本文關(guān)鍵詞： 香煙煙霧 肺動(dòng)脈平滑肌 重塑 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2 蛋白激酶Cα 香煙煙霧提取物 肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 增殖 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2 蛋白激酶Cα 香煙煙霧 肺血管 重構(gòu) 結(jié)締組織生長(zhǎng)　出處：《華中科技大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分結(jié)締組織生長(zhǎng)因子和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2、蛋白激酶Cα在香煙煙霧暴露大鼠肺血管重構(gòu)中的表達(dá)變化 目的：探討在香煙煙霧暴露大鼠的肺血管中結(jié)締組織生長(zhǎng)因子、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2和蛋白激酶Cα表達(dá)的變化,以及它們與香煙煙霧暴露大鼠肺血管重構(gòu)的關(guān)系。方法：將24只健康雄性Wistar大鼠(8周齡)隨機(jī)平均分為4組：C組(對(duì)照組),S-1M組(香煙煙霧暴露1月組),S-3M組(香煙煙霧暴露3月組)和S-6M組(香煙煙霧暴露6月組)。取動(dòng)脈血檢測(cè)血氧分壓(Pa02),HE和平滑肌細(xì)胞α肌動(dòng)蛋白染色觀察肺血管重構(gòu)情況,Western blotting檢測(cè)大鼠肺動(dòng)脈平滑肌中CTGF、PKCα和p-ERK1/2蛋白的表達(dá)量。 結(jié)果：各組大鼠動(dòng)脈血氧分壓之間比較無(wú)顯著性差異,隨著香煙煙霧暴露時(shí)間的延長(zhǎng),肺血管壁厚度和血管直徑的比值(%WT)、完全肌化血管比例、CTGF和p-ERK1/2、 PKCα的蛋白表達(dá)水平隨香煙煙霧暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而增加,各組間比較有顯著性差異(p0.05)。CTGF和p-ERK1/2、PKCα的蛋白表達(dá)與大鼠的肺血管%WT和完全肌化血管比例呈正相關(guān)。 結(jié)論：香煙煙霧暴露大鼠的肺血管重塑隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而加重。同時(shí),CTGF、活化的ERK1/2和PKCα在血管平滑肌中的表達(dá)隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著增加,CTGF、 ERK1/2的活化和PKCα可能與香煙煙霧暴露致大鼠肺血管重構(gòu)有關(guān)。 第二部分結(jié)締組織生長(zhǎng)因子和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2、蛋白激酶Cα信號(hào)通路在香煙煙霧提取物致大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖中的作用及其之間的關(guān)系 目的：探討結(jié)締組織生長(zhǎng)因子在香煙煙霧提取物致大鼠肺動(dòng)脈平滑肌增殖過(guò)程中是否通過(guò)蛋白激酶Ca、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)。 方法：大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng),應(yīng)用不同濃度(5、10、20、40、80μg/ml)的香煙煙霧提取物(CSE)刺激24小時(shí),通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖情況。1、將細(xì)胞分成5組：正常對(duì)照組(CM組),CSE組,NsiRNA組,CSE+NsiRNA組,CSE+CTGFsiRNA組,各組細(xì)胞同步化后用相應(yīng)的siRNA轉(zhuǎn)染,再給予CSE刺激；2、將細(xì)胞分成4組：正常對(duì)照組(CM組),CSE組,PD98059組,CSE+PD98059組,各組細(xì)胞同步化后需要的應(yīng)用PD98059預(yù)處理1小時(shí),之后應(yīng)用CSE刺激。采用細(xì)胞計(jì)數(shù)及BrdU摻入法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,分別采用real-time PCR和Western blotting檢測(cè)各組CTGF、ERK1/2和PKCa的mRNA及蛋白表達(dá)。 結(jié)果：20μg/ml的CSE濃度對(duì)細(xì)胞的促增殖作用最強(qiáng),在CSE (20μg/ml)刺激下,CTGF和PKCa的mRNA和蛋白表達(dá)水平均升高,大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖明顯；CTGFsiRNA除了明顯抑制CTGF的表達(dá)之外,PKCa的mRNA和蛋白表達(dá)和ERK1/2的活化也明顯受到抑制,CSE誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖也受到抑制；PD98059可以抑制CSE刺激下ERK1/2的磷酸化及肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖,但是對(duì)CTGFmRNA和蛋白的表達(dá)沒(méi)有顯著影響。 結(jié)論：結(jié)締組織生長(zhǎng)因子在香煙煙霧提取物刺激誘導(dǎo)的大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞異常增長(zhǎng)的過(guò)程中,通過(guò)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2和蛋白激酶Ca信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)。 第三部分結(jié)締組織生長(zhǎng)因子和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2、蛋白激酶Cα信號(hào)通路在香煙煙霧致大鼠肺血管重構(gòu)中的作用及關(guān)系 目的：探討結(jié)締組織生長(zhǎng)因子在香煙煙霧暴露致大鼠肺血管重構(gòu)中是否通過(guò)蛋白激酶Cα、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)。 方法：構(gòu)建沉默大鼠CTGF表達(dá)的慢病毒,1、轉(zhuǎn)染大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,將細(xì)胞分成5組：正常對(duì)照組(CM組),CSE組,LV-NsiRNA組,CSE+LV-NsiRNA組,CSE+LV-CTGFsiRNA組,各組細(xì)胞同步化后用轉(zhuǎn)染相應(yīng)的siRNA慢病毒載體,再給予CSE刺激；2、通過(guò)氣道給藥的方式用慢病毒感染大鼠,將大鼠分成4組：正常對(duì)照組(controls組),煙霧暴露組(smoking組),煙霧暴露陰性病毒干預(yù)組(smoking+LV-NsiRNA組),煙霧暴露陽(yáng)性病毒干預(yù)組(smoking+LV-CTGFsiRNA組),每組6只,各組大鼠根據(jù)不同情況進(jìn)行煙霧暴露和/或病毒感染,煙霧暴露時(shí)間為6周,分別應(yīng)用real-time PCR和Western blotting檢測(cè)各組大鼠肺血管CTGF.ERK1/2和PKCa的mRNA及蛋白表達(dá),通過(guò)HE染色和平滑肌細(xì)胞α肌動(dòng)蛋白染色觀察肺血管重構(gòu)情況。 結(jié)果：慢病毒成功轉(zhuǎn)染大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,沉默CTGF表達(dá)的陽(yáng)性慢病毒可以使CSE (20μg/ml)刺激下高表達(dá)的CTGF明顯受到抑制,大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖也顯著受到抑制,慢病毒構(gòu)建成功；各組大鼠在不同慢病毒感染和／或香煙煙霧暴露處理完成后處死,各組Pa02無(wú)顯著差異,和對(duì)照組比較,香煙煙霧暴露組CTGF和PKCα、p-ERKl/2表達(dá)升高,和香煙煙霧暴露陰性病毒感染組比較,香煙煙霧暴露陽(yáng)性病毒感染組CTGF表達(dá)下降,同時(shí),PKCa和p-ERK1/2表達(dá)受到抑制,HE染色及平滑肌細(xì)胞a肌動(dòng)蛋白染色觀察血管重構(gòu)情況較陰性病毒感染及香煙煙霧暴露大鼠組減輕。 結(jié)論：結(jié)締組織生長(zhǎng)因子在香煙煙霧暴露大鼠的肺血管重構(gòu)過(guò)程中,通過(guò)了細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2和蛋白激酶Cα信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R563

【參考文獻(xiàn)】

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1 朱朝霞;徐永健;鄒暉;張珍祥;倪望;陳士新;;Effects of Puerarin on Pulmonary Vascular Remodeling and Protein Kinase C-α in Chronic Cigarette Smoke Exposure Smoke-exposed Rats[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2008年01期

2 余慕清;劉先勝;吳宏勖;向敏;徐永健;;ERK1/2 Promotes Cigarette Smoke-induced Rat Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells Proliferation and Pulmonary Vascular Remodeling via Up-regulating CyclinE1 Expression[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2013年03期

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本文編號(hào)：1466920