本文關(guān)鍵詞：血小板在免疫調(diào)節(jié)中的作用研究

  更多相關(guān)文章： 血小板 哮喘 CD154 內(nèi)毒素休克 IL-1 腫瘤轉(zhuǎn)移 vwf

【摘要】：血小板對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)控作用在最近幾年受到免疫學(xué)界的廣泛重視,尤其是在各種免疫疾病中,血小板和血小板來(lái)源的免疫分子在自身免疫病和腫瘤中的作用更是普遍關(guān)注的焦點(diǎn)。本研究各部分工作擬通過(guò)不同的疾病模型探討疾病狀況下血小板對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)控作用。。第一部分血小板的促哮喘作用在血液中血小板的數(shù)量?jī)H次于紅細(xì)胞,除了在凝血及血栓形成中起關(guān)鍵性作用,長(zhǎng)久以來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)血小板參與免疫調(diào)節(jié),和多種自身免疫病的發(fā)生密切相關(guān)。血小板是由骨髓中巨核細(xì)胞分化而來(lái),本身無(wú)核,不具有蛋白合成的機(jī)制,活化過(guò)程中釋放的多種可溶性因子或膜表面配體一般認(rèn)為是預(yù)先合成儲(chǔ)存于細(xì)胞器中,主要是α顆粒和致密顆粒中。[2]一系列研究表明血小板活化之后釋放大量具有免疫調(diào)節(jié)的可溶性因子,其中包括IL-1 [27,28], HMGB1[29], CXCL7[30], PF4 (CXCL4)[30], GRO-(CXCL1), ENA-78 (CXCL5), IL-8 (CXCL8), RANTES (CCL5) [34], MIP-1 (CCL3) [34]和MCP-3 (CCL7) IL-7等。血小板活化后也同時(shí)釋放大量具有免疫調(diào)節(jié)作用的膜表面配體,其中包括CD62P(P-Selectin) [36], CD41/62 (GP Ⅱb/Ⅲa) [36], ICAM-2[54], CD154 (CD40L) [38], FasL (CD95L) [40], TRAIL (Apo2L) [41]以及CD40,這些膜表面配體主要存在于血小板活化后的微顆粒中。長(zhǎng)久以來(lái)對(duì)過(guò)敏性哮喘的研究工作表明,哮喘病人或小鼠血液中或肺泡灌洗液中存在大量血小板活化的狀況[26],然而血小板的過(guò)度活化同哮喘發(fā)生的關(guān)系以及作用機(jī)制一直不是很確切。在本文的研究工作中,我們采用霧化吸入OVA誘導(dǎo)Balb/c小鼠哮喘的模型,結(jié)合使用血小板過(guò)繼以及血小板清除抗體,闡明血小板在哮喘發(fā)生過(guò)程中的作用,同時(shí)采用CD154敲除鼠闡明血小板來(lái)源的CD154在哮喘發(fā)生過(guò)程中起著重要的促進(jìn)作用。第二部分血小板在內(nèi)毒素休克中的作用內(nèi)毒素如LPS對(duì)血小板的激活是這幾年血小板研究領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn),多種TLR配體可以激活血小板。[55]內(nèi)毒素休克過(guò)程中,血液中存在大量TLR配體,可以激活血液中的血小板。激活的血小板釋放大量具有免疫調(diào)節(jié)作用的可溶性因子和配體可能對(duì)內(nèi)毒素休克具有調(diào)節(jié)作用。具體血小板在急性內(nèi)毒素休克中的作用尚未清楚,本部分工作通過(guò)清除或過(guò)繼血小板探討血小板在內(nèi)毒素休克中的作用。在內(nèi)毒素休克過(guò)程中,體內(nèi)大量產(chǎn)生的IL-1 β是小鼠致病和致死的重要原因,對(duì)IL-1 β信號(hào)的下調(diào)在體內(nèi)主要是通過(guò)IL-1R1 antagonist (IL-1Ra)完成的,在本部分工作中我們發(fā)現(xiàn)血小板表面有大量IL-1R1,活化后降解為可溶性IL-1R1,血小板可能通過(guò)釋放這種類似decoy receptor降低體內(nèi)IL-1 β下游作用第三部分血小板在乳腺癌肺轉(zhuǎn)移中的作用對(duì)乳腺癌小鼠以及乳腺癌病人的觀察中發(fā)現(xiàn),在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中,機(jī)體產(chǎn)生大量針對(duì)乳腺癌細(xì)胞的自身抗體,而且這些抗乳腺癌的自身抗體在腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要的促進(jìn)作用。既往研究也表明,血小板具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的能力,但具體機(jī)制眾說(shuō)紛紜。去年Cancer Cell上的文章闡明血小板來(lái)源的TGF-β能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞EMT轉(zhuǎn)化,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。另外大量數(shù)據(jù)表明在腫瘤病人或荷瘤小鼠的外周血中存在很多腫瘤細(xì)胞和血小板的結(jié)合物,血小板可能通過(guò)與腫瘤細(xì)胞的結(jié)合從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在血液中的遷移。但血小板通過(guò)何種方式與腫瘤細(xì)胞結(jié)合,具體的機(jī)制并不清楚。國(guó)外一項(xiàng)血小板輔助革蘭氏陽(yáng)性菌在血液中遷移的文章引起了我們的注意[50]。該項(xiàng)研究表明,革蘭氏陽(yáng)性菌,如李斯特菌表面多糖可以以非經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體通路,在對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和血小板結(jié)合物的研究中發(fā)現(xiàn),如果清楚補(bǔ)體,或者阻斷血小板表面的GPIb,可以有效地阻斷血小板和李斯特菌的結(jié)合,提示我們補(bǔ)體和血小板表面的GPIb是參與革蘭氏菌和血小板結(jié)合的關(guān)鍵分子。另外一項(xiàng)類似的研究結(jié)果表明,血小板表面的GPIb可以與大量存在于血液中的一個(gè)寡聚大分子von willbrand factor (VWF)的D’D3結(jié)合,在以往對(duì)VWF的結(jié)構(gòu)分析中,VWF的A1結(jié)構(gòu)域被認(rèn)為很可能含有免疫球蛋白的結(jié)合位點(diǎn)。[51]基于以上發(fā)現(xiàn),我們假設(shè)：乳腺癌病人或荷瘤小鼠體內(nèi)存在的抗乳腺癌細(xì)胞自身抗體可以與乳腺癌細(xì)胞形成抗原抗體復(fù)合物,并與VWF的A1結(jié)構(gòu)域結(jié)合,VWF的另一端的D’D3可以與血小板表面的GPIb結(jié)合,從而形成乳腺癌細(xì)胞-自身抗體-VWF-血小板的復(fù)合物。腫瘤細(xì)胞通過(guò)抗腫瘤細(xì)胞抗體和vwf的橋聯(lián)完成與血液中血小板的結(jié)合,從而借助與血小板的結(jié)合輔助腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。為了驗(yàn)證這一假設(shè),我們克隆了小鼠vwf的A1和D’D3序列,并在小鼠乳腺癌細(xì)胞4T1中分別過(guò)表達(dá),通過(guò)G418篩選過(guò)表達(dá)克隆,接種于Balb/c小鼠乳腺皮下,觀察不同過(guò)表達(dá)株在體內(nèi)肝臟及肺轉(zhuǎn)移情況。
【關(guān)鍵詞】：血小板 哮喘 CD154 內(nèi)毒素休克 IL-1 腫瘤轉(zhuǎn)移 vwf
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R562.25
【目錄】：

• 致謝6-8
• 序言8-10
• 中文摘要10-13
• Abstract13-17
• 縮略詞表17-20
• 第一部分 血小板的促哮喘作用研究20-40
• 1 引言20-21
• 2 材料與方法21-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法21-23
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-36
• 3.1 OVA霧化吸入誘導(dǎo)呼吸道血小板活化23-24
• 3.2 血小板過(guò)繼暫時(shí)性提高肺泡灌洗液中血小板數(shù)目,血小板清除性抗體暫時(shí)降低肺泡灌洗液中血小板數(shù)目24-25
• 3.3 過(guò)繼血小板后哮喘程度加重,清除血小板后哮喘程度減輕25-29
• 3.4 CD154敲除血小板促哮喘能力明顯低于野生型血小板29-34
• 3.5 血小板通過(guò)表面CD154抑制Treg分化34-36
• 4 討論36-38
• 5 結(jié)論38-40
• 第二部分 血小板在內(nèi)毒素休克中的作用40-55
• 1 引言40-41
• 2 材料與方法41-43
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料41
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法41-43
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-52
• 3.1 清除血小板后小鼠對(duì)亞致死劑量LPS敏感43-44
• 3.2 過(guò)繼血小板可以保護(hù)小鼠抵抗致死劑量LPS44-45
• 3.3 過(guò)繼/清除血小板后,LPS刺激IL-1β水平變化不顯著45-46
• 3.4 清除血小板后,LPS刺激產(chǎn)生持久大量IL-646-47
• 3.5 血小板表面高表達(dá)IL-1R147-49
• 3.6 骨髓來(lái)源的IL-1R1在亞致死劑量LPS刺激中起保護(hù)作用49-52
• 4 討論52-53
• 5 結(jié)論53-55
• 第三部分 血小扳在乳腺癌轉(zhuǎn)移模型中的功能55-64
• 引言55-57
• 材科與方法57-60
• 結(jié)果60-64
• 參考文獻(xiàn)64-71
• Review: Platelet modulation of immune responses71-82
• References75-82

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本文編號(hào)：1080560