【摘要】：第一章Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞在肺功能正常吸煙者及慢性阻塞性肺疾病患者肺部組織中的表達及意義 目的：本研究旨在觀察Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cell, Treg細胞)在肺功能正常的吸煙者和吸煙的穩(wěn)定期慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者肺組織中的表達,并探討Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞在COPD肺部炎癥反應(yīng)及獲得性免疫反應(yīng)發(fā)生機制中的作用。 方法：將需手術(shù)治療的周圍型肺癌患者分為肺功能正常非吸煙組(N組,10例)、肺功能正常吸煙組(S組,10例)、吸煙穩(wěn)定期COPD組(COPD組,10例)。于手術(shù)切除標本中選取距肺癌病灶5cm以上的新鮮正常肺組織,蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin, HE)染色觀察各組平均肺泡面積,免疫組化法檢測CD4+T細胞、Foxp3+T細胞在肺泡壁的表達,熒光定量PCR法和Western blot法檢測肺組織勻漿中Foxp3mRNA和蛋白表達水平,分析Foxp3+T細胞與肺泡肺氣腫破壞和肺功能降低的相關(guān)關(guān)系。 結(jié)果：COPD組平均肺泡面積(152345±24497μ m2)明顯大于S組(106551±15815μ m2)和N組(50708±14125μ m2),S組與N組對比也有明顯差異(P值均0.05)。肺泡壁CD4+T細胞數(shù)在COPD組(22±8個/m)明顯高于S組(16±6個/mm)和N組(6±2個/mm)；Foxp3+T細胞在COPD組(3±1個/mm)明顯低于S組(4±1個/mm)和N組(5±1個/mm),并且S組明顯低于N組(P值均0.05)。肺組織勻漿中Foxp3的mRNA表達水平在COPD組(0.431±0.109)明顯降低,其次是S組(0.930±0.413),在N組為1.391±0.312(P值均0.05)。肺組織勻漿Foxp3蛋白表達水平與mRNA表達結(jié)果一致,在N組為0.824±0.180,S組0.504±0.218,COPD組0.307±0.051(P值均0.05)。肺泡壁上表達的Foxp3+細胞與CD4+細胞表達呈負相關(guān)(R=-0.681,P0.001),與平均肺泡面積呈負相關(guān)(R=-0.797,P0.001)。肺組織勻漿中Foxp3mRNA和蛋白含量分別與FEV1%pred呈正相關(guān)(R=0.601,P0.001；R=0.573,P=0.001)。 結(jié)論：Foxp3+T細胞在肺功能正常吸煙者和穩(wěn)定期COPD患者肺部表達明顯減少,與肺泡壁肺氣腫破壞程度和肺功能降低密切相關(guān),提示Foxp3+T細胞減少參與了COPD肺部炎癥和獲得性免疫失調(diào)。 第二章調(diào)節(jié)性T細胞核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3在肺功能正常吸煙者和 不同分級慢性阻塞性肺疾病患者外周血的表達及意義 目的：本研究旨在觀察調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cell,Treg細胞)核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3在肺功能正常吸煙者和不同分級慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者外周血中的表達,并探討其意義。 方法：以病人外周血為研究對象,分為4組即肺功能正常非吸煙組(N組,20例)、肺功能正常吸煙組(S組,20例)、吸煙穩(wěn)定期COPD1-2級組(COPD1-2級組,20例),吸煙穩(wěn)定期COPD3-4級組(COPD3-4級組,20例)。收集病人外周血做熒光定量PCR,檢測Foxp3mRNA表達水平,分析其與COPD分級、肺功能降低的關(guān)系。 結(jié)果：外周血Foxp3的mRNA表達水平在COPD3-4組(0.498±0.235)和COPD1-2組0.931±0.237)明顯降低,其次是S組(1.215±0.258),在N組表達最高(1.452±0.254),四組間兩兩比較均有差別(P值均0.05),并且Foxp3mRNA表達水平與FEV1%pred呈正相關(guān)關(guān)系(R=0.758,P0.001)。 結(jié)論：Foxp3mRNA表達水平在吸煙肺功能正常者和COPD病人體內(nèi)表達明顯降低,并且隨著COPD病情分級加重而降低更明顯,提示Foxp3+Treg細胞減少很可能與COPD病情嚴重程度密切相關(guān)。 第三章調(diào)節(jié)性T細胞核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3單核苷酸多態(tài)性與慢性阻塞性肺疾病關(guān)聯(lián)的研究 目的：探討調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cell,Treg細胞)核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNP)與慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)的關(guān)系,以及SNP出現(xiàn)的相關(guān)危險因素。 方法：以病人外周血為研究對象,分為4組即肺功能正常非吸煙組(N組,61例)、肺功能正常吸煙組(S組,81例)、吸煙穩(wěn)定期COPD1-2級組(COPD1-2級組,65例),吸煙穩(wěn)定期COPD3-4級組(COPD3-4級組,117例),采用Taqman探針法熒光定量PCR對Foxp3基因四個位點rs2280883. rs3761548、rs3761549、rs5902434進行基因分型。 結(jié)果：FOXP3基因四個SNP位點均符合哈迪-溫伯格(Hardy-Weinberg)遺傳平衡定律。SNP位點rs5902434在COPD3-4級組,COPD1-2級組,S組,N組中分布有差異(P0.05)。logistic多因素回歸分析發(fā)現(xiàn)攜帶-/-基因型個體罹患COPD1-2級和3-4級風(fēng)險均降低(COPD1-2級：OR=0.278,95%CI=0.079-0.974;COPD3-4級：OR=0.235,95%CI=0.074-0.747)。-／-基因型對FEVl%pred=30-50的病人有保護作用(OR=0.222,95%CI=0.094-0.525);對FEV1/FVC50和FEV1/FVC=50-70的病人均有保護作用(FEV1/FVC50:OR=0.295,95%CI=0.130-0.666; FEV1/FVC=50-70:OR=0.337,95%CI=0.131-0.866).-/ATT基因型對FEV1%pred=30-50的病人有保護作用(OR=0.359,95%CI=0.150-0.863)。單倍體分析發(fā)現(xiàn)-單倍體對吸煙的非COPD者易感(OR=1.746,95%CI=1.048-2.914);-單倍體對FEV1%pred=30-50和FEV1/FVC50的病人均有保護作用(FEV1%pred=30-50:OR=0.582,95%CI=0.358-0.946; FEV1/FVC50:OR=0.622,95%CI=0.403-0.961).對吸煙史、年齡、BMI、民族因素綜合分析發(fā)現(xiàn),非漢族人群較漢族人群更容易出現(xiàn)-/ATT基因型(OR=2.277,95%CI=1.022-5.072)。 結(jié)論：FOXP3基因位點rs5902434與男性罹患COPD有關(guān),并且-/-基因型和-單倍體型對COPD病人及肺功能降低有保護作用；但吸煙和年齡因素并非該位點突變的影響因素。該結(jié)果提示Foxp3+Treg細胞單核苷酸多態(tài)性可能是COPD發(fā)病的上游危險因素,其多態(tài)性不受吸煙和年齡等COPD危險因素的影響。
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【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R563.9

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1 張飚;張p，

本文編號：2285457