【摘要】：研究背景： 在哮喘病理發(fā)展過(guò)程中，氣道平滑肌細(xì)胞（ASMCs）不僅數(shù)量的增加，還有功能的改變；此外還有有細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）量的改變和組成的改變。ASMCs能分泌TGF-β、eotaxin等多種免疫調(diào)節(jié)因子，具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能。在哮喘病人氣道中，纖維粘連蛋白、Ⅰ型膠原和層粘蛋白等明顯增加。纖維粘連蛋白、Ⅰ型膠原促進(jìn)ASMCs的增殖及分泌eotaxin等免疫因子，層粘蛋白則抑制ASMCs的增殖。但層粘連蛋白對(duì)ASMCs分泌功能的影響尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。層粘連蛋白在黑色素瘤細(xì)胞中能通過(guò)增加MKP-1的表達(dá)抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，由此，層粘連蛋白是否可以通過(guò)增加MKP-1的表達(dá)來(lái)影響氣道平滑肌細(xì)胞分泌功能。整合素是ECM與細(xì)胞骨架及信號(hào)通路連接的橋梁。整合素α7β1表達(dá)于氣道平滑肌細(xì)胞等細(xì)胞，整合素α7特異性的與層粘連蛋白結(jié)合，因此，層粘連蛋白是否通過(guò)整合素α7β1影響氣道平滑肌細(xì)胞分泌功能。 目的： 探討層粘連蛋白-整合素α7β1信號(hào)通路是否能影響ASMCs表達(dá)及分泌TGF-β1、eotaxin-1等因子及其機(jī)制。并探討層粘連蛋白對(duì)哮喘小鼠的作用。 方法： 1）細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)出人氣道平滑肌細(xì)胞（HASMCs），將2-5代 的HASMCs用于實(shí)驗(yàn)。將HASMCs接種于層粘連蛋白（10ug/ml）包被的培養(yǎng)板及空白培養(yǎng)板中，用整合素α7單抗、β1單抗阻斷層粘連蛋白與HASMCs表面的整合素α7β1結(jié)合；用IL-13（20ng/ml）刺激HASMCs模擬哮喘環(huán)境。分為6組：空白組、IL-13組、IL-13+LN組、LN組、IL-13+LN+antiα7組、IL-13+LN+antiβ1組。通過(guò)realtimePCR法檢測(cè)HASMCs中TGF-β1、eotaxin-1、MKP-1的mRNA表達(dá)，ELISA法檢測(cè)HASMCs培養(yǎng)上清中TGF-β1、eotaxin-1蛋白，通過(guò)WesternBlot檢測(cè)HASMCs中MKP-1蛋白表達(dá)。 2）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：建立BALB/c小鼠哮喘模型，分3組：正常對(duì)照組（用生理鹽水代 替OVA）,哮喘組，層粘連蛋白組（每次激發(fā)前2h用層粘連蛋白200ug預(yù)處理）。用HE染色及PAS染色觀察小鼠氣道炎癥及杯狀細(xì)胞增生情況，用ELISA法檢測(cè)小鼠肺泡灌洗液（BALF）中IL-4的表達(dá)。 結(jié)果： 1）層粘連蛋白-整合素α7β1抑制IL-13誘導(dǎo)的HASMCsTGF-β1、eotaxin-1mRNA表達(dá)及蛋白分泌，增加MKP-1mRNA表達(dá)及蛋白表達(dá)。IL-13組與空白組比較：TGF- β1、eotaxin-1mRNA表達(dá)及蛋白分泌增加（p0.05），MKP-1mRNA及蛋白表達(dá)減少（p0.05）；IL-13+LN組與IL-13組比較：TGF-β1、eotaxin-1mRNA表達(dá)及蛋白分泌減少（p0.05），MKP-1mRNA及蛋白表達(dá)增加（p0.05）；IL-13+LN+antiα7組、IL-13+LN+antiβ1組與IL-13+LN組比較：TGF-β1、eotaxin-1mRNA表達(dá)及蛋白分泌增加（p0.05），MKP-1mRNA及蛋白表達(dá)減少（p0.05）。 2）層粘連蛋白減輕哮喘氣道炎癥及減少杯狀細(xì)胞增生，減少BALF中的IL-4，對(duì)哮喘具有保護(hù)作用。哮喘組與正常對(duì)照組比較，，氣道炎癥明顯加重，杯狀細(xì)胞明顯增生，BALF中IL-4增加（p0.05）；層粘連蛋白組與哮喘組比較，氣道炎癥明顯減輕，杯狀細(xì)胞明顯減少，BALF中IL-4減少（p0.05）。 結(jié)論： 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明層粘連蛋白能抑制IL-13誘導(dǎo)的HASMCs分泌TGF-β1、eotaxin-1水平，增加MKP-1表達(dá)；整合素α7單抗、β1單抗可以部分阻斷層粘連蛋白對(duì)HASMCs的這種作用。層粘連蛋白減輕哮喘氣道炎癥及杯狀細(xì)胞增生，減少BALF中的IL-4。因此，層粘連蛋白-整合素α7β1可以抑制HASMCs細(xì)胞因子的合成及分泌，可能通過(guò)增加MKP-1表達(dá)發(fā)揮作用。層粘連蛋白可以減輕氣道炎癥，對(duì)哮喘具有保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R562.25

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 黃艷媚;邱晨;;整合素介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年18期

2 文文;賴國(guó)祥;;慢性阻塞性肺疾病氣道重構(gòu)的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2008年11期

3 高平;陳正賢;陳娉娉;何碧芳;黎秀玉;;EBUS對(duì)慢性阻塞性肺疾病氣道重構(gòu)的研究[J];臨床肺科雜志;2012年07期

4 朱慧志;韓明向;李澤庚;丁小娟;張念志;陳煒;;補(bǔ)肺通絡(luò)方對(duì)慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的保護(hù)作用[J];中國(guó)臨床保健雜志;2010年04期

5 毛麗君;劉相德;Stephen I.Rennard;;1-磷酸鞘氨醇對(duì)人胚胎肺纖維細(xì)胞增殖作用的影響[J];山東醫(yī)藥;2008年05期

6 崔世超;于文成;石瑩;;氣道平滑肌細(xì)胞在COPD氣道重塑發(fā)病中的作用[J];齊魯醫(yī)學(xué)雜志;2012年01期

7 龍發(fā);鐘雪鶯;張永昶;戚t熡

本文編號(hào)：2275448