研究背景和研究目的：哮喘是一種氣道的慢性炎癥性疾病,以反復發(fā)作的喘息、胸悶、咳嗽,炎癥細胞的活化和呼吸道重塑為特點。吸入型糖皮質激素(ICS)和長效p2受體激動劑(LABA)是哮喘治療中的主要藥物。近年來發(fā)現(xiàn),ICS和LABA聯(lián)合應用是治療中重度哮喘最為有效且科學合理的方法。目前,環(huán)索奈德與福莫特羅的聯(lián)合應用在哮喘臨床治療中已有報道。但兩藥聯(lián)合應用的藥理學機制尚不明確,本實驗通過離體和整體實驗方法研究了環(huán)索奈德與福莫特羅在哮喘治療中的協(xié)同作用及機制。 方法： 1.整體試驗：構建小鼠哮喘模型。Balb/c小鼠在第0天與第14天用10μg/只小鼠的卵白蛋白(OVA)與2mg氫氧化鋁混溶后皮下注射于小鼠的腳掌、頸部、背部與腹股溝致敏。在第22-28天,將小鼠放置于有機塑料盒內,用霧化吸入器氣道霧化吸入30分鐘的OVA抗原(10mg/mL).第29天治療組氣道滴入給藥3h后,用整體體積描記系統(tǒng)測定氣道反應性,分別用3.125、6.25、12.5、25、50mg/mL的乙酰甲膽堿霧化吸入激發(fā),測定相應濃度下氣道呼氣間歇(Penh)值。之后取肺泡灌洗液進行細胞計數(shù),取左上肺提取mRNA。 2.離體試驗：MTT法檢測環(huán)索奈德代謝物與福莫特羅對RBL-2H3細胞活性的影響。用抗原抗體復合物誘導RBL-2H3細胞構建肥大細胞炎癥模型。用實時RT-PCR和ELISA檢測IL-4, IL-13mRNA和蛋白的表達。用Western Blot檢測JNK信號通路。 結果： 1.整體實驗結果： 1)在OVA誘導的小鼠哮喘模型中,環(huán)索奈德和福莫特羅可分別呈劑量依賴性的抑制乙酰甲膽堿(3.125-50mg/mL)誘導的Penh值的增加。2)環(huán)索奈德(0.3mg/kg)分別與福莫特羅(7,14,28μg/kg)聯(lián)用對乙酰甲膽堿(6.25-50mg/mL)引起的Penh值升高,與單劑量相比具有協(xié)同抑制作用；環(huán)索奈德(1mg/kg)分別與福莫特羅(7,14,28ug/kg)聯(lián)用對乙酰膽堿(3.125-50mg/mL)引起的Penh值升高,與單劑量相比無明顯的協(xié)同抑制作用。3)環(huán)索奈德和福莫特羅可分別呈劑量依賴性的抑制哮喘小鼠肺部炎癥細胞的增多。4)環(huán)索奈德(0.3,1mg/kg)分別與福莫特羅(7,14,28μg/kg)聯(lián)用,與單劑量相比對哮喘小鼠肺部炎癥的增多有明顯的協(xié)同抑制作用。5)福莫特羅對哮喘小鼠肺組織中IL-4mRNA表達的升高呈計量依賴性抑制；環(huán)索奈德在濃度0.3mg/kg時對IL-4mRNA表達的升高有顯著抑制作用；環(huán)索奈德(1mg/kg)分別與福莫特羅(14,28ug/kg)聯(lián)用對IL-4mRNA表達的升高有協(xié)同抑制作用。 2.離體實驗結果：1)高濃度環(huán)索奈德代謝物(10-8-10-4M)可引起細胞毒性反應降低RBL-2H3細胞活性,而福莫特羅(10-12-10-4M)對細胞活性無明顯影響。2)DNP-BSA (100ng/mL)刺激表面結合IgE (200ng/mL)的RBL-2H3細胞可顯著誘導炎癥因子IL-4和IL-13表達的增多。3)環(huán)索奈德代謝物(0.1-10nM)與福莫特羅(0.1-10μM)均可呈劑量依賴性的抑制DNP-BSA誘導的IL-4和IL-13表達的增多。4)環(huán)索奈德代謝物(0.2nM)與福莫特羅(1州)聯(lián)用與單劑量相比,對DNP-BSA誘導的IL-4的產生有顯著協(xié)同抑制作用；對IL-13和組胺的產生無顯著協(xié)同抑制作用。5) MAPK通路中JNK通路抑制劑SP600125(10μm)可顯著抑制DNP-BSA誘導的IL-4表達和分泌,而P38和ERK通路抑制劑對IL-4產生無明顯抑制作用。6) IgE-BSA復合物可誘導JNK磷酸化,在刺激20min時磷酸化最多。7)環(huán)索奈德代謝物(0.1-10nM)與福莫特羅(0.1-10μM)均可呈劑量依賴性的抑制DNP-BSA誘導的JNK磷酸化。8)環(huán)索奈德代謝物(0.2nM)與福莫特羅(1μM)聯(lián)用與單劑量相比,對DNP-BSA誘導的JNK磷酸化有顯著協(xié)同抑制作用。 結論： 1)在小鼠的哮喘模型中,環(huán)索奈德與福莫特羅的聯(lián)用對于乙酰甲膽堿誘導的氣道高反應性和炎癥的產生,具有協(xié)同抑制作用。 2)在抗原抗體復合物介導的RBL-2H3炎癥細胞模型中,環(huán)索奈德代謝物與福莫特羅聯(lián)用對炎癥因子IL-4的產生有協(xié)同抑制作用；抑制MAPK的JNK通路可能是其機制之一。

【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R562.25
【目錄】：

【共引文獻】

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