【摘要】：目的觀察肺泡巨噬細胞轉(zhuǎn)染miR-146a后細胞漿與細胞核內(nèi)核因子-κB(NF-κB)表達的變化,探討miR-146a調(diào)控肺泡巨噬細胞炎癥反應的可能機制。方法將NR8383大鼠肺泡巨噬細胞分成兩組:一組為轉(zhuǎn)染組,轉(zhuǎn)染50 nmol/L Pre-miRTMmiR-146a Precursors;另一組為對照組,轉(zhuǎn)染50 nmol CyTM3-labeled PremiRTMNegative Control。兩組細胞轉(zhuǎn)染24 h后加入含脂多糖培養(yǎng)基(終濃度1μg/mL),培養(yǎng)6 h后收集細胞,分別提取細胞漿蛋白與細胞核蛋白,采用Western blot方法檢測NF-κB p65蛋白的表達。結(jié)果轉(zhuǎn)染組miR-146a表達較對照組上調(diào)(P0.01)。轉(zhuǎn)染組細胞漿內(nèi)NF-κB p65蛋白表達較對照組上調(diào)(P0.05),而細胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白表達較對照組下調(diào)(P0.05)。結(jié)論肺泡巨噬細胞轉(zhuǎn)染miR-146a可抑制NF-κB核轉(zhuǎn)位,推測miR-146a通過此機制減輕肺泡巨噬細胞炎癥反應。
【圖文】：

際?常規(guī)SDS－PAGE凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜、免疫學處理及曝光。分別選取β－actin和LaminB1作為內(nèi)參，檢測細胞漿、細胞核內(nèi)NF－κBp65蛋白的表達。1．6統(tǒng)計學方法采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗。2結(jié)果2．1CyTM3－labeledPre－miＲTMNegativeControl的轉(zhuǎn)染效率25nmol/LCyTM3－labeledPre－miＲTMNega-tiveControl的轉(zhuǎn)染效率約為70%，50nmol/L的轉(zhuǎn)染效率約為80%，100nmol/L的轉(zhuǎn)染效率約為50%。結(jié)果表明50nmol/LCyTM3－labeledPre－miＲTMNegativeControl轉(zhuǎn)染細胞效率較高。見圖1。圖1不同濃度CyTM3－labeledPre－miＲTMNegativeControl的轉(zhuǎn)染情況(×400)2．2兩組細胞miＲ－146a表達比較設(shè)對照組細胞miＲ－146a的表達量為1.00±0.00，則轉(zhuǎn)染組細胞miＲ－146a的表達量為24.55±6.14，與對照組比較，轉(zhuǎn)染組miＲ－146a表達明顯上調(diào)(P＜0.01)。2．3兩組細胞NF－κBp65蛋白含量比較轉(zhuǎn)染組細胞漿內(nèi)NF－κBp65蛋白表達較對照組上調(diào)(P＜0.05)，而細胞核內(nèi)NF－κBp65蛋白表達較對照組下調(diào)(P＜0.05)，見圖2、表1。3討論肺泡巨噬細胞介導的固有免疫反應在AＲDS發(fā)病機制中發(fā)揮著關(guān)鍵作用［6］。肺泡巨噬細胞受到機械損傷、病原微生物或炎癥因子刺激時，激活細胞膜上的Toll樣受體(TLＲ)，然后通過一系列信號轉(zhuǎn)導，激活NF－κB向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)位，誘導大量炎癥因子和炎癥通路信號蛋白的轉(zhuǎn)錄表達，失控性釋放大量炎癥因子，促進炎癥的級聯(lián)放大，形成肺內(nèi)炎癥“瀑布”反應［7－8］�；罨�·2815·廣東醫(yī)學2014年9月第35卷第18期GuangdongMedicalJournalSep．2014，，Vol．35，No．18

圖2兩組細胞NF－κBp65蛋白的表達表1兩組細胞NF－κBp65蛋白表達比較xs

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