【摘要】：目的:本研究以香煙煙霧暴露的HBE(人肺泡上皮)細(xì)胞為模型,驗證穿心蓮內(nèi)酯是否通過調(diào)控miR-218的表達(dá)來緩解香煙引起的上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng);臨床上通過觀察穿心蓮內(nèi)酯治療急性加重期慢性阻塞性肺疾病(AECOPD)的炎癥抑制作用,進(jìn)而揭示穿心蓮內(nèi)酯在預(yù)防吸煙引起的肺部炎癥反應(yīng)中有臨床意義。方法:第一部分穿心蓮內(nèi)酯對HBE細(xì)胞的抗炎作用研究1.1穿心蓮內(nèi)酯對CSE-HBE細(xì)胞促炎癥細(xì)胞因子表達(dá)的影響采用CSE預(yù)處理,構(gòu)建炎癥反應(yīng)的HBE細(xì)胞模型,將細(xì)胞分為四組,分別是CSE組、CSE+穿心蓮內(nèi)酯組、CSE+PBS組及空白對照組。各組細(xì)胞用蛋白分離盒分離核蛋白及胞漿蛋白,通過ELISA測定TNF-α、IL-6和IL-8的表達(dá)水平。1.2 CSE-HBE細(xì)胞中穿心蓮內(nèi)酯對miR-218表達(dá)的影響將HBE細(xì)胞分四組,為CSE組、CSE+穿心蓮內(nèi)酯組、CSE+PBS組及空白對照組,使用RT-PCR測定上述細(xì)胞內(nèi)的miR-218含量。1.3 CSE-HBE細(xì)胞中miR-218 inhibitor對TNF-α、IL-6和IL-8表達(dá)的影響將HBE細(xì)胞仍分四組,為CSE組、CSE+穿心蓮內(nèi)酯組、CSE+穿心蓮內(nèi)酯+anti-miR-218組及空白對照組。各組細(xì)胞用蛋白分離盒分離核蛋白和胞漿蛋白,通過ELISA測定各組細(xì)胞內(nèi)TNF-α、IL-6和IL-8表達(dá)。第二部分穿心蓮內(nèi)酯治療AECOPD患者的臨床觀察隨機將100例中、重度的AECOPD患者分為對照組及治療組,各50例。對照組給予常規(guī)抗感染+對癥治療,治療組另加用穿心蓮內(nèi)酯;治療5天比較兩組患者血氣PO2、PCO2,FEV1%pred以及ELISA法檢測誘導(dǎo)痰液和血清TNF-α、IL-6及IL-8含量。結(jié)果:第一部分穿心蓮內(nèi)酯對COPD的抗炎作用研究1.1穿心蓮內(nèi)酯對CSE-HBE細(xì)胞促炎癥細(xì)胞因子表達(dá)的影響各CSE組中,TNF-α、IL-6和IL-8表達(dá)均比空白組明顯上升;在CSE各組間進(jìn)行炎癥因子表達(dá)差異比較:穿心蓮內(nèi)酯組與未用藥組其表達(dá)明顯降低。1.2 CSE-HBE細(xì)胞中穿心蓮內(nèi)酯對miR-218表達(dá)的影響各CSE組內(nèi),miR-218表達(dá)量與空白對照組比為明顯降低,miR-218的表達(dá)量在預(yù)穿心蓮內(nèi)酯組細(xì)胞與其他CSE組相比則有顯著增加。1.3 CSE-HBE細(xì)胞中miR-218 inhibitor對TNF-α、IL-6和IL-8表達(dá)的影響各CSE組中,三種炎癥因子水平較空白組為明顯上升;穿心蓮內(nèi)酯組與未行預(yù)處理的CSE組比則明顯降低;穿心蓮內(nèi)酯降低炎癥因子的能力則明顯降低,在miR-218沉默后。第二部分穿心蓮內(nèi)酯治療AECOPD患者的臨床觀察與對照組相比,穿心蓮內(nèi)酯治療5天的治療組患者PO2、FEV1%pred數(shù)值顯著升高,PCO2顯著降低(P0.05);血液和痰液中TNF-α、IL-6及IL-8水平顯著降低(P0.05)。結(jié)論:miR-218的表達(dá)可被穿心蓮內(nèi)酯處理后表達(dá)上調(diào),阻礙CSE-HBE細(xì)胞中的炎癥因子(TNF-α、IL-6和IL-8)表達(dá),達(dá)到減輕CSE-HBE細(xì)胞的炎癥反應(yīng)作用。臨床方面,穿心蓮內(nèi)酯通過降低炎癥因子水平從而減輕急性加重期慢性阻塞性肺疾病患者氣道炎癥。
【圖文】：

圖 1-4 各組 HBE 細(xì)胞中的 TNF-α、IL-8 和 IL-6 的表達(dá)含量1.1.5結(jié)論本實驗結(jié)果表明，香煙煙霧能誘導(dǎo) HBE 細(xì)胞內(nèi)的炎性因子分泌量增加，而預(yù)先用穿心蓮內(nèi)酯處理的 CSE-HBE 細(xì)胞的炎性因子表達(dá)量卻有減少的作用，這能說明穿心蓮內(nèi)酯可減少 CSE-HBE 細(xì)胞內(nèi)的炎癥發(fā)生的可能，有抗炎的作用。1.1.6討論COPD 的主要的病理特征是不完全可逆的氣流受限與小氣道內(nèi)彈性回縮力下降；實質(zhì)性結(jié)果為動態(tài)肺順應(yīng)性（最大呼氣第一秒呼出的氣量的容積，F(xiàn)EV1）的逐年減少，肺排空量不足，導(dǎo)致肺靜態(tài)和動態(tài)容量增大。暴露在香煙煙霧中導(dǎo)致肺組織內(nèi)多種炎性細(xì)胞病理性增多，纖毛上皮破損引起粘液分泌增多，肺血管上皮細(xì)胞損傷，肺泡上皮細(xì)胞病理性增生，引起肺泡內(nèi)細(xì)胞反復(fù)炎癥性修復(fù)，膠原含量增加及疤痕形成，從而引起氣道壁結(jié)構(gòu)及肺泡細(xì)胞的損傷，，最終導(dǎo)致細(xì)支氣管壁增厚或重建（圖 a）[8]。阻塞性細(xì)支氣管炎及肺實質(zhì)損傷是 COPD

圖 1-5 各組細(xì)胞中 miR-218 的表達(dá)量1.2.5結(jié)論穿心蓮內(nèi)酯促進(jìn)香煙煙霧引起的肺上皮細(xì)胞的 miR-218 的表達(dá)。1.2.6討論miRNAs 是一類內(nèi)源性、非編碼的單鏈小 RNA，其廣泛存在于植物、線蟲乳動物及人類的細(xì)胞中[23]；據(jù) miRNA 知名數(shù)據(jù)庫（miRase http://www.mirbarg/）最新數(shù)據(jù)示：在 223 個物種中共發(fā)現(xiàn) 35828 條 miRNA。miRNAs 合成是一個多層次、多步驟的復(fù)雜過程。miRNAs 首先在細(xì)胞核過 RNA 多聚酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄為初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 miRNA，接著被 RNase Ⅲ Drosha 酶NA 酶內(nèi)切酶等切割為 miRNA 前體（pre-miRNAs），緊接著就被轉(zhuǎn)移至細(xì)胞，由 RNase Ⅲ Dicer 酶等進(jìn)一步切割加工成約 22nt 的雙鏈 miRNA 復(fù)合物鏈 miRNA 復(fù)合物形成后，其中一條鏈(Passenger 鏈)被降解，另一條則經(jīng)過的生物過程逐漸成熟。被保留的這條鏈成熟為 Guide 鏈并結(jié)合至 RIS[24-26]
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R563

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號：2553174