【摘要】：目的:本研究主要應用分子生物學和細胞生物學等手段,探討在特發(fā)性肺纖維化中,肺祖細胞增殖功能的調(diào)控。方法:1.制備β-肌動蛋白-綠色熒光蛋白(β-actin-green fluorescent protein,β-actin-GFP)小鼠肺組織單細胞懸液。2.利用流式細胞術分選得到肺祖細胞,分別和正常人及特發(fā)性肺纖維化患者來源的肺成纖維細胞共培養(yǎng),觀察肺祖細胞的生長情況。3.應用TGF-β的受體抑制劑SB431542處理小鼠的肺成纖維細胞,測定其所分泌的成纖維細胞生長因子1(fibroblast growth factor 1,FGFl)和成纖維細胞生長因子2(fibroblast growth factor2,FGF2)的變化。4.將小鼠肺祖細胞分別與小鼠肺成纖維細胞分泌的FGF1、FGF2、FGFl/FGF2混合液共培養(yǎng),應用倒置顯微鏡觀察FGFl、FGF2及FGFl/2混合液對肺祖細胞生長的影響作用。結果:1.利用流式細胞術分選得到的肺祖細胞和正常人來源的肺成纖維細胞共培養(yǎng),8d后肺祖細胞克隆形成率為(3.5±1.1)%;而肺祖細胞和特發(fā)性肺纖維化患者來源的肺成纖維細胞共培養(yǎng)時,肺祖細胞的克隆量明顯減少,克隆形成率僅為(0.04±0.04)%,兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.應用TGF-β的受體抑制劑SB431542處理小鼠的肺成纖維細胞24小時后,在熒光顯微鏡下可以觀察到SB431542可上調(diào)肺成纖維細胞分泌的生長因子FGF1和FGF2的基因表達量,FGFlm RNA的表達量由對照組的0.0002上調(diào)到實驗組的0.0055,FGF2 m RNA的表達量由對照組的0.0008上調(diào)到實驗組的0.0015,兩組數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計學意義,而小鼠肺成纖維細胞的細胞形態(tài)沒有明顯變化。3.分別應用FGFl、FGF2及FGFl/2混合液單獨培養(yǎng)小鼠肺祖細胞,8d后觀察到小鼠肺祖細胞成功出現(xiàn)克隆,具有統(tǒng)計學意義。結論:在特發(fā)性肺纖維化發(fā)展過程中,成纖維細胞分泌的生長因子FGFl、FGF2可調(diào)控肺祖細胞的增殖功能。
【圖文】：

圖 1 流式細胞術分選小鼠肺祖細胞注：圖 1.1 篩選出活細胞群圖 1.2 在活細胞群中 CD31/34/45 APC-CY7 陰性、EpCAM-PE細胞是上皮細胞圖 1.3 上皮細胞中 Sca-lAPC-A 及 GFP-FITC 雙陽性的細胞是肺

圖 2 肺祖細胞的增殖情況（共培養(yǎng)第 8 天）注：圖 2.4-2.6 肺祖細胞和正常人肺成纖維細胞共培養(yǎng) 8d，應用倒置熒光顯微鏡下觀察肺祖細胞的克隆形成(NHF 組)圖 2.7-2.9 肺祖細胞和 IPF 患者肺成纖維細胞共培養(yǎng) 8d 后，，應用倒置熒光顯微鏡下觀察肺祖細胞的克隆形成(IPF 組)
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R563

【參考文獻】

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本文編號：2526685