本文關鍵詞：mT0R-Cdc42信號通路在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬細胞吞噬功能低下中的作用及機制

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【摘要】：目的:探討哺乳動物雷帕霉素靶蛋白-細胞分裂周期蛋白42(m TOR-Cdc42)信號通路在慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)小鼠肺泡巨噬細胞(AM)吞噬功能低下中的作用。方法:將40只SPF級8周齡雄性BALB/c小鼠按隨機數(shù)字表法分為健康對照組、慢阻肺組、健康雷帕霉素組及慢阻肺雷帕霉素組,每組10只。采用90天單純香煙煙霧暴露法建立慢阻肺小鼠模型,造模結束后觀察各組小鼠的肺功能及病理變化,分離小鼠AM,其中健康雷帕霉素組及慢阻肺雷帕霉素組用終濃度10nmol/L雷帕霉素孵育24h。采用流式細胞術檢測小鼠AM吞噬異硫氰酸酯熒光素標記大腸桿菌(FITC-E.coli)的能力;采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測AM m TOR及Cdc42 m RNA的表達;采用蛋白印跡(Western Blot)法檢測AM m TOR、磷酸化-m TOR(p-m TOR)以及Cdc42蛋白的表達;采用小G蛋白活性(G-LISA)試劑盒檢測AM Cdc42的活性;采用激光共聚焦顯微鏡觀察AM細胞骨架變化。結果:(1)慢阻肺小鼠模型的肺功能及肺組織病理改變:吸氣峰流速(PIF)、呼氣峰流速(PEF)和呼出50%潮氣量時的流速(EF50):慢阻肺組(7.5±1.0、4.67±0.6、3.29±0.43)明顯低于健康對照組(11.61±1.12、7.63±0.44、5.05±0.37)(均P0.01);慢阻肺小鼠肺組織光鏡下可見明顯的支氣管炎癥和肺氣腫改變,健康對照組小鼠無上述改變。(2)AM吞噬FITC-E.coli的能力:用平均熒光強度(MFI)和吞噬陽性細胞百分比(吞噬%)表示:慢阻肺組(4060±590、28.65±1.26)較健康對照組(9190±988、67.50±4.56)明顯降低(均P0.01);慢阻肺雷帕霉素組(4856±762、38.31±1.71)比慢阻肺組增高(P0.05或P0.01);健康雷帕霉素組(9207±967、67.91±3.64)較健康對照組無差異。(3)AM m TOR、Cdc42 m RNA的表達:慢阻肺組AM m TOR、Cdc42 m RNA的表達(2.62±0.46、2.56±0.50)較健康對照組(1.00±0.00、1.00±0.00)明顯增加(均P0.01);慢阻肺雷帕霉素組AM m TOR、Cdc42 m RNA的表達(1.40±0.36、1.38±0.34)較慢阻肺組明顯降低(均P0.01);健康雷帕霉素組AM m TOR、Cdc42 m RNA的表達(0.94±0.37、0.90±0.34)較健康對照組無差異。(4)AM m TOR、p-m TOR以及Cdc42蛋白表達:慢阻肺組(1.3047±0.5188、1.4645±0.4330、1.6121±0.3749)較健康對照組(0.4829±0.2674、0.5798±0.2552、0.6671±0.2168)明顯增加(均P0.01);慢阻肺雷帕霉素組(0.8996±0.6634、0.9208±0.2771、0.9143±0.4764)較慢阻肺組降低(P0.05或P0.01);健康雷帕霉素組(0.4725±0.2845、0.5592±0.2176、0.6368±0.22)較健康對照組無差異。(5)AM Cdc42的活性:慢阻肺組(0.4591±0.0853)較健康對照組(0.2995±0.0674)明顯升高(P0.01);慢阻肺雷帕霉素組(0.3616±0.060)較慢阻肺組降低(P0.01);而健康雷帕霉素組(0.2668±0.0572)較健康對照組無差異。(6)AM細胞骨架變化:慢阻肺組AM細胞周圍可見絲狀偽足伸出雜亂、長短不一,板狀偽足面積增加;慢阻肺雷帕霉素組AM細胞形態(tài)規(guī)則,呈圓形或橢圓形,周圍可見較長的絲狀偽足;健康對照組和健康雷帕霉素組AM細胞形態(tài)規(guī)則,呈圓形或者橢圓形,細胞周圍未見明顯的絲狀偽足。(7)相關性分析:各組小鼠AM m TOR和Cdc42的m RNA、蛋白,p-m TOR蛋白以及Cdc42的活性與AM吞噬FITC-E.coli的平均熒光強度均呈負相關(P0.05或P0.01);各組小鼠AM m TOR的m RNA、蛋白及p-m TOR蛋白與Cdc42的m RNA、蛋白和活性均呈正相關(P0.05或者P0.01)。結論:單純香煙煙霧可復制慢阻肺小鼠模型;慢阻肺小鼠AM吞噬功能降低;m TOR-Cdc42信號通路在慢阻肺小鼠AM中處于活化狀態(tài);m TOR-Cdc42信號通路活化致慢阻肺小鼠AM細胞骨架異常重排與其吞噬功能低下有關;雷帕霉素抑制慢阻肺m TOR-Cdc42信號通路,部分恢復慢阻肺小鼠AM吞噬功能。
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R563.9

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1 王云潔;mT0R-Cdc42信號通路在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬細胞吞噬功能低下中的作用及機制[D];蘭州大學;2016年

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本文編號：1141294