本文關(guān)鍵詞：線粒體轉(zhuǎn)錄因子A基因多態(tài)性在高原肺水腫發(fā)生中的作用及機(jī)制的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蚌埠醫(yī)學(xué)院》 2014年

線粒體轉(zhuǎn)錄因子A基因多態(tài)性在高原肺水腫發(fā)生中的作用及機(jī)制的初步研究

黃珊  

【摘要】：背景和目的 平原人進(jìn)入高原后，機(jī)體會(huì)發(fā)生一系列的代償適應(yīng)性變化，以適應(yīng)高原環(huán)境，這個(gè)過程稱為習(xí)服，若習(xí)服不良則可能發(fā)生高原病，例如高原肺水腫(high altitudepulmonary edema, HAPE)。線粒體是機(jī)體能量代謝的中心，在低氧細(xì)胞損傷和組織、細(xì)胞對(duì)低氧環(huán)境的習(xí)服過程中有非常重要的作用。我室以往的研究結(jié)果提示，線粒體功能改變是細(xì)胞低氧習(xí)服-適應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。反之，線粒體結(jié)構(gòu)損傷和功能障礙，則可能是引起機(jī)體對(duì)于高原低氧環(huán)境習(xí)服不良，甚至發(fā)生高原病(如HAPE)的重要因素。 HAPE的發(fā)生機(jī)制尚不清楚，目前認(rèn)為與肺血管收縮，肺動(dòng)脈壓過度升高、肺毛細(xì)血管通透性增加、肺泡II型上皮細(xì)胞水清除障礙等因素有關(guān)。近來研究表明，缺氧時(shí)線粒體功能障礙，活性氧(reactive oxygen species, ROS)過度生成，在缺氧引起的肺血管平滑肌細(xì)胞收縮、肺水清除障礙的發(fā)生中起重要作用，缺氧線粒體功能障礙可通過多種途徑參與HAPE的發(fā)生。 綜上所述，我們推測(cè)，HAPE的發(fā)生可能與線粒體DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）穩(wěn)定性降低，線粒體功能障礙有關(guān)，而線粒體轉(zhuǎn)錄因子A（mitochondrialtranscription factor A,TFAM）作為mtDNA穩(wěn)定性的重要調(diào)控因子，其基因多態(tài)性與HAPE發(fā)生易感性之間的關(guān)系有待深入研究。 材料與方法 在西藏日喀則地區(qū)(海拔3836m)收集漢族HAPE患者和高原健康對(duì)照外周血標(biāo)本各60例。HAPE患者納入標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)1995年中華醫(yī)學(xué)會(huì)公布的高原肺水腫診斷標(biāo)準(zhǔn)，高原健康對(duì)照選取同期進(jìn)入日喀則地區(qū)的健康漢族人。所有受試者均排除已知的肺臟疾病、心血管疾病以及線粒體相關(guān)疾病等。采用全血基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA，采用超螺旋敏感的qPCR方法檢測(cè)HAPE患者mtDNA穩(wěn)定性；采用普通PCR擴(kuò)增試劑盒，擴(kuò)增TFAM基因7個(gè)外顯子及其相鄰非編碼區(qū)序列并測(cè)序，經(jīng)與NCBI基因組數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)站獲取的人類TFAM基因序列(TFAM transcriptionfactor A, mitochondrial [Homo samiens (human)], Gene ID:7019, updated on27-Mar-2014)比對(duì)，獲得單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(single nucleotide polymorphism, SNP)并進(jìn)行基因分型，采用卡方檢驗(yàn)分析比較SNPs位點(diǎn)在HAPE患者和高原健康對(duì)照之間的等位基因和基因型頻率分布，采用Binary logistic分析比較各基因型的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，采用Match軟件(#match)，在線分析TFAM基因全序列轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)；采用單因素方差分析或雙因素方差分析，比較TFAM SNPs位點(diǎn)基因型對(duì)mtDNA損傷的影響，并評(píng)價(jià)其在HAPE發(fā)生中的作用。 結(jié)果 1. HAPE患者原始模板細(xì)胞色素b(cytochrome b, cytb)基因拷貝數(shù)(1.590±0.092)顯著高于高原健康對(duì)照(1.245±0.076)(p=0.005)，HAPE患者加熱模板cyt b基因拷貝數(shù)(0.865±0.045)顯著低于高原健康對(duì)照(1.079±0.057)(p=0.004)；HAPE患者加熱模板COXIII基因拷貝數(shù)(1.159±0.061)與高原健康對(duì)照(1.044±0.039)比較無顯著差異(p=0.115)，但其原始模板細(xì)胞色素c氧化酶亞基(cytochrome c oxidase subunit,cox Ⅲ)基因拷貝數(shù)(1.354±0.069)顯著高于高原健康對(duì)照(1.170±0.069)(p=0.049)。HAPE患者(1.291±0.154)與高原健康對(duì)照(1.167±0.094)4977bp片段缺失發(fā)生率無顯著性差異(P=0.494)。 2.在高原健康對(duì)照和HAPE患者TFAM的7個(gè)外顯子序列和部分相鄰非編碼區(qū)序列發(fā)現(xiàn)了4個(gè)SNP位點(diǎn)：A281T、C305T、rs1937、A3790G。其中rs1937多態(tài)性位點(diǎn)已有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，而A281T、C305T、A3790G多態(tài)性位點(diǎn)為本研究首次發(fā)現(xiàn)。經(jīng)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)分析發(fā)現(xiàn)，A281T位點(diǎn)位于轉(zhuǎn)錄因子Staf結(jié)合序列內(nèi)，，可能參與TFAM轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。 3. HAPE患者TFAM A281T多態(tài)性位點(diǎn)T等位基因(0%)和AT基因型頻率(0%)顯著低于高原健康對(duì)照(15%，30%)(p=0.000，p=0.000)，以A等位基因?yàn)閰⒄�，T等位基因?qū)τ贖APE發(fā)病具有保護(hù)作用(OR=0.850，CI：0.788-0.916)，以AA基因型為參照，AT基因型是HAPE發(fā)生的保護(hù)性因素(OR=0.800，CI：0.705-0.908)。C305T、rs1937、A3790G位點(diǎn)的基因多態(tài)性與HAPE發(fā)生的易感性無顯著性相關(guān)(p0.05)。 4.通過擴(kuò)增mtDNA編碼基因cytb反映mtDNA拷貝數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高原健康對(duì)照(1.355±0.102)和HAPE患者(1.590±0.092)281AA基因型的原始模板mtDNA拷貝數(shù)顯著高于281AT基因型(0.990±0.061)(p=0.048，p=0.001)，且高原健康對(duì)照281AA基因型(1.061±0.065)和281AT基因型(1.118±0.117)加熱模板mtDNA拷貝數(shù)均顯著高于HAPE患者281AA基因型(p=0.015，p=0.019)。通過擴(kuò)增mtDNA編碼基因COX III反映mtDNA拷貝數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高原健康對(duì)照(1.281±0.079)和HAPE患者(1.354±0.069)281AA基因型的mtDNA原始模板mtDNA拷貝數(shù)顯著高于高原健康對(duì)照281AT基因型(0.912±0.058)(p=0.009，p=0.001)，各組間加熱模板mtDNA拷貝數(shù)相差不顯著(F=1.363，p=0.260)。C305T、rs1937、A3790G位點(diǎn)的基因多態(tài)性對(duì)mtDNA穩(wěn)定性無顯著性影響(p0.05)。 結(jié)論 1. mtDNA穩(wěn)定性降低是HAPE發(fā)生的一個(gè)重要因素； 2.首次報(bào)導(dǎo)了TFAM A281T、C305T、A3790G SNPs位點(diǎn)； 3. TFAM A281T多態(tài)性位點(diǎn)的T等位基因和AT基因型是HAPE的保護(hù)性因素，對(duì)于HAPE的發(fā)生具有重要的預(yù)測(cè)價(jià)值，其在HAPE發(fā)生機(jī)制中的作用值得進(jìn)一步深入研究； 4. TFAM281AT基因型可能影響轉(zhuǎn)錄因子Staf與反式作用元件結(jié)合，有利于增強(qiáng)mtDNA穩(wěn)定性，從而降低HAPE發(fā)生的易感性。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R563
【目錄】：

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2 孫克勤;牟信兵;朱琴;;平原人急進(jìn)高原突發(fā)高原肺水腫的電鏡觀察[A];第十次全國(guó)電子顯微學(xué)會(huì)議論文集（Ⅰ）[C];1998年

3 何富文;張西洲;陳濤;崔建華;張素蘋;王偉;;吸入一氧化氮藥物及加壓艙治療高原肺水腫前后血液流變學(xué)的變化[A];迎接新世紀(jì)——2000年全國(guó)微循環(huán)與血液流變學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2000年

4 蔣瑾;蔣寧;仁青多吉;;高原肺水腫的X線表現(xiàn)征象與發(fā)病時(shí)間和病理的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國(guó)放射學(xué)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2006年

5 陳有;李素芝;高鈺琪;劉福玉;黃躍;閆春城;劉厚東;孫澤平;黃學(xué)文;;輸液誘導(dǎo)建立肺泡型高原肺水腫動(dòng)物模型[A];第三屆特種醫(yī)學(xué)暨山東-河南-湖北三省聯(lián)合微生態(tài)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

6 海樂;胡昌華;王關(guān)嵩;;七葉皂苷鈉對(duì)大鼠高原肺水腫的防治作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2011（第十二次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議）論文匯編[C];2011年

7 解勇;;高原肺水腫與肺動(dòng)脈平均壓的關(guān)系[A];2005年中國(guó)高血壓年會(huì)論文匯編[C];2005年

8 李素芝;陳有;高鈺琪;劉福玉;黃躍;閆春城;劉厚東;孫澤平;黃學(xué)文;;高原肺水腫的家兔模型(英文)[A];第三屆特種醫(yī)學(xué)暨山東-河南-湖北三省聯(lián)合微生態(tài)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 記者 熊學(xué)莉　通訊員 曾理;[N];健康報(bào);2010年

2 曾理;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年

3 劉昕 辛志偉;[N];新華每日電訊;2006年

4 張震、特約通訊員曹虎城;[N];解放軍報(bào);2003年

5 記者 張珺;[N];重慶日?qǐng)?bào);2006年

6 陸登喜;[N];西藏日?qǐng)?bào);2003年

7 記者　張林軍;[N];大眾科技報(bào);2006年

8 馬玉榮 牛占軍;[N];西藏日?qǐng)?bào);2000年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 陳有;高原肺水腫動(dòng)物模型復(fù)制及發(fā)病機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

2 牟信兵;肺血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷在高原肺水腫發(fā)生中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

3 王清青;候選基因多態(tài)性與高原肺水腫易感性的分子流行病學(xué)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

4 楊應(yīng)忠;高原肺水腫的遺傳易感性研究[D];青海大學(xué);2014年

5 齊玥;高原肺水腫易感基因關(guān)聯(lián)分析及其功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 生寶亮;地塞米松對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性高原肺水腫的防治作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 黃珊;線粒體轉(zhuǎn)錄因子A基因多態(tài)性在高原肺水腫發(fā)生中的作用及機(jī)制的初步研究[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2014年

  本文關(guān)鍵詞：線粒體轉(zhuǎn)錄因子A基因多態(tài)性在高原肺水腫發(fā)生中的作用及機(jī)制的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：184990