發(fā)布時間：2018-02-01 00:41

  本文關(guān)鍵詞： 甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯 人支氣管上皮細(xì)胞 DNA甲基化沉默基因 甲基化芯片 OPCML基因 全基因組DNA甲基化　出處：《中國疾病預(yù)防控制中心》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯(Glycidyl Methacrylate,簡稱GMA),是丙烯酸酯膠的主要組分,含有碳碳雙鍵和環(huán)氧基團,可參與離子型和自由基型反應(yīng),具有高反應(yīng)活性。它作為一種聚合用單體,在樹脂、涂料、粘合劑、塑料等工業(yè)中得到廣泛應(yīng)用。既往研究表明,GMA屬低毒類,體外多項致突變試驗結(jié)果呈陽性、具有生殖發(fā)育毒性,可誘導(dǎo)金倉鼠細(xì)胞(SHE)、正常人胚肺成纖維細(xì)胞和支氣管上皮(16HBE)細(xì)胞等多種哺乳類細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化,具有潛在致癌性,并且GMA致16HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中伴隨基因DNA甲基化的改變。DNA甲基化常出現(xiàn)在抑癌基因的啟動子,直接或間接影響基因表達,這種DNA修飾方式并未改變基因序列,但能關(guān)閉某些基因活性,進而導(dǎo)致細(xì)胞侵襲、異常增殖,促進腫瘤發(fā)生。DNA甲基化修飾導(dǎo)致的基因沉默在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中普遍存在,與腫瘤遺傳學(xué)改變不同,DNA甲基化是一種可逆的過程。 本研究通過篩選GMA致16HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中不同時點DNA甲基化沉默基因,分析DNA甲基化沉默基因在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中狀態(tài)的改變,進一步探討GMA致16HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中的DNA甲基化機制。以8μg/ml GMA染毒16HBE細(xì)胞(DMSO作為溶劑對照),每次染毒72h,間隔24h,連續(xù)染毒3次,染毒結(jié)束后計為第1代細(xì)胞,連續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至第30代,期間采用刀豆凝集素A(ConA)凝集試驗和錨著非依賴性(AIG)試驗對惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞進行生物學(xué)特性鑒定。收集轉(zhuǎn)化第10代、第20代、第30代未經(jīng)和經(jīng)甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑(5-Aza-cdr,5mol/L)處理的GMA染毒細(xì)胞(GMA組、GMA+抑制劑組)以及同步DMSO組細(xì)胞,采用NimbleGen公司生產(chǎn)的"NimbleGen HG18CpG Promoter Microarray Methlation"甲基化芯片篩選GMA致16HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中不同時點DNA甲基化沉默基因,進行KEEG通路分析；分析各時點DNA甲基化沉默基因的狀態(tài)改變,并進行KEEG通路分析,采用qPCR檢測轉(zhuǎn)化不同時點OPCML基因表達水平的變化；應(yīng)用DNA甲基化定量檢測試劑盒(MethylFlashTM Methylated DNA Quantification Kit (Colorimetric))測定GMA誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中細(xì)胞全基因組DNA甲基化水平。 1GMA致16HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中不同時點DNA甲基化沉默基因的分析 GMA致16HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中,轉(zhuǎn)化第10代、第20代、第30代分別有821、75、44個甲基化沉默基因,涉及有統(tǒng)計學(xué)意義的通路分別是26、1、3個,未見各時點均沉默的甲基化基因。 2GMA致16HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中DNA甲基化沉默基因狀態(tài)變化的分析 GMA致16HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中,第10代轉(zhuǎn)化細(xì)胞發(fā)生而第20代、30代未發(fā)生DNA甲基化沉默的基因有801個,其涉及有統(tǒng)計學(xué)意義的通路25個；第20代轉(zhuǎn)化細(xì)胞發(fā)生而第10代、30代未發(fā)生DNA甲基化沉默的基因有66個,其涉及有統(tǒng)，

本文編號：1480441