【摘要】：目的:氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性是支氣管哮喘的兩個關(guān)鍵的病理生理特征。前期實驗發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細胞對支氣管哮喘具有有效的治療作用。因而本研究通過分離、培養(yǎng)并鑒定小鼠肺間充質(zhì)干細胞(LR-MSCs),并探討尾靜脈注射LR-MSCs對哮喘模型小鼠氣道炎癥及氣道高反應(yīng)性的影響及哮喘治療的新途徑。方法:采用流式細胞分選儀從經(jīng)過酶混合體消化的小鼠肺組織單細胞懸液中分選Sca-1+CD31-CD45-細胞群(即LR-MSCs)后進行體外培養(yǎng),再將穩(wěn)定傳代的LR-MSCs通過流式細胞表面分析檢測技術(shù)進行間充質(zhì)干細胞表面標記的鑒定;采用腹腔注射和反復霧化吸入雞卵清白蛋白OVA的方法建立急性哮喘模型、同時利用NS建立正常對照組、并通過尾靜脈注射LR-MSCs入哮喘模型小鼠體內(nèi)建立LR-MSCs干預(yù)組、NS處理小鼠尾靜脈注射LR-MSCs建立LR-MSCs對照組;利用BUXCO無創(chuàng)肺功能檢測儀測定各組小鼠氣道高反應(yīng)性的Penh值;通過支氣管肺泡灌洗術(shù)獲得支氣管肺泡灌洗液BALF,計數(shù)各組小鼠BALF的細胞總數(shù)、中性粒細胞數(shù)、嗜酸性粒細胞數(shù)以及單核細胞數(shù);測定各組小鼠BALF中Th2型炎癥因子IL4、IL-5、IL-13的表達;通過ELISA測定各組小鼠血清中炎癥因子OVAsIgE以及OVAsIgG1的水平;HE染色觀察大體組織改變及炎性浸潤程度。結(jié)果:(1)成功分離Sca-1+CD31-CD45-細胞群然后對其進行體外培養(yǎng),并通過流式細胞儀檢測Sca-1+CD31-CD45-細胞群表面間充質(zhì)干細胞表面標記的表達,驗證了Sca-1+CD31-CD45-細胞群即LR-MSCs,該細胞群陽性表達CD29、Sca-1,陰性表達CD31和CD45,符合間充質(zhì)干細胞表面標記的表達情況;(2)成功通過OVA致敏及激發(fā)建立急性哮喘小鼠模型,表現(xiàn)為哮喘模型組的氣道高反應(yīng)性Penh值明顯高于正常對照組,BALF中Th2型炎癥因子IL4、IL-5、IL-13的水平,BALF中細胞總數(shù)、中性粒細胞計數(shù)、嗜酸性粒細胞計數(shù)以及單核細胞計數(shù),血清中炎癥因子OVAsIgE以及OVAsIgG1的水平明顯高于正常對照組,且哮喘模型組較正常對照組支氣管壁及血管周圍有大量炎癥細胞浸潤;(3)通過尾靜脈注射LR-MSCs進行干預(yù)可有效降低氣道高反應(yīng)性并減輕氣道炎癥水平,表現(xiàn)為LR-MSCs干預(yù)組的氣道高反應(yīng)性Penh值較哮喘模型組明顯下降,LR-MSCs干預(yù)組BALF中Th2型炎癥因子IL4、IL-5、IL-13的水平,BALF中細胞總數(shù)、中性粒細胞計數(shù)、嗜酸性粒細胞計數(shù)以及單核細胞計數(shù),血清炎癥因子中OVAs IgE以及OVAs IgG1水平明顯低于哮喘模型組,且LR-MSCs干預(yù)組較哮喘模型組支氣管壁及血管周圍炎癥細胞浸潤不明顯,而正常對照組與LR-MSCs對照組之間氣道高反應(yīng)性與氣道炎癥水平無明顯差異。結(jié)論:(1)成功分離獲得肺間充質(zhì)干細胞LR-MSCs,提示小鼠肺內(nèi)存在LR-MSCs。(2)LR-MSCs干預(yù)能在一定程度上減輕哮喘小鼠氣道炎癥及氣道高反應(yīng)性,可望成為治療哮喘的新途徑,具有廣闊應(yīng)用前景。
[Abstract]:Objective: airway inflammation and airway hyperresponsiveness are two key pathophysiological features of bronchial asthma. Previous studies have found that mesenchymal stem cells have an effective therapeutic effect on bronchial asthma. In this study, we isolated, cultured and identified mouse pulmonary mesenchymal stem cells (LR-MSCs), and explored the effects of tail vein injection of LR-MSCs on airway inflammation and airway hyperresponsiveness in asthmatic mice and a new approach to the treatment of asthma. Methods: Sca-1 CD31-CD45- cell group (LR-MSCs) was isolated from mouse lung tissue single cell suspension digested by enzyme mixture by flow cytometry and cultured in vitro. The stable passage of LR-MSCs was detected by flow cytometry and the surface markers of mesenchymal stem cells were identified. The acute asthma model was established by intraperitoneal injection and repeated atomization inhalation of chicken ovalbumin OVA, and the normal control group was established by NS, and the LR-MSCs intervention group was established by tail vein injection of LR-MSCs into the asthmatic model mice. LR-MSCs was injected into tail vein of mice treated with NS to establish LR-MSCs control group. The airway hyperresponsiveness (Penh) of mice in each group was measured by BUXCO noninvasive pulmonary function detector. The BALF, count of bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was obtained by bronchoalveolar lavage. The total number of BALF cells, the number of neutrophils, the number of eosinophilic granulocytes and the number of monocytes in each group; The expression of Th2 type inflammatory factor (IL4,IL-5,IL-13) in BALF of each group was determined; the levels of OVAsIgE and OVAsIgG1 in serum of each group were measured by ELISA; the changes of gross tissue and the degree of inflammatory infiltration were observed by HE staining. Results: (1) Sca-1 CD31-CD45- cells were isolated and cultured in vitro, and the expression of surface markers of mesenchymal stem cells (MSCs) on the surface of Sca-1 CD31-CD45- cells was detected by flow cytometry. The positive expression of CD29,Sca-1, and CD45, in Sca-1 CD31-CD45- cell group, that is, LR-MSCs, were consistent with the expression of surface markers of mesenchymal stem cells. (2) the acute asthma model was successfully established by OVA sensitization and stimulation. The results showed that the airway hyperreactive Penh value in the asthma model group was significantly higher than that in the normal control group, and the level of Th2 type inflammatory factor IL4,IL-5,IL-13 in BALF was significantly higher than that in the normal control group. The levels of total cell count, neutrophil count, eosinophilic granulocyte count, monocyte count, serum inflammatory factor OVAsIgE and OVAsIgG1 in BALF were significantly higher than those in the control group. Compared with the normal control group, a large number of inflammatory cells infiltrated the bronchial wall and blood vessels in the asthmatic model group. (3) injection of LR-MSCs via caudal vein could effectively reduce airway hyperresponsiveness and reduce airway inflammation, which showed that the Penh value of airway hyperresponsiveness in LR-MSCs intervention group was significantly lower than that in asthmatic model group. The levels of Th2 type inflammatory factor IL4,IL-5,IL-13 in BALF, the total number of cells in BALF, neutrophil count, eosinophil count and monocyte count in LR-MSCs intervention group. The levels of OVAs IgE and OVAs IgG1 in serum inflammatory factors were significantly lower than those in asthmatic model group, and the infiltration of inflammatory cells in bronchial wall and blood vessel in LR-MSCs intervention group was less than that in asthma model group. There was no significant difference in airway hyperresponsiveness and airway inflammation between normal control group and LR-MSCs control group. Conclusion: (1) the successful isolation of lung mesenchymal stem cells (LR-MSCs,) suggests that the presence of LR-MSCs. (2) LR-MSCs can alleviate airway inflammation and airway hyperresponsiveness in asthmatic mice to some extent. It is expected to be a new approach to the treatment of asthma and has broad application prospects.
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R562.25

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 謝高強,程顯聲,李清,徐希勝,謝寶元,武陽豐;6年間氣道高反應(yīng)性對重度吸煙者慢性阻塞性肺疾病發(fā)病的影響[J];中國分子心臟病學雜志;2005年05期

2 楊金梅;陳媛媛;柴霞;;20例氣道高反應(yīng)性官兵的預(yù)防治療[J];社區(qū)醫(yī)學雜志;2006年20期

3 向旭東,鄧平,劉國平,陳伯仲,陳平;長期咀嚼檳榔者氣道高反應(yīng)性的變化[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2001年03期

4 李清,謝高強,程顯聲,徐希勝,謝寶元,李瑤,李亞輝,李智,王馨;4年間氣道高反應(yīng)性對慢性阻塞性肺疾病發(fā)病影響的隨訪研究[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2001年10期

5 鄭勁平,李敏然,安嘉穎,羅定芬;老年人的氣道高反應(yīng)性分析[J];中國老年學雜志;2001年06期

6 金永堂,徐迎春,張文兵,張秀清,王時敏,孫美蓮,徐希平;氣道高反應(yīng)性與皮膚過敏反應(yīng)之間關(guān)系分析[J];衛(wèi)生研究;2002年05期

7 夏利萍,周一平;氣道高反應(yīng)性測定及臨床應(yīng)用[J];實用診斷與治療雜志;2003年03期

8 陳雪芹,曹霞,楊炯,曹作炎,劉珍連;白介素-1β致豚鼠氣道高反應(yīng)性作用機制的研究[J];中國免疫學雜志;2004年10期

9 翟文治;;氣道高反應(yīng)性的機理與檢測[J];廣后醫(yī)學;1987年02期

10 李國順，任壽安，張曉云;氣道高反應(yīng)性的臨床評價[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;1994年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 秦曉群;;氣道高反應(yīng)機制的“上皮失穩(wěn)態(tài)學說”[A];湖南省生理科學會2008年度學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2008年

2 劉艷紅;寇電波;孫艷玲;李全國;;氣管鏡對氣道高反應(yīng)性疾病的診斷治療價值及安全性探討[A];中華醫(yī)學會呼吸病學年會——2013第十四次全國呼吸病學學術(shù)會議論文匯編[C];2013年

3 劉曉微;農(nóng)光民;蔣敏;劉宏涌;彭方;劉靜;;中性粒細胞性支氣管哮喘小鼠模型氣道高反應(yīng)的研究[A];中華醫(yī)學會第十七次全國兒科學術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2012年

4 劉艷紅;寇電波;孫艷玲;呂秀;;氣道高反應(yīng)患者支氣管鏡檢查前兩種吸入麻醉方法比較[A];第十一次全國中西醫(yī)結(jié)合防治呼吸系統(tǒng)疾病學術(shù)研討會論文集[C];2010年

5 怓新宇;李圣青;劉穎格;史皆然;陳衛(wèi)強;趙峰;戴艷麗;吳昌歸;;淋巴細胞活化基因3免疫球蛋白對過敏性支氣管哮喘小鼠的Th1/Th2細胞因子和氣道高反應(yīng)性的影響[A];中華醫(yī)學會第五次全國哮喘學術(shù)會議暨中國哮喘聯(lián)盟第一次大會論文匯編[C];2006年

6 公丕花;高占成;胡萍;董建強;;變應(yīng)原所致小鼠氣道高反應(yīng)性的動態(tài)演變和布地奈德干預(yù)的影響[A];中華醫(yī)學會第五次全國哮喘學術(shù)會議暨中國哮喘聯(lián)盟第一次大會論文匯編[C];2006年

7 劉松林;陳啟微;劉兮;左翔;向陽;秦曉群;;肥胖對小鼠氣道高反應(yīng)的影響[A];中南地區(qū)第八屆生理學學術(shù)大會論文摘要匯編[C];2012年

8 朱寶玉;朱敏立;;關(guān)于慢性咳嗽與氣道高反應(yīng)性關(guān)系的研究[A];第四屆中國中西醫(yī)結(jié)合變態(tài)反應(yīng)學術(shù)會議論文匯編[C];2009年

9 張少華;;電壓門控性鉀通道在吸煙誘發(fā)氣道高反應(yīng)性機制中的作用[A];湖北省暨武漢市病理生理學會第十二屆學術(shù)年會論文匯編[C];2004年

10 王連明;董麗芹;宋彥海;關(guān)雨;于文竹;;Annexin 1 N末端肽Ac2-26可抑制實驗大鼠的氣道高反應(yīng)性[A];中華醫(yī)學會第七次全國中青年檢驗醫(yī)學學術(shù)會議論文匯編[C];2012年

相關(guān)重要報紙文章 前4條

1 劉貴云;“氣道高反應(yīng)性”是咋回事[N];大眾衛(wèi)生報;2003年

2 柏京;控制氣道炎癥很關(guān)鍵[N];大眾衛(wèi)生報;2009年

3 高國起;監(jiān)測哮喘兒氣道炎癥變化有新指標[N];中國醫(yī)藥報;2002年

4 高國起 王省;監(jiān)測哮喘患兒氣道炎癥又有新突破[N];科技日報;2003年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 謝佳星;氣道高反應(yīng)性發(fā)生條件及機制的探討[D];廣州醫(yī)學院;2009年

2 王偉玲;載脂蛋白A-I及其模擬肽D-4F對氣道炎癥及氣道高反應(yīng)性的作用的實驗研究[D];山東大學;2011年

3 張方琪;聯(lián)合拮抗IL-13及IL-25對哮喘小鼠氣道炎癥及氣道重塑抑制作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2017年

4 雷瑩;器官培養(yǎng)和吸煙模型鼠的氣道高反應(yīng)性及其平滑肌G-蛋白偶聯(lián)受體的變化[D];西安交通大學;2010年

5 王勇;針刺調(diào)節(jié)Notch信號介導氣道高反應(yīng)Foxp3/RoR γ t失衡的機制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2015年

6 車鸞卿;氣道炎癥性疾病中炎癥小體調(diào)控IL-17A~+γδT細胞/中性粒細胞的分子機制研究[D];浙江大學;2015年

7 龍曉茹;RSV感染裸鼠致急慢性氣道炎癥及AHR的機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

8 慈鑫鑫;杜鵑素對卵蛋白和內(nèi)毒素誘導氣道炎癥的作用及機制研究[D];吉林大學;2012年

9 閆海波;CXCR3基因在哮喘小鼠氣道高反應(yīng)性和氣道炎癥中的作用[D];延邊大學;2012年

10 張鈺群;團體認知行為治療干預(yù)哮喘的療效機制[D];東南大學;2017年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 官民婕;尾靜脈注射LR-MSCs對哮喘小鼠氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性的影響[D];暨南大學;2017年

2 張印;楊明會教授治療氣道高反應(yīng)性咳嗽的臨證經(jīng)驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2008年

3 支艷;楊明會教授治療氣道高反應(yīng)性咳嗽的臨證經(jīng)驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2010年

4 劉曉微;中性粒細胞性支氣管哮喘小鼠模型氣道高反應(yīng)的研究[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

5 丁武;無創(chuàng)法測量小鼠氣道高反應(yīng)性[D];浙江大學;2007年

6 胡曉燕;氯喹對哮喘小鼠的氣道炎癥及氣道高反應(yīng)性的作用及機制[D];重慶醫(yī)科大學;2014年

7 林蓮花;促紅細胞生成素對哮喘小鼠的抗炎作用和氣道高反應(yīng)性影響[D];延邊大學;2013年

8 莊月容;不同頻次針刺預(yù)處理對OVA致敏氣道高反應(yīng)性小鼠的炎癥調(diào)節(jié)作用[D];廣州中醫(yī)藥大學;2015年

9 任雁宏;實驗性氣道高反應(yīng)動物模型肺內(nèi)神經(jīng)肽及其受體時空分布[D];中南大學;2003年

10 史亮;毒蕈堿受體功能異常誘導哮喘豚鼠氣道高反應(yīng)性的分子機理[D];第一軍醫(yī)大學;2005年

，

本文編號：2350883