本文關(guān)鍵詞：Nogo-B在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞免疫應(yīng)答中的作用及其機(jī)制初探

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【摘要】：背景:急性肺損傷(Acute lung injury,ALI)是呼吸系統(tǒng)常見的危重癥之一,微生物感染、外傷、毒氣、污染物、自身抗體、胃酸、栓塞和自由脂肪酸等多種生物、物理和化學(xué)因素均可導(dǎo)致ALI。盡管在過去幾十年中人們對ALI的認(rèn)識不斷加深,在治療上也取得了重大進(jìn)步,但ALI的死亡率(約27%到45%不等)仍居高不下,且ALI的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制也尚無定論。鑒于當(dāng)前臨床上ALI患者面臨著高死亡率、低治愈率和差的生活質(zhì)量的現(xiàn)實,探明ALI的病理生理機(jī)制從而找到有效的治療措施迫在眉睫。肺泡巨噬細(xì)胞(Alveolar Macrophages,AM)作為肺部主要的固有免疫細(xì)胞,在ALI的發(fā)生、發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。眾所周知,巨噬細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要成分之一,參與了各種炎癥的固有免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答,此外,在損傷修復(fù)、組織重構(gòu)及纖維化等過程中也起著重要作用。Nogo-B是網(wǎng)狀蛋白家族(reticulon super-family proteins,RTNs)中的成員,因參與了多種細(xì)胞生物學(xué)過程,近來成為了國內(nèi)外的研究熱點,研究發(fā)現(xiàn)Nogo-B可以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的募集,調(diào)控巨噬細(xì)胞遷移、粘附、吞噬、炎癥因子分泌及殺傷作用等生物學(xué)功能,同時內(nèi)源性的Nogo-B還可能與巨噬細(xì)胞的活化和轉(zhuǎn)運有關(guān)。然而,在ALI狀態(tài)下,Nogo-B是如何調(diào)控巨噬細(xì)胞的免疫應(yīng)答目前尚不明確。我們在前期的研究中觀察到ALI小鼠的肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)細(xì)胞中,肺氣道、血管及肺泡上皮組織中Nogo-B的表達(dá)水平均較正常小鼠降低,以BALF細(xì)胞降低最為顯著,而BALF中的細(xì)胞成分主要為AM。因此,我們推測Nogo-B對AM的功能發(fā)揮起著至關(guān)重要的作用。為了證實上述推論并初步闡明其分子機(jī)制,本研究選用小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7為研究對象,在LPS刺激下研究Nogo-B對巨噬細(xì)胞分泌、遷移、抗原提呈等免疫應(yīng)答過程的影響并初步探討其機(jī)制。方法:一、選擇小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7作為本實驗的研究對象,加入胎牛血清、青霉素和鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基在37℃,5%CO_2濃度的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。用Western blot檢測巨噬細(xì)胞RAW264.7內(nèi)不同LPS濃度下以及LPS刺激后不同時間段內(nèi)Nogo-B表達(dá)水平。二、分別采用腺病毒轉(zhuǎn)染和siRNA干擾的方法上調(diào)和下調(diào)巨噬細(xì)胞中Nogo-B的表達(dá)水平,選擇LPS刺激的最佳濃度和時長,采用ELISA方法檢測巨噬細(xì)胞炎癥因子的釋放情況,Transwell實驗觀察巨噬細(xì)胞的遷移能力的變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測巨噬細(xì)胞表面MHC Ⅰ/Ⅱ進(jìn)而評估其抗原提呈能力,以及Western Blot方法檢測MSR1進(jìn)而判斷巨噬細(xì)胞的吞噬能力。三、探索LPS刺激下Nogo-B影響巨噬細(xì)胞功能可能的機(jī)制。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同Nogo-B表達(dá)水平的巨噬細(xì)胞表面TLR4的表達(dá)情況,Western Blot方法檢測不同Nogo-B表達(dá)水平的巨噬細(xì)胞中MAPK通路相關(guān)分子ERK、JNK和P38的磷酸化水平,以初步闡明Nogo-B通過TLR4-MAPK通路調(diào)控巨噬細(xì)胞的生物學(xué)功能。結(jié)果:一、LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞表達(dá)Nogo-B的變化規(guī)律巨噬細(xì)胞Nogo-B蛋白隨著LPS刺激濃度的增高而降低,即Nogo-B蛋白的表達(dá)水平呈現(xiàn)LPS濃度依賴性降低,在LPS濃度為1μg/ml時降至最低。當(dāng)LPS刺激濃度為1μg/ml時,巨噬細(xì)胞中Nogo-B的表達(dá)水平隨著LPS刺激時間的延長而逐漸下降,在刺激后的24h其表達(dá)量降至最低并一直持續(xù)到48h。二、LPS刺激后,調(diào)控Nogo-B表達(dá)對巨噬細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響(一)、LPS刺激后,過表達(dá)Nogo-B的RAW264.7炎癥因子TNF-α,MCP-1和TGF-β的分泌均較對照組顯著增加;而低表達(dá)Nogo-B的RAW264.7炎癥因子TNF-α,IL-1β,MCP-1和TGF-β的分泌水平顯著受到抑制。(二)、LPS刺激24h后,過表達(dá)Nogo-B的RAW264.7遷移能力較對照組升高1.8倍;而低表達(dá)Nogo-B的RAW264.7則遷移能力較對照組減低1.5倍。(三)、LPS刺激后MHC Ⅱ在過表達(dá)Nogo-B的RAW264.7中表達(dá)量隨著LPS刺激時間的推移顯著增加,而在低表達(dá)Nogo-B的RAW264.7中,MHCⅡ的表達(dá)量顯著低于對照組。調(diào)控Nogo-B的表達(dá)水平,MHC Ⅰ的表達(dá)未見明顯變化。(四)、LPS刺激后24h,MSR1在過表達(dá)Nogo-B的RAW264.7中其表達(dá)量明顯升高,而在低表達(dá)Nogo-B的RAW264.7中顯著減少。三、Nogo-B影響巨噬細(xì)胞表面TLR4的表達(dá)并調(diào)節(jié)MAPK通路的活化LPS刺激后過表達(dá)Nogo-B的RAW264.7表面TLR4的平均熒光強(qiáng)度以及ERK,JNK和p38的磷酸化水平顯著升高,而低表達(dá)Nogo-B的RAW264.7其表達(dá)量顯著下降。結(jié)論:一、Nogo-B在巨噬細(xì)胞中的表達(dá)水平受LPS刺激的影響,LPS濃度為1μg/ml刺激時間為24h時,RAW264.7中Nogo-B的表達(dá)下降最為顯著。二、Nogo-B的表達(dá)水平與巨噬細(xì)胞炎癥因子的釋放、遷移能力、抗原提呈能力和吞噬能力成正相關(guān)。三、Nogo-B可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞表面TLR4的表達(dá)和激活MAPK通路影響巨噬細(xì)胞的免疫應(yīng)答。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R563

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳蘭香,孫長凱,范明;Nogo與Nogo受體研究[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2002年06期

2 楊曉梅,周長滿;Nogo-A蛋白的研究進(jìn)展[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2004年03期

3 ;Expression of Nogo-A mRNA after injury of the rat central nervous system[J];Neural Regeneration Research;2008年12期

4 許丹陽;張勵才;;Nogo-A蛋白的研究進(jìn)展[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2009年01期

5 王峻;劉愛香;秦寧;陳莉;;Nogo受體拮抗劑對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷神經(jīng)修復(fù)作用的研究[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2012年19期

6 ;Event-related potentials in a Go/Nogo task of abnormal response inhibition in heroin addicts[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2009年08期

7 姜俊杰,張樹棟,劉云鵬,洪煥玉,王守彪,夏玉軍;Nogo-A的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2004年03期

8 閔嶸,趙志煒,姬志娟,盛樹力;Nogo與Nogo受體在正常小鼠大腦的分布[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2005年02期

9 劉仁紅;周曉光;黃嘉言;;Nogo-A蛋白在缺氧缺血性腦損傷新生大鼠大腦組織中的表達(dá)及意義[J];廣東醫(yī)學(xué);2006年10期

10 趙瑞;康曉剛;王瑩;江文;;Nogo及其受體復(fù)合體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的研究進(jìn)展[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2013年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;Human Nogo-C Overexpression Induces HEK293 cell Apoptosis via a mechanism that involves JNK-c-Jun pathway[A];江蘇省遺傳學(xué)會第七屆代表大會暨學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

2 熊南翔;;Colocalization of Nogo-A and Nogo-66 Receptor Proteins at the site of brain——astrocytoma contract[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

3 孫阿萍;張俊;廖琴;唐露;鄧敏;樊東升;;Nogo-A在人萎縮肌纖維中表達(dá)的研究[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

4 余思遜;楊輝;樹海峰;張春青;郭為;李松;趙邦云;;Nogo-A蛋白參與局灶性皮質(zhì)發(fā)育不良所致癲癇發(fā)生的機(jī)制研究[A];2011中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

5 Yan LU;Xiu-jie LIU;Jian-feng ZHOU;Jia-zhen ZHOU;Cheng HE;;TROY interacts with RhoGDIa to mediate Nogo-induced inhibition of neurite outgrowth[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會第十屆全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2013年

6 劉仁紅;周曉光;黃嘉言;熊愛華;;Nogo-A蛋白在HIBD新生大鼠大腦組織中的表達(dá)及其意義[A];中華醫(yī)學(xué)會第十四次全國兒科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

7 Jihong Han;;Lack of hepatic Nogo-B receptor expression disturbs lipid homeostasis——An AMPK-LXR dependent pathway[A];第十二屆全國脂質(zhì)與脂蛋白學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

8 鄂玲玲;周長滿;馮士生;徐忠濤;楊磊;;Nogo(N-18)在大鼠海馬及大腦皮質(zhì)中分布和發(fā)育的免疫組織化學(xué)研究[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

9 岳紅云;賀翔鴿;;Nogo—66蛋白的免疫原性研究—在體實驗[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

10 袁容娣;葉劍;賀翔鴿;彭錫嘉;;反義寡核苷酸對損傷視神經(jīng)Nogo—A mRNA表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳益存;Nogo-C點突變的發(fā)現(xiàn)及其促細(xì)胞凋亡機(jī)制研究[D];南京師范大學(xué);2006年

2 余思遜;Nogo-A蛋白參與形成大腦皮質(zhì)發(fā)育障礙及其作用機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

3 吳小軍;Nogo-B在人膠質(zhì)瘤組織和微血管內(nèi)皮細(xì)胞中差異表達(dá)的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

4 米亞靜;探索神經(jīng)元Nogo-A分子的自主性功能[D];上海交通大學(xué);2012年

5 朱偉;Nogo下游結(jié)合分子的鑒定及Nogo與BEX1結(jié)合的功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

6 周樹敏;Nogo-B對Fibulin-5的調(diào)控及其對細(xì)胞遷移的影響[D];武漢大學(xué);2010年

7 霍妍;Nogo氨基末端在視神經(jīng)再生中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

8 尹小磊;視網(wǎng)膜Nogo氨基末端信號通路的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

9 葉劍;睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子聯(lián)合Nogo-A ASODN對視神經(jīng)損傷修復(fù)的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2003年

10 劉秀杰;酵母雙雜交篩選Nogo-66的結(jié)合分子及功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 肖華;Nogo-B在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞免疫應(yīng)答中的作用及其機(jī)制初探[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

2 楊夢;Nogo-B調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在急性肺損傷后期肺間質(zhì)纖維化中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

3 戴金祥;神經(jīng)元Nogo-A分子信號與功能的初步研究[D];上海交通大學(xué);2009年

4 金衛(wèi)林;大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中Nogo-A分子的表達(dá)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

5 黃興華;Nogo基因及其信號通路蛋白在小鼠耳蝸表達(dá)的初步研究[D];中南大學(xué);2013年

6 郭愛麗;Nogo-A受體拮抗劑在新生大鼠缺氧缺血性腦損傷中軸突再生的作用研究[D];山東大學(xué);2009年

7 鄧斌;六種抗大鼠Nogo-A分子單克隆抗體的免疫組織化學(xué)染色特性及Nogo-A分子截短體的構(gòu)建[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

8 黎羅明;抗Nogo-A抗體對急性腦梗死神經(jīng)軸突再生影響的研究[D];貴陽中醫(yī)學(xué)院;2013年

9 申軍現(xiàn);Nogo-A分子在體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元中的表達(dá)研究[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

10 武肖娜;過表達(dá)Nogo-C調(diào)節(jié)PC12細(xì)胞存活、分化及突起生長等作用機(jī)制的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

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本文編號：1239830