本文關(guān)鍵詞：肺炎衣原體感染通過(guò)激活Racl誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞遷移，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《天津醫(yī)科大學(xué)》 2013年

肺炎衣原體感染通過(guò)激活Racl誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞遷移

張俊霞  

【摘要】：目的 利用肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae, C.pn)體外感染大鼠原代血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cell, VSMC)模型,觀察Racl活化在C.pn感染誘導(dǎo)VSMC遷移中的作用以及在此過(guò)程中Racl活化與PI3K、IQGAP1的聯(lián)系,探討其相關(guān)分子機(jī)制。 方法 1.C.pn增殖培養(yǎng)后體外感染大鼠原代VSMC; 2. GST pull-down實(shí)驗(yàn)檢測(cè)C.pn感染VSMC后不同時(shí)間點(diǎn)Racl的活性； 3.用Racl特異性抑制劑NSC23766抑制Rac1的活性,GST pull-down實(shí)驗(yàn)檢測(cè)VSMC內(nèi)GTP-Racl的表達(dá)變化,Wound-healing實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)觀察VSMC遷移能力的改變； 4.用PI3K特異性抑制劑LY294002抑制PI3K的活性,GST pull-down實(shí)驗(yàn)檢測(cè)VSMC內(nèi)Rac1活性的變化,明確PI3K在C.pn感染誘導(dǎo)VSMC內(nèi)Rac1活化過(guò)程中的作用； 5.用Rac1特異性抑制劑NSC23766抑制Racl的活性,Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)VSMC內(nèi)IQGAP1表達(dá)的變化,明確C.pn感染后VSMC內(nèi)Racl活化對(duì)其下游效應(yīng)蛋白IQGAP1的影響。 結(jié)果 1.目的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大腸桿菌,體外制備足量有效與GTP-Racl特異結(jié)合的GST-PBD融合蛋白；分別于C.pn感染VSMC0h、0.5h、1h、2h、3h、6h、8h和12h后提取總蛋白,GST pull-down實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,C.pn感染VSMC0.5h后GTP-Racl表達(dá)水平開始升高；隨著感染時(shí)間延長(zhǎng)其表達(dá)水平逐漸升高,3h左右達(dá)高峰,8h開始下降,并持續(xù)至12h；而各時(shí)間點(diǎn)VSMC中總Racl表達(dá)水平無(wú)顯著差異。 2. GST pull-down實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,使用Rac1特異性抑制劑NSC23766預(yù)處理VSMC后,C.pn感染誘導(dǎo)的VSMC內(nèi)GTP-Racl的表達(dá)水平明顯降低。用NSC23766預(yù)處理的C.pn感染組的VSMC內(nèi)GTP-Racl的表達(dá)水平較單純C.pn感染組明顯降低(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各組VSMC中總Rac1表達(dá)無(wú)顯著差異。 3. Wound-healing實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,NSC23766預(yù)處理的C.pn感染組VSMC向劃痕中央遷移的面積明顯小于單純C.pn感染組(P0.05)；Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,NSC23766預(yù)處理的C.pn感染組VSMC的穿膜細(xì)胞數(shù)明顯低于單純C.pn感染組(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.使用PI3K抑制劑LY294002預(yù)處理VSMC, GST pull-down實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,LY294002預(yù)處理的C.pn感染組VSMC內(nèi)GTP-Racl的表達(dá)水平較單純C.pn感染組明顯降低(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各組VSMC中總Rac1表達(dá)無(wú)顯著差異。 5.使用Rac1特異性抑制劑NSC23766預(yù)處理VSMC, Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,50μMNSC23766預(yù)處理的C.pn感染組VSMC內(nèi)IQGAP1的表達(dá)水平雖較單純C.pn感染組有所下降(P0.05),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；100μMNSC23766預(yù)處理的C.pn感染組VSMC內(nèi)IQGAP1的表達(dá)水平較單純C.pn感染組則明顯降低(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 C.pn感染可能通過(guò)激活Rac1促進(jìn)VSMC遷移,且在此過(guò)程中Rac1的活化依賴PI3K的酶活性,活化的Rac1可影響其下游效應(yīng)蛋白IQGAP1的表達(dá),即C.pn感染可能通過(guò)PI3K活化Rac1進(jìn)而激活I(lǐng)QGAP1促進(jìn)VSMC遷移。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R563.19
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

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