發(fā)布時(shí)間：2018-05-14 13:47

  本文選題：慢性阻塞性肺疾病 + PM2.5��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)與慢性炎癥有關(guān),主要影響肺實(shí)質(zhì)和外周氣道,導(dǎo)致大部分不可逆和漸進(jìn)的氣流受限。這種炎癥的特點(diǎn)是肺泡巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞(主要是Th1和Th17細(xì)胞亞群)數(shù)量增加,和從循環(huán)中招募的先天淋巴樣細(xì)胞[1]�？諝鈩�(dòng)力學(xué)當(dāng)量直徑小于或等于2.5μm的顆粒物,也稱細(xì)顆粒物,也是大氣總懸浮顆粒物(Total suspended particulate matter,TSP)的一部分,屬于具有重要衛(wèi)生學(xué)意義的空氣污染物,可吸附大量的有毒、有害物質(zhì),易進(jìn)入呼吸道深部引發(fā)呼吸道損傷。肺巨噬細(xì)胞是呼吸道內(nèi)部重要的防御屏障,能夠吞噬外來顆粒物,分解清除外來細(xì)菌。,肺巨噬細(xì)胞受到損傷,會(huì)釋放大量細(xì)胞因子,增加呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病率和死亡率[2]。COPD造成全球健康問題的增加,其預(yù)測(cè)和預(yù)后的新的生物學(xué)標(biāo)記物是迫切必要的。本實(shí)驗(yàn)通過可入肺細(xì)顆粒物(PM2.5)刺激小鼠肺巨噬細(xì)胞株(RAW264.7細(xì)胞),觀察白細(xì)胞介素17(Interleukin 17,IL-17)及組蛋白去乙�；�-2(Histone deacetylase2,HDAC2)水平變化,探討其在PM2.5致病中的作用,及是否IL-17、HDAC2水平可作為一種很有前途的,很容易檢測(cè)的生物標(biāo)志物。方法:1酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)測(cè)細(xì)胞上清液中IL-17的濃度。首先常規(guī)培養(yǎng)傳代RAW264.7細(xì)胞,調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為5×106/ml,于24孔板中培養(yǎng)過夜,隨機(jī)分為6組。(1)對(duì)照組:加入與實(shí)驗(yàn)組等體積的無血清1640培養(yǎng)液,孵育細(xì)胞;(2)LPS組:培養(yǎng)液中加入LPS,調(diào)整終濃度100ng/ml,孵育細(xì)胞;(3)PM2.5 25ug/ml組:培養(yǎng)液中加入終濃度為25ug/ml PM 2.5懸液,孵育細(xì)胞;(4)PM2.5 50ug/ml組:培養(yǎng)液中加入終濃度為50ug/ml PM 2.5懸液,孵育細(xì)胞;(5)PM2.5 100ug/ml組:培養(yǎng)液中加入終濃度為100ug/ml PM 2.5懸液,孵育細(xì)胞;(6)PM2.5200ug/ml組:培養(yǎng)液中加入終濃度為200ug/ml PM 2.5懸液,孵育細(xì)胞。各組分別刺激12h后取細(xì)胞上清液,-80℃保存,ELISA法檢測(cè)IL-17含量。2 HDAC2活性比色法定量測(cè)定試劑盒檢測(cè)細(xì)胞HDAC2活性。實(shí)驗(yàn)仍按上述分組對(duì)RAW246.7進(jìn)行刺激后,比色法定量檢測(cè)HDAC2活性。結(jié)果:1細(xì)胞上清液中IL-17含量變化。與陰性對(duì)照組比較,LPS刺激RAW264.7細(xì)胞后,細(xì)胞上清液中IL-17含量增加;PM2.5刺激RAW246.7細(xì)胞,IL-17含量亦增加;PM2.5濃度50ug/ml組,IL-17含量最高,PM2.5100ug/ml、200ug/ml組較PM2.5濃度50ug/ml組IL-17含量降低。但比陰性對(duì)照組增高,比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),PM2.5濃度50ug/ml組與PM2.5濃度100ug/ml組IL-17比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2活性比色法定量測(cè)定HDAC2活性變化:與陰性對(duì)照組比較,LPS刺激RAW246.7細(xì)胞后,細(xì)胞HDAC2活性有所降低;PM2.5刺激RAW264.7細(xì)胞,細(xì)胞HDAC2活性降低,且隨PM2.5濃度增高,HDAC2活性顯著降低(P0.05)。結(jié)論:1 PM2.5不同濃度組刺激分泌IL-17增加,提示IL-17參與了細(xì)胞損傷的發(fā)生發(fā)展過程。PM2.5濃度50ug/ml組100ug/ml組IL-17含量無明顯差異,PM2.5濃度200ug/ml組IL-17含量反而降低,說明高濃度PM2.5可能引起細(xì)胞存活率降低。2 LPS及PM2.5刺激RAW264.7細(xì)胞引起組蛋白乙�；鰪�(qiáng),導(dǎo)致前炎癥因子IL-17高表達(dá),促進(jìn)炎癥反應(yīng)發(fā)生。
[Abstract]:Objective : Chronic obstructive pulmonary disease ( COPD ) is associated with chronic inflammation , which mainly affects the pulmonary parenchyma and the peripheral airway , resulting in most irreversible and progressive restriction of the airflow . This inflammation is characterized by an increase in the number of alveolar macrophages , neutrophils , T lymphocytes ( mainly Th1 and Th17 cells ) , and congenital lymphoid cells recruited from the cycle . The air dynamic equivalent diameter is less than or equal to 2.5 . m u.m , also referred to as fine particles , is part of total suspended particulate matter ( TSP ) , and belongs to air pollutants with important hygienic significance , and can adsorb large amounts of toxic and harmful substances , and is easy to enter the deep part of the respiratory tract to cause respiratory tract injury . Methods : The levels of IL - 17 , IL - 17 and Histone defibrase - 2 ( HDAC2 ) were measured by enzyme - linked immunosorbent assay ( ELISA ) . ( 1 ) In the control group , the serum levels of IL - 17 and IL - 17 in the culture medium were determined by adding LPS to the culture solution , the final concentration was 100 ng / ml , the concentration of IL - 17 was increased , the cells were incubated ; ( 4 ) PM2 . 5200ug / ml group : the concentration of IL - 17 was higher than that in the negative control group . Conclusion : The levels of IL - 17 and IL - 17 in PM2.5 stimulated RAW264.7 cells decreased significantly ( P0.05 ) . Conclusion : The levels of IL - 17 in PM2.5 stimulated RAW264.7 cells were not significantly different .

【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R563.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1888092