本文關(guān)鍵詞： IRAK-M 香煙煙霧 肺部炎癥 T細胞 巨噬細胞 樹突狀細胞　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景香煙煙霧被認為是慢性阻塞性肺疾病發(fā)病的首要危險因素,可以通過活化固有免疫及適應(yīng)性免疫細胞(比如,樹突狀細胞,巨噬細胞,T細胞,上皮細胞等)誘導(dǎo)氣道炎癥。IRAK-M廣泛表達上述免疫細胞,被認為可負性調(diào)控TLR介導(dǎo)的NF-κB的活化。研究證實IRAK-M在多種疾病模型(比如肺纖維化,心肌梗塞等)中起到負性調(diào)節(jié)作用。但是結(jié)果并不完全一致。IRAK-M在機體免疫調(diào)節(jié)中的不同角色和其在香煙煙霧或者脂多糖LPS誘導(dǎo)肺部炎癥的作用尚未知。目的本研究旨在探討IRAK-M在香煙煙霧或LPS暴露誘導(dǎo)肺部炎癥的作用及機制。方法1、急性模型:將無特定病原體雄性小鼠(8-10周)隨機分為四組:正常對照組(Room Air)、香煙暴露組(CS)、脂多糖暴露組(LPS)以及香煙暴露+LPS組(CS+LPS)。(1)正常對照組小鼠暴露于過濾空氣,第四天霧化吸入生理鹽水;(2)CS組小鼠每天置于艙內(nèi),每次5支香煙,每天4次,兩次間隔30分鐘,連續(xù)暴露3天。第四天霧化吸入生理鹽水;(3)LPS組小鼠暴露于過濾空氣,第四天給予LPS霧化吸入(100μg/ml)半小時;(4)LPS+CS組小鼠香煙暴露三天后第四天霧化吸入LPS,其他條件同CS及LPS組。各組分別包括WT和IRAK-M-/-小鼠。亞急性模型:小鼠每天置于艙內(nèi)給予香煙煙霧暴露或者空氣暴露,每次5支香煙,每天4次,兩次間隔30分鐘,連續(xù)暴露7周。2、采用Flexivent小鼠肺功能儀,測量小鼠氣道阻力。3、通過HE染色觀察肺部形態(tài)、炎癥及氣道周圍膠原蛋白沉積情況,并進行病理評分。4、使用光學(xué)顯微鏡計數(shù)支氣管肺泡灌洗液(BALF)中炎癥細胞總數(shù)以及通過細胞甩片吉姆薩染色進行細胞分類。5、分別采用Real-Time PCR方法及多因子檢測小鼠肺組織中炎癥因子mRNA及蛋白表達水平。6、流式細胞術(shù)檢測小鼠肺組織及脾臟T細胞亞群分布。7、流式細胞術(shù)檢測小鼠肺組織樹突狀細胞及巨噬細胞表面分子(CD11B,CD40,CD80,CD86,CD83)表達。結(jié)果第一部分IRAK-M對急性香煙煙霧或者LPS暴露誘導(dǎo)肺部炎癥免疫調(diào)節(jié)作用1、氣道阻力(Rn)CS組、LPS組與正常對照組比較,氣道阻力略增加,但無統(tǒng)計學(xué)差異。CS+LPS組較正常對照組增加(P0.0001)。且CS+LPS組中IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠氣道阻力增加(p=0.052),其他組中IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠氣道阻力無差異。2、肺部炎癥肺組織HE染色顯示,相較于正常對照組,CS組、LPS組、CS+LPS小鼠肺組織上皮損傷、小氣道壁及肺實質(zhì)炎細胞浸潤。但只有CS+LPS中IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠肺部炎癥增加較明顯。3、BALF炎癥細胞總數(shù)相較于正常對照組,CS組、LPS組、CS+LPS組小鼠BALF中炎癥細胞總數(shù)增加(p0.05),但僅在CS+LPS組中,IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠肺部炎癥細胞總數(shù)(1812±131×103/mlvs1149±132×103/ml;p0.01)明顯增加,以中性粒細胞數(shù)及淋巴細胞數(shù)增加為主。4、肺組織趨化因子或細胞因子蛋白表達水平與正常對照組相比CS+LPS組肺組織中炎癥因子蛋白水平明顯升高。在CS+LPS組中,IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠肺組織中Th1相關(guān)細胞因子(TNF-α,IL-12,IFN-β,IFN-γ)、Th17(IL17A,IL6)相關(guān)細胞因子和上皮細胞相關(guān)細胞因子(IL1β,IL-1α,GM-CSF,MCP-1)明顯升高(P0.001)。5、T細胞亞群與正常對照組相比CS+LPS組小鼠肺組織中Th17和Treg細胞比例升高(p0.05)。CS+LPS組中,IRAK-M-/-較WT小鼠肺組織中Th17細胞比例升高(4.32%±0.28%vs 2.54%±0.32%),Treg 比例(4.99%±0.46%vs 6.65%±0.42%)降低。6、樹突狀細胞及巨噬細胞表面分子表達CS+LPS組中IRAK-M-/-較WT小鼠肺組織樹突狀細胞表面CD40和CD86明顯增加(P0.05),其他表面分子(CD11B,CD80,CD83)無明顯差異。同時巨噬細胞表面CD40增加(P0.05),其他表面分子(CD11B,CD80,CD83,CD86)無明顯差異。第二部分IRAK-M對亞急性香煙煙霧暴露誘導(dǎo)肺部炎癥的免疫調(diào)節(jié)作用1、氣道阻力CS組與正常對照組比較,氣道阻力明顯升高。在CS組中,IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠氣道阻力下降(P0.05)。2、肺部炎癥CS組與正常對照組比較,肺組織中炎癥細胞浸潤、上皮損傷明顯升高。在CS組中,IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠炎癥細胞浸潤、上皮損傷減少。3、BALF炎癥細胞總數(shù)和正常對照組比較,CS組中BALF炎癥細胞總數(shù)明顯升高(P0.001)。在CS組中,IRAK-M-/-小鼠較 WT 小鼠 BALF 炎癥細胞總數(shù)(122.8±9.2 ×1 03/ml vs 202.8±22×103/ml;p0.01)減少。4、肺組織趨化因子或細胞因子蛋白表達水平和正常對照組比較,CS組中肺組織中炎癥因子蛋白水平明顯升高。在CS組中,IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠肺組織中Th1相關(guān)細胞因子(TNF-α,IL-12,IFN-β,IFN-γ)、Th17細胞(IL17A,IL6)相關(guān)細胞因子和上皮細胞相關(guān)細胞因子(IL1β,IL-1α,GM-CSF,MCP-1)明顯降低(P0.001)。5、T細胞亞群與正常對照組相比CS組小鼠肺組織中Th17和Treg細胞比例升高(p0.05)。CS組中,IRAK-M-/-較WT小鼠肺組織中Th17細胞比例降低(9.8%±0.4%vs 7.6%±0.6%;p0.05),Treg 比例(10.5%±1.0%vs15.0%±0.9%;p0.001)升高。6、樹突狀細胞及巨噬細胞表面分子表達CS組中IRAK-M-/-較WT小鼠肺組織樹突狀細胞表面CD11B減少(P0.05),其他表面分子(CD40,CD86,CD80,CD83)無明顯差異。同時巨噬細胞表面CD11B和CD86表達下調(diào)(P0.05),其他表面分子(CD80,CD83,CD40)無明顯差異。結(jié)論IRAK-M在CS或LPS誘導(dǎo)肺部炎癥中的作用效應(yīng)可能與暴露時長有關(guān)。本研究證實,在急性煙草和LPS暴露小鼠模型中,IRAK-M通過下調(diào)肺組織中Th17比例,促進Treg細胞分化及下調(diào)DCs和巨噬細胞表面分子(CD40,CD86)表達進一步減輕肺部炎癥。反之在亞急性香煙暴露模型中,IRAK-M可通過上調(diào)節(jié)肺組織中Th17細胞分化,上調(diào)Treg比例及DCs和巨噬細胞表面分子(CD11B,CD86)表達進一步加重肺部炎癥。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R563

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本文編號：1506854