發(fā)布時間：2017-11-22 06:04

  本文關鍵詞：血吸蟲感染鼠樹突狀細胞抑制過敏性哮喘的機制

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【摘要】：目的研究日本血吸蟲(SJ)感染鼠樹突狀細胞(DC)在抑制過敏性哮喘中的作用機制。方法第一部分,利用過繼轉移實驗研究SJ感染鼠DC亞型在抑制過敏性哮喘疾病中的作用,我們用CD8α+磁珠和CD11c+磁珠分離純化SJ感染鼠、SEA致敏鼠及正常鼠DC亞群CD8α+CD11c+及CD8α-CD11c+細胞,一部分用于qRT-PCR檢測各DC亞型分泌細胞因子的表達,另一部分通過尾靜脈過繼轉移給正常小鼠(5×105 DC/只),1 h后誘發(fā)哮喘。4周后取小鼠肺組織作病理切片,觀察其炎癥變化。收集小鼠脾細胞培養(yǎng)的上清液、肺泡灌洗液、血清,用于檢測細胞因子IL-4、IL-5、IL-10、IL-12、TGF-β及OVA特異性IgE水平;第二部分,探討SEA刺激后DC在誘導CD4+T分化方向改變中的作用。我們在體外培養(yǎng)骨髓DC,并用可溶性蟲卵抗原(SEA)刺激18h,以LPS刺激作為陽性對照,以Medium刺激作為陰性對照。流式細胞術(FACS)、免疫組化和qRT-PCR檢測刺激后DC表面標志和分泌細胞因子的變化。將刺激后的DC與OVA誘導哮喘小鼠脾臟中的CD4+T共培養(yǎng)48h、72h后用qRT-PCR的方法檢測CD4+T分泌細胞因子的變化;第三部分,從支氣管粘液分泌的角度探討SJ感染小鼠抑制過敏性哮喘的機制。我們用SJ感染小鼠以及過繼轉移SEA致敏鼠DC亞型并誘發(fā)哮喘后取小鼠肺臟做HE和PAS染色并檢測肺部MUC5ACmRNA表達情況,觀察炎癥和黏液分泌的變化。利用qRT-PCR檢測肺部IL-13mRNA表達的變化,用IHC觀察小鼠肺部IL-13和CD4+T的表達位置。體外培養(yǎng)骨髓DC并用SEA刺激后qRT-PCR檢測IL-13mRNA的變化,將DC與CD4+T共培養(yǎng)48h和72h分別后用qRT-PCR檢測CD4+T表達IL-13mRNA的變化。結果第一部分,qRT-PCR法檢測顯示CD8α-DC與CD8α+DC相比無論是感染組還是正常組CD11b mRNA水平均明顯降低(P0.05),SJCD8α-DC組的CD80m RNA、CD86mRNA水平相對于SJCD8α+DC明顯下降(P0.05),而IL-10mRNA水平明顯升高(P0.05),TGF-βmRNA(P0.001)和IL-12 mRNA表達降低(P0.05)。肺部病理學結果顯示過繼轉移SJ/SEA小鼠CD8α-DC與其他組相比炎癥明顯減輕(P0.05)。ELISA檢測血清中OVA特異性IgE結果顯示過繼轉移SJ/SEA小鼠CD8α-DC組與其他組相比明顯下降(P0.05),檢測過繼轉移SJ/SEA小鼠CD8α-DC組的BALF和脾細胞培養(yǎng)上清液中IL-4、IL-5水平明顯升高(P0.05),而IL-10、TGF-β水平明顯升高(P0.05)。第二部分,FASC檢測SEA刺激后DC與LPS刺激后DC相比,表面標志CD80、CD86、CD40表達下降。IHC檢測結果顯示SEADC與LPSDC相比,CD11c表達率降低。qRT-PCR檢測結果顯示SEADC與LPSDC相比,表面標志CD80m RNA(P0.05)、CD86mRNA表達下降(P0.05),SEADC與MediumDC相比細胞因子IL-1βmRNA(P0.05)、IL-10 mRNA(P0.05)、IL-12 mRNA(P0.05)、IL-6mRNA(P0.05)、IL-23 mRNA(P0.05)表達升高,TGF-βmRNA表達無顯著性差異。SEADC誘導OVA CD4+T與MediumDC相比表達IFN-γmRNA量降低(P0.05),IL-4mRNA表達升高(P0.05),IL-10mRNA表達升高(P0.05),IL-17mRNA表達量低(P0.05)。第三部分,SJ感染小鼠并誘發(fā)哮喘后肺部病理HE和PAS染色結果結果顯示SJ+OVA組小鼠與OVA組相比支氣管粘液分泌減輕,肺部MUC5AC表達減弱(P0.01)。肺部IHC結果顯示SJ+OVA組小鼠與OVA組相比IL-13表達區(qū)域減少,并且通過與CD4合染發(fā)現(xiàn)IL-13主要由CD4+T分泌。qRT-PCR檢測結果顯示SJ+OVA組小鼠肺部IL-13mRNA與OVA組相比明顯下降(P0.05),ELISA檢測脾細胞培養(yǎng)上清液中IL-13表達下降(P0.05)。過繼轉移SJ感染鼠DC到正常小鼠并誘發(fā)哮喘后發(fā)現(xiàn)脾細胞培養(yǎng)上清液中IL-13與過繼轉移正常小鼠DC并誘發(fā)哮喘組小鼠相比表達下降(P0.05)。體外培養(yǎng)骨髓DC細胞,qRT-PCR檢測結果顯示SEADC與LPSDC相比,IL-13mRNA表達下降(P0.05)。將DC與CD4+T共培養(yǎng),qRT-PCR檢測結果顯示SEADC誘導CD4+T表達IL-13mRNA與LPSDC相比明顯下降(P0.05)。結論SEA刺激后DC處于低分化狀態(tài),并且可以誘導CD4+T向Tregs方向分化。SJ/SEA小鼠CD8α-CD11c+D可以通過分泌IL-10等細胞因子促進Tregs的分化從而抑制過敏性哮喘的發(fā)生。SJ感染小鼠DC還可以抑制CD4+T分泌IL-13從而抑制支氣管粘液的分泌。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R562.25;R532.21

【共引文獻】

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中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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本文編號：1213692