【摘要】：目的：最近研究表明法舒地爾在哮喘中起著重要的作用，但目前機制仍不十分清楚，因此本實驗研究Rho激酶（Rho-kinase, ROCK）-1抑制劑法舒地爾在支氣管哮喘（簡稱哮喘）中抗炎和抗氧化應激的作用，探討ROCK-1抑制劑在哮喘中的作用。方法：本實驗分三部分：1.動物實驗：5～6周健康BALB/C雌性小鼠24只，隨機分為對照組、哮喘組和法舒地爾組，每組8只。哮喘組和法舒地爾組用卵清蛋白（Ovalbumin, OVA）溶液腹腔注射與鼻腔滴入致敏和激發(fā)，法舒地爾組在滴鼻前用法舒地爾干預，對照組給予同等劑量生理鹽水。激發(fā)后各組均測定氣道反應性，行肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）細胞計數，肺組織蘇木精—伊紅（Hematoxylin-eosin staining,HE）染色和高碘酸—希夫(Periodic Acid-Schiff, PAS)染色，免疫印記（Western Blot）法檢測NF-κB、PNF-κB、STAT6、PSTAT6、TNF-α和Rho激酶-1，免疫熒光測定MUC5AC的表達水平，ROS熒光探針-DHE檢測肺組織內活性氧族物質（Reactive Oxygen Species, ROS）的表達情況。2.細胞實驗：分為對照組、屋塵螨組和法舒地爾組，法舒地爾組先予法舒地爾（濃度為45umol/l）干預1h后，屋塵螨組和法舒地爾組同時予屋塵螨（濃度為20ug/ml）干預24h后，用WesternBlot法檢測NF-κB、PNF-κB、STAT6、PSTAT6、TNF-α和Rho激酶-1，免疫熒光測定MUC5AC及ROS熒光探針-DHE檢測細胞內ROS的表達情況。3.臨床實驗：收集哮喘發(fā)作期患者16例，隨機分為常規(guī)治療組和常規(guī)+法舒地爾（靜脈輸入，30mg/天）治療組，每組8例，每組治療療程為1周，收集治療前后血清標本各一份，采用ELISA法檢測血清中IL-3、IL-4、IL-17和TNF-α的濃度。結果：1.動物實驗：（1）氣道的增強呼氣間歇（Enhancedpause, Penh）值變化：法舒地爾組與哮喘組相比Penh值降低，氣道反應性降低（P0.05）。（2）BALF中細胞學變化：法舒地爾組與哮喘組相比白細胞總數、中性粒細胞比例和嗜酸性粒細胞（Eosinophils, EOS）的比例降低（P0.05）。（3）各組小鼠肺組織鏡下病理改變：哮喘組見大量炎癥細胞浸潤于支氣管及周圍肺組織，其中以中性粒細胞和淋巴細胞最多，支氣管及肺泡腔內有滲出物，部分氣管黏膜上皮壞死脫落，伴杯狀細胞及平滑肌細胞增生。法舒地爾組與哮喘組相比氣道炎癥明顯減輕，MUC5AC熒光強度減弱（P0.05），氣道內黏液分泌減少（P0.05）。（4）法舒地爾組與哮喘組相比，，肺組織內ROS的表達濃度降低（P0.05）。（5）法舒地爾組與哮喘組相比NF-κB、PNF-κB、STAT6、PSTAT6、TNF-α和Rho激酶-1表達水平明顯降低（P0.05）。2.細胞實驗：（1）法舒地爾組與屋塵螨組相比，肺組織內ROS的表達量降低（P0.05）。（2）法舒地爾組與屋塵螨組相比MUC5AC熒光值明顯減弱（P0.05）。（3）法舒地爾組與屋塵螨組相比NF-κB、PNF-κB、STAT6、PSTAT6、TNF-α和Rho激酶-1表達水平明顯降低（P0.05）。3.臨床實驗：常規(guī)治療組和常規(guī)+法舒地爾治療組在治療前后血清IL-3、IL-4、IL-17和TNF-α水平差異均有統計學意義（P0.05），治療后較治療前下降，但常規(guī)+法舒地爾治療組前后治療的血清IL-3、IL-4、IL-17和TNF-α濃度差值明顯高于比常規(guī)哮喘組，并有統計學意義（P0.05）。結論：1.動物實驗：哮喘小鼠通過上調哮喘相關因子和蛋白表達而誘發(fā)小鼠氣道高反應性、肺組織的炎癥和氧化應激，從而引發(fā)一系列哮喘臨床癥狀。給予法舒地爾提前干預能在一定程度上減輕這一作用。2.細胞實驗：屋塵螨可誘導人支氣管上皮細胞（16human bronchialepithelial cells,16HBE）的氧化應激，上調相關炎癥因子和蛋白表達，導致細胞損傷。法舒地爾提前干預可減輕上述作用。也證明法舒地爾有抗炎癥和抗氧化應激的作用。3.臨床實驗：法舒地爾能夠減輕哮喘患者血清中的哮喘相關炎癥因子的濃度，再次證明法舒地爾能減輕哮喘患者炎癥反應。4.綜上說明Rho激酶-1可能參與過敏原誘導的哮喘氣道炎癥過程，Rho激酶-1抑制劑法舒地爾能夠明顯減輕哮喘氣道高反應性、抗炎和抗氧化應激作用。
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【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R562.25

【共引文獻】

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本文編號：2426254