關于SJCD8α-DC功能類型的討論41-42
• 3 關于SJCD8α-DC通過IL-10抑制過敏性哮喘的討論42-43
• 4 研究的意義與展望43-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-51
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明51-52
• 附錄52-54
• 綜述 IL-10和調(diào)節(jié)性T細胞對哮喘作用的研究進展54-69
• 綜述參考文獻61-69
• 致謝69

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