本文關(guān)鍵詞：MIF基因啟動子多態(tài)性與肺結(jié)核病遺傳易感性關(guān)系的研究

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【摘要】：研究目的： 巨噬細胞移動抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor, MIF)是一種促炎性細胞因子,主要由巨噬細胞產(chǎn)生,T淋巴細胞、單核細胞、樹突狀細胞、B淋巴細胞、中性粒細胞、嗜酸性細胞、嗜堿性細胞也可以表達MIF,在炎性疾病和自身免疫性疾病的發(fā)病機理中起著重要作用。體外研究表明,人的MIF可以抑制致病性結(jié)核分枝桿菌的生長繁殖。人體感染結(jié)核分枝桿菌后,主要由巨噬細胞聚集到感染部位,吞噬結(jié)核菌,提呈抗原,引起免疫反應(yīng),導(dǎo)致不同程度肺結(jié)核病的發(fā)生,而MIF又能抑制巨噬細胞的游走。因此,MIF在肺結(jié)核病的發(fā)生發(fā)展中起著不容忽視的作用。本課題通過檢測肺結(jié)核病人(初治、復(fù)治)和健康對照組人群外周血清中MIF蛋白表達含量差異,mRNA轉(zhuǎn)錄量差異,并對MIF基因啟動子-794區(qū)CATT重復(fù)序列微衛(wèi)星多態(tài)性和-173區(qū)G/C單核苷酸多態(tài)性進行分析,從而討論MIF與肺結(jié)核病遺傳易感性的關(guān)系,為今后研究肺結(jié)核病的發(fā)病機理和治療提供理論基礎(chǔ)和依據(jù)。 研究方法： 1、試驗分組：健康對照組、初治肺結(jié)核病組、復(fù)治肺結(jié)核病組和肺結(jié)核病組。 2、收集所有研究對象外周全血EDTA抗凝血樣本及臨床資料,凝固后分離血清；提取外周全血中有核細胞的總DNA及總RNA,血清做ELISA檢測。 3、采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測血清中MIF蛋白含量,應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對其表達量的差異進行統(tǒng)計學(xué)分析。 4、設(shè)計特異性引物擴增-794區(qū)MIF基因啟動子片段,擴增產(chǎn)物純化后通過基因測序技術(shù)分析MIF基因-794區(qū)CATT5-8微衛(wèi)星多態(tài)性,統(tǒng)計基因型和等位基因的分布頻率,對其分布情況進行統(tǒng)計學(xué)分析。 5、設(shè)計特異性引物擴增-173區(qū)MIF基因啟動子片段,用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法檢測MIF基因-173區(qū)G/C單核苷酸多態(tài)性,統(tǒng)計基因型和等位基因的分布頻率,對其分布情況進行統(tǒng)計學(xué)分析。 6、設(shè)計特異性引物擴增目的基因(MIF)和內(nèi)參基因(β-actin),將高品質(zhì)的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,運用實時熒光定量PCR (QRT-PCR)法檢測mRNA轉(zhuǎn)錄量,利用2-△△CT法進行相對定量分析,并對其進行統(tǒng)計學(xué)分析。 研究結(jié)果： 1、肺結(jié)核病組血清MIF蛋白表達量高于健康對照組(P0.05)。肺結(jié)核病組-794區(qū)CATT位點基因型(5/5+5/6+6/6)和(7/X+8/X)血清MIF蛋白表達量均高于健康對照組(P0.05)。肺結(jié)核病組-173區(qū)G/C位點基因型GG和(GC+CC)血清MIF蛋白表達量均高于健康對照組(P0.05)。 2、MIF基因啟動子-794區(qū)CATT位點基因型(5/X+6/X vs.7/7+7/8)分布在初治肺結(jié)核病組與健康對照組、肺結(jié)核病組與健康對照組比較中差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；等位基因(5+6vs.7+8)分布在初治肺結(jié)核病組與健康對照組、肺結(jié)核病組與健康對照組比較中差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3、MIF基因啟動子-173區(qū)G/C位點基因型(GGvs. GC+CC)分布在初治肺結(jié)核病組、復(fù)治肺結(jié)核病組、肺結(jié)核病組與健康對照組比較中差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；而等位基因(Gvs.C)分布在各試驗組與健康對照組比較中差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 4. MIF mRNA轉(zhuǎn)錄量在各試驗組與健康對照組比較中差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；各試驗組在對應(yīng)-794區(qū)CATT位點基因型(5/5+5/6+6/6)和(7/X+8/X)與健康對照組比較MIF mRNA含量差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；各試驗組在對應(yīng)-173區(qū)G/C位點基因型GG和(GC+CC)與健康對照組比較MIF mRNA含量差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 1、肺結(jié)核病組(初治、復(fù)治)外周血清中MIF蛋白表達量較健康對照組升高,提示MIF參與肺結(jié)核病的發(fā)生發(fā)展。CATT重復(fù)次數(shù)越高的組中,MIF蛋白表達量越高。攜帶基因突變C的組中,MIF蛋白表達量高。 2、MIF基因啟動子微衛(wèi)星多態(tài)性位點-794與肺結(jié)核病易感性相關(guān)。等位基因高重復(fù)次數(shù)的CATT7、CATT8易患肺結(jié)核病,而肺結(jié)核病的復(fù)發(fā)與CATT重復(fù)序列次數(shù)不相關(guān)。 3、MIF基因啟動子單核苷酸多態(tài)性位點-173與肺結(jié)核病易感性相關(guān)。攜帶基因突變C的易患肺結(jié)核病,而肺結(jié)核病的復(fù)發(fā)與G/C多態(tài)性不相關(guān)。 4、肺結(jié)核病組(初治、復(fù)治)與健康對照組MIF mRNA轉(zhuǎn)錄量有差異。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R521

【參考文獻】

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本文編號：1275166