本文關(guān)鍵詞：抗結(jié)核治療對結(jié)核性胸膜炎巨噬細胞的作用及機制

  更多相關(guān)文章： 巨噬細胞 結(jié)核性胸膜炎 抗結(jié)核藥物 表型 基因型

【摘要】：目的： 結(jié)核性胸膜炎在肺外結(jié)核病中占有很大比例，在其所處的免疫微環(huán)境可觀察到典型的由巨噬細胞誘導的遲發(fā)型超敏反應(yīng)。巨噬細胞在機體抗結(jié)核分枝桿菌感染的免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，它是機體抗結(jié)核桿菌感染的首要防線，同時亦是結(jié)核菌在宿主體內(nèi)長期寄生的場所。巨噬細胞的功能狀態(tài)與結(jié)核病的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)。目前，臨床仍采用標準四聯(lián)療法治療結(jié)核病，對藥物的抗菌作用及機制研究已很深入及明確，然而藥物對免疫細胞尤其對巨噬細胞的功能是否存在調(diào)節(jié)，目前研究并不深入。有限的研究僅停留在以動物實驗、人巨噬細胞的體外實驗、以及人外周血為觀察對象的間接證據(jù)上，缺少針對人體結(jié)核病灶微環(huán)境進行的系統(tǒng)闡述。鑒于此，本研究擬通過對結(jié)核性胸膜炎患者經(jīng)抗結(jié)核治療后胸膜巨噬細胞表型、功能與基因型的檢測，以及體外藥物對胸膜巨噬細胞的直接刺激，觀察胸膜巨噬細胞的上述變化，探討四種抗結(jié)核藥物對巨噬細胞產(chǎn)生的直接作用及調(diào)節(jié)機制，進而闡明巨噬細胞在結(jié)核病治療中發(fā)揮的作用及機制，如能明確其作用靶點，可為結(jié)核性胸膜炎的治療及轉(zhuǎn)歸提供重要的理論依據(jù)，對結(jié)核病化療方案的調(diào)整、預(yù)后分析以及抗結(jié)核藥物研發(fā)等方面均具有重要臨床意義及價值。 方法： 流式細胞術(shù)檢測胸膜巨噬細胞百分率的變化與其表面標志物的表達，以及胸膜巨噬細胞的吞噬功能；ELISA法檢測抗結(jié)核治療后胸腔積液中細胞因子的變化；對抗結(jié)核治療前后的標本中的純化巨噬細胞進行深度測序，qPCR對其進行驗證；采用qPCR方法檢測IS6110基因，對胸腔積液中結(jié)核菌進行絕對定量分析；抗結(jié)核藥物單藥及聯(lián)合體外刺激純化的巨噬細胞，流式細胞術(shù)檢測巨噬細胞表面標志物表達，qPCR方法檢測基因表達水平。 結(jié)果： 在體： 1經(jīng)抗結(jié)核藥物治療后，患者胸膜巨噬細胞表面標志物CD14、CD80、CD163及CD206熒光強度明顯升高（MFI：p=0.045，p=0.026，p=0.016，p=0.005），后三種因子陽性細胞百分率亦增高(Percentage：p=0.041，p=0.006，p=0.003）;群體水平即非配對樣本分析,與上述結(jié)果一致（MFI：p=0.017，p=0.0001，p0.0001，p=0.0001; Percentage：p=0.002，p0.0001，p=0.0003），CD86熒光強度升高（MFI：p=0.004）。 2T細胞亞群CD3+CD4+及CD3+CD8+在治療前后百分率略有降低，CD3-CD19+及CD3-CD56+僅個別樣本有升高或降低，但均無統(tǒng)計學差異（p=0.578，p=0.424，p=0.602，p=0.923）, CD3+CD4+/CD3+CD8+亦無統(tǒng)計學意義（p=0.225） 3同一樣本經(jīng)抗結(jié)核藥物治療前后，巨噬細胞吞噬多個Beads的細胞平均百分數(shù)從79.74±8.30%增至84.37±6.28%（p=0.035）。 4抗結(jié)核治療后胸腔積液中促炎因子IFN-γ及TNF-α水平均較治療前降低（p0.0001，p=0.045），，抗炎因子IL-10水平亦降低（p0.0001）。 5經(jīng)抗結(jié)核治療后胸膜巨噬細胞有230個基因表達發(fā)生變化，其中156個基因表達上調(diào)，74個基因表達下調(diào)。與殺菌作用相關(guān)的基因COLEC12、CHI3L1、FNBP1L表達均上調(diào)（p=0.0363，0.0022，0.0034）；巨噬細胞產(chǎn)生的趨化因子CCL18及CXCL5表達增加（p=0.0024，0.0013）；促炎凋亡因子Caspase5表達量減少（p=0.0036）；而受干擾素調(diào)節(jié)的IFIT3、IFIT2及IFIT1表達均降低（p=0.0006，0.0015，0.0187）；趨化因子CXCL10及CCL8表達下調(diào)（p=0.0105，0.0155）。 離體： 6體外抗結(jié)核藥物處理胸膜巨噬細胞，給藥組巨噬細胞表面標志物CD14、CD80、CD86、CD163、CD206熒光強度不同程度增高，CD14、CD80、CD86、CD206的平均熒光強度以聯(lián)合作用組藥物作用最為明顯（MFI: p=0.031, p=0.027, p=0.042, p=0.038）。 7利福平或吡嗪酰胺單獨處理細胞，均可增強CD80及CD86的表達（利福平MFI: p=0.041, p=0.024,吡嗪酰胺MFI: p=0.039,p=0.044）。 8抗結(jié)核藥物吡嗪酰胺或四種藥物聯(lián)合在Cmax劑量作用下分別使胸膜巨噬細胞CHI3L1mRNA表達上調(diào)（p=0.038，0.042）；異煙肼與吡嗪酰胺均可上調(diào)FNBP1L的表達，四藥聯(lián)合應(yīng)用亦可使其表達升高（p=0.018，0.025，0.022）；吡嗪酰胺與四藥聯(lián)合應(yīng)用上調(diào)CCL18的表達（p=0.036，0.045），吡嗪酰胺單藥與四種藥物聯(lián)合作用于巨噬細胞的結(jié)果比較無差異。 結(jié)論： 1抗結(jié)核治療結(jié)核性胸膜炎，促進病灶局部胸膜巨噬細胞的活化，對該處的淋巴細胞不產(chǎn)生明顯作用。 2抗結(jié)核藥物聯(lián)合應(yīng)用，可直接刺激胸膜巨噬細胞表面標志物的表達升高，其中利福平與吡嗪酰胺發(fā)揮了重要作用。 3抗結(jié)核藥物聯(lián)合應(yīng)用，能直接增強胸膜巨噬細胞的吞噬功能，與吡嗪酰胺及異煙肼促CHI3L1或FNBP1L的基因表達有關(guān)。 4吡嗪酰胺可以促進胸膜巨噬細胞趨化因子CCL18的表達上調(diào)，與結(jié)核性胸膜炎胸膜損傷后的修復有關(guān)。 5在體抗結(jié)核藥物聯(lián)合應(yīng)用，降低胸腔積液微環(huán)境中的促炎因子及抗炎因子水平，進而下調(diào)干擾素誘導基因IFIT的表達，可進一步抑制巨噬細胞對促炎因子的釋放，使病灶微環(huán)境趨于穩(wěn)態(tài)。 6在體抗結(jié)核藥物治療可使結(jié)核性胸膜炎巨噬細胞在基因表達水平產(chǎn)生明顯改變，與其參與的免疫防御反應(yīng)密切相關(guān)，以殺菌作用相關(guān)基因的表達上調(diào)和干擾素介導的免疫反應(yīng)相關(guān)因子的表達下調(diào)為主。
【關(guān)鍵詞】：巨噬細胞 結(jié)核性胸膜炎 抗結(jié)核藥物 表型 基因型
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R521.7
【目錄】：

• 前言4-6
• 中文摘要6-10
• Abstract10-20
• 第1章 綜述20-30
• 1.1 巨噬細胞亞型的研究進展20-23
• 1.1.1 巨噬細胞的分型及功能20-22
• 1.1.2 巨噬細胞亞型與疾病的關(guān)系22-23
• 1.2 結(jié)核分枝桿菌的免疫學23-24
• 1.2.1 結(jié)核分枝桿菌及其感染的概況23
• 1.2.2 機體免疫力在抵抗結(jié)核分枝桿菌方面的作用23
• 1.2.3 對結(jié)核分枝桿菌有防御功能的細胞類型23-24
• 1.3 巨噬細胞抗結(jié)核分支桿菌活動24-30
• 1.3.1 巨噬細胞作用于結(jié)核分枝桿菌的產(chǎn)物25-27
• 1.3.2 巨噬細胞對結(jié)核桿菌生長的限制27-30
• 第2章 實驗研究30-86
• 2.1 實驗 1 抗結(jié)核藥物對結(jié)核性胸膜炎胸膜巨噬細胞表型與功能的影響32-50
• 2.1.1 實驗材料32-35
• 2.1.2 實驗方法35-39
• 2.1.3 實驗結(jié)果39-45
• 2.1.4 討論45-49
• 2.1.5 小結(jié)49-50
• 2.2 實驗 2 抗結(jié)核藥物對結(jié)核性胸膜炎胸膜巨噬細胞基因譜的影響50-68
• 2.2.1 實驗材料50-52
• 2.2.2 實驗方法52-56
• 2.2.3 實驗結(jié)果56-66
• 2.2.4 討論66-67
• 2.2.5 小結(jié)67-68
• 2.3 實驗 3 體外抗結(jié)核藥物處理對巨噬細胞基因、表型及功能的影響及機制68-86
• 2.3.1 實驗材料68-71
• 2.3.2 實驗方法71-74
• 2.3.3 實驗結(jié)果74-80
• 2.3.4 討論80-83
• 2.3.5 小結(jié)83-86
• 結(jié)論86-88
• 創(chuàng)新點88-90
• 參考文獻90-114
• 在學期間所取得的科研成果114-116
• 致謝116

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Xing-Qing Pan;;The mechanism of the anticancer function of M1 macrophages and their use in the clinic[J];癌癥;2012年12期

本文編號：1110439