本文選題：肺泡巨噬細胞 + 脂多糖��； 參考：《第二軍醫(yī)大學》2017年碩士論文

【摘要】：急性呼吸窘迫綜合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)是一種臨床上常見的危重病,是各種因素導致的進行性的急性呼吸衰竭,臨床特征是頑固性低氧血癥,ARDS主要是肺內嚴重的炎癥反應引起肺泡細胞的屏障被破壞,大量的炎性細胞如中性粒細胞等大量涌入肺泡內,而這些炎性細胞能釋放大量炎性介質和細胞毒性物質,從而造成肺泡內富含蛋白質的液體聚集,Ⅱ型肺泡上皮細胞表面活性物質損害,影響肺的換氣功能。因為ARDS是臨床上一類發(fā)病率和死亡率都較高的綜合征,因此對ARDS的研究一直是熱門,雖然經過多年研究,但發(fā)病機制仍不明確,有效的治療手段缺乏,基礎研究和臨床應用仍有很多問題待解決。miRNA作為非編碼RNA一員,在體內的主要作用是調控基因的表達,miRNA能調控多種信號通路和細胞的分化增值過程,因此與許多正常和異常的病理生理過程密切相關,參與許多疾病的發(fā)生發(fā)展。大量研究發(fā)現,多種miRNA(如miR-146a、miR-155、miR-16等)與ARDS的進展和轉歸密切相關。高遷徙族蛋白1(high-mobility group box 1,HMGB1)作為研究熱門的炎癥因子,其在炎癥反應中升高較其他炎性因子晚,但持續(xù)時間長,在炎癥反應中起到重要作用。HMGB1可通過多種細胞信號通路(如TLRs、RAGE、cPKC等通路)參與炎癥反應,而miRNA能參與調節(jié)多種信號通路。因此,我們進行此實驗,以探究miR-142-3p對脂多糖誘導的大鼠肺泡巨噬細胞炎癥反應的干預作用,可能會進一步完善ARDS診斷中的生物學標記及分子學的治療手段,為ARDS的診療提供新方向。第一部分LPS誘導肺泡巨噬細胞炎癥中mi R-142-3P與HMGB1表達水平的研究目的探討miR-142-3P與HMGB1均參與LPS誘導肺泡巨噬細胞炎癥反應。方法通過體外培養(yǎng)NR8383細胞,加入含不同濃度(0、100、1000、10000mg/mL)的LPS分別刺激0h、6h、24h、48h,收集不同濃度不同時間點的上清液和細胞。細胞提取RNA,蛋白質印跡法檢測細胞中HMGB1蛋白的表達水平,RT-qPCR檢測細胞中miR-142-3p及炎癥因子的表達量,ELISA檢測上清液中HMGB1的含量。結果與未受到LPS刺激的細胞(即0 ng/mL組)相比,大鼠肺泡巨噬細胞通過100ng/mL、1000 ng/mL、10000ng/mL的LPS刺激后,細胞中的TNF-α、IL-6、IL-1β的表達量明顯增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),100 ng/ml的LPS能夠有效刺激各種炎癥因子的表達,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。miR-142-3p在LPS刺激后表達量較對照組增多,在48 h達到高峰,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);HMGB1的表達量至24 h達到高峰,而至48 h時HMGB1的表達又下降到一定水平,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論100ng/mL的LPS能有效刺激肺泡巨噬細胞的炎癥反應過程。miR-142-3p和HMGB1均參與了LPS誘導的肺泡巨噬細胞炎癥反應過程,且兩者可能存在調控關系。第二部分miR-142-3p通過HMGB1負向調控LPS誘導的大鼠肺泡巨噬細胞炎癥反應過程目的探討LPS誘導肺泡巨噬細胞炎癥中miRNA-142-3p對HMGB1表達水平的調控作用。方法體外培養(yǎng)NR8383細胞,不同濃度的miRNA-142-3p minics分別轉染大鼠肺泡巨噬細胞24h,分別收集不同minics濃度轉染組細胞一孔,RT-qPCR檢測細胞中miR-142-3p的表達量,剩余孔細胞加入100ng/ml的LPS刺激0h、6h、24h、48h后,收集不同濃度不同時間點的上清液和細胞。細胞提取RNA,RT-qPCR檢測細胞中miR-142-3p及炎癥因子的表達量,ELISA檢測上清液中HMGB1的含量。結果大鼠AM NR8383細胞轉染miR-142-3p mimics后,檢測NR8383細胞中miR-142-3p表達量,結果顯示,與未轉染組相比,轉染miR-142-3p mimic后,NR8383細胞中miR-142-3p的表達量明顯升高(P0.05)。在大鼠AM NR8383細胞轉染miR-142-3p mimics后,檢測NR8383細胞中HMGB1 mRNA的表達水平和細胞培養(yǎng)液及細胞中HMGB1的蛋白表達。結果顯示,轉染miR-142-3p mimic后,NR8383細胞中miR-142-3p的表達升高(P0.05),而HMGB1 mRNA及蛋白的表達均降低(P0.05)。轉染miR-142-3p mimics 24 h后,LPS誘導AM0、6、24、48 h時,ELISA試劑盒分別檢測轉染組和未轉染組上清中HMGB1的表達量。結果顯示,培養(yǎng)0、6、24 h時miR-142-3p mimic轉染組中HMGB1的含量均低于未轉染組(P0.05)。大鼠AM轉染miR-142-3p mimics后,LPS誘導AM 0、6、24、48 h時,qPCR檢測AM中TNF-α、IL-6、IL-1β和MIP-2βmRNA的表達水平。結果(圖6)顯示,與未轉染組相比,轉染miR-142-3p mimic后NR8383細胞中TNF-α、IL-6、IL-1β以及MIP-2βmRNA的表達均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論LPS體外誘導大鼠AM的炎癥反應過程中,miR-142-3p可能是通過負向調控HMGB1的表達發(fā)揮對炎癥反應的干預作用。
[Abstract]:Acute respiratory distress syndrome ( ARDS ) is a common type of acute respiratory failure , which is a common type of acute respiratory failure due to various factors . The expression of miR - 142 - 3P in NR8383 cells was significantly higher than that in control group ( P0.05 ) . The expression of miR - 142 - 3P in NR8383 cells was significantly higher than that in control group ( P0.05 ) . Results ( FIG . 6 ) showed that the expression of TNF - 偽 , IL - 6 , IL - 1尾 and MIP - 2尾 mRNA in the transfected group was lower than that in untransfected group ( P0.05 ) .
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R563.8

【參考文獻】

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本文編號：2118611