發(fā)布時間：2017-10-06 11:37

  本文關鍵詞：體外共培養(yǎng)條件下種植窗期子宮內(nèi)膜與胚胎相互作用的研究

  更多相關文章： 體外共培養(yǎng) 種植窗期 白血病抑制因子(LIF) 胰島素樣生長因子(IGF) 子宮內(nèi)膜容受性 胚胎發(fā)育

【摘要】：背景及目的醫(yī)學發(fā)展的不斷進步,總會有震驚世界的奇跡出現(xiàn)。20世紀世界首例試管嬰兒的誕生,讓研究者們看到了打破常規(guī)的生育方法,為數(shù)以萬計的不孕患者解決了生育難題。不孕癥不僅在國外多發(fā),在國內(nèi),飽受生育困難的不孕夫婦也不在少數(shù)。在中國,傳宗接代已成為每個家庭的必須,生育一個健康的寶寶成了多數(shù)家庭的渴望。輔助生殖技術的發(fā)展為許多不孕患者帶來希望,在某種程度上,不僅維系了家庭的和諧,更為社會的和諧提供了支點。ART技術發(fā)展已有30余年,但成功率仍有待進一步提高。在正常女性月經(jīng)周期中,胚胎著床是在很短的時間內(nèi)完成的。這一過程十分復雜,能否成功妊娠的關鍵就取決于子宮內(nèi)膜對胚胎的接受能力。母體子宮內(nèi)膜對胚胎的接受能力,即為子宮內(nèi)膜容受性(endometrial receptivity)�！胺N植窗期”(implantation window)通常發(fā)生于正常女性月經(jīng)周期排卵后第6-7天,此時,子宮內(nèi)膜對胚胎的接受能力達到最佳狀態(tài),子宮內(nèi)膜容受性最高,胚胎能夠順利著床。已有廣泛學者研究證明,人類白血病抑制因子(human leukemia inhibitory growth factor,LIF)和胰島素樣生長因子(insulim-like growth factor,IGF)可同時作用于子宮內(nèi)膜和胚胎,兩者的表達在女性黃體期逐漸升高,在種植窗期達到高峰,與子宮內(nèi)膜容受性的形成密切相關,且與子宮內(nèi)膜對胚胎的接受能力呈正相關,是保證胚胎著床和妊娠成功的關鍵因子。在臨床工作中,大齡女性患者的卵巢儲備功能下降,卵子質(zhì)量遠不如年輕女性的理想,取卵后,在實驗室培養(yǎng)成的胚胎質(zhì)量較差,移植進入宮腔后,胚胎著床能力也就較差,以致于使胚胎種植率和臨床妊娠率始終處于較低水平。因此,國外已經(jīng)有很多學者從動物實驗出發(fā),應用共培養(yǎng)技術來提高大齡患者的胚胎種植率和臨床妊娠率。到目前為止,研究較為成熟的就是利用子宮內(nèi)膜上皮細胞作為飼養(yǎng)層,與胚胎構建共培養(yǎng)體系,模擬胚胎在母體子宮內(nèi)的生長環(huán)境。由于共培養(yǎng)體系更加接近母體的生長環(huán)境,可以提供胚胎生長狀態(tài)下所需的各種營養(yǎng)物質(zhì),同時又可以分泌多種有助于胚胎生長和提高子宮內(nèi)膜容受性的相關因子,如LIF,IGF,EGF等多種因子,在一定程度上優(yōu)化了胚胎質(zhì)量,促進胚胎程序化生長,提高了胚胎著床能力,進一步為后期胚胎種植率和臨床妊娠率的提高做準備。本實驗以此為背景,在體外條件下共培養(yǎng)子宮內(nèi)膜和胚胎,構建體外共培養(yǎng)模型,采用RT-PCR法檢測與子宮內(nèi)膜容受性相關的兩個因子LIF和IGF在子宮內(nèi)膜上的表達水平,探討其在種植窗期的表達規(guī)律,并觀察共培養(yǎng)條件下胚胎的生長情況,分析種植窗期子宮內(nèi)膜與胚胎之間的相互作用及分子對話,揭示胚胎植入的機制,探討共培養(yǎng)的優(yōu)越性,進一步為優(yōu)化臨床治療方案提供理論依據(jù)。材料和方法選擇2014年6月到2015年6月在鄭州大學第二附屬醫(yī)院生殖中心行人工助孕的10例患者,取卵后因有卵巢過度刺激綜合征傾向,取消移植,這些患者均于取卵后第3天取子宮內(nèi)膜,和實驗室的冷凍年限較久(1-3年),患者已無生育要求,主動廢棄不要的評分I-II級的優(yōu)質(zhì)冷凍胚胎組成子宮內(nèi)膜與胚胎共培養(yǎng)組(A組),以單獨子宮內(nèi)膜培養(yǎng)組(B組)和單獨胚胎培養(yǎng)組(C組)作為對照組,采用RT-PCR法分別于取卵后D3、D4、D5、D6、D7天檢測子宮內(nèi)膜與胚胎共培養(yǎng)組(A組)和單獨子宮內(nèi)膜培養(yǎng)組(B組)LIFm RNA和IGFm RNA的表達水平,并在顯微鏡下觀察子宮內(nèi)膜與胚胎共培養(yǎng)組(A組)和單獨胚胎培養(yǎng)組(C組)的胚胎生長情況,比較其囊胚形成率。研究所采用的數(shù)據(jù)處理軟件是SPSS20.0,所有數(shù)據(jù)輸入統(tǒng)計分析軟件,用重復測量數(shù)據(jù)方差分析進行檢測,P0.05認為有統(tǒng)計學差異。結果1.LIF和IGF兩種因子m RNA在子宮內(nèi)膜與胚胎共培養(yǎng)組(A組)呈陽性表達,在取卵后D3、D4、D5、D6、D7天表達量逐漸升高,在D6,D7天呈強陽性表達,表達量升高最為明顯。2.LIF和IGF兩種因子m RNA在單獨子宮內(nèi)膜培養(yǎng)組(B組)呈陽性表達,在取卵后D3、D4、D5、D6、D7天表達量逐漸升高,在D6,D7天呈強陽性表達,表達量升高最為明顯。3.子宮內(nèi)膜與胚胎共培養(yǎng)組(A組)的LIF和IGF兩種因子m RNA在子宮內(nèi)膜中的表達顯著高于對照組單獨子宮內(nèi)膜培養(yǎng)組(B組),且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.在顯微鏡下觀察可見,子宮內(nèi)膜與胚胎共培養(yǎng)組(A組)胚胎碎片少,卵裂球均勻,形態(tài)規(guī)則,胚胎發(fā)育速度相對單獨胚胎培養(yǎng)組(C組)較快,桑葚胚形成率,囊胚形成率高于單獨胚胎培養(yǎng)組(C組)。結論1.LIF和IGF兩種因子是子宮內(nèi)膜容受性的標志性分子。2.排卵后D6,D7天即是種植窗期,此時子宮內(nèi)膜容受性最佳,子宮內(nèi)膜對胚胎接受能力最好,胚胎著床能力最高。3.共培養(yǎng)體系更加符合胚胎在母體子宮內(nèi)的生長環(huán)境,子宮內(nèi)膜細胞分泌多種細胞因子,有助于胚胎的發(fā)育和著床。共培養(yǎng)體系使子宮內(nèi)膜和胚胎相互協(xié)調(diào)相互促進,有助于雙方的共同發(fā)育。
【關鍵詞】：體外共培養(yǎng) 種植窗期 白血病抑制因子(LIF) 胰島素樣生長因子(IGF) 子宮內(nèi)膜容受性 胚胎發(fā)育
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R714.8
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 中英文縮略詞對照表12-13
• 前言13-16
• 材料和方法16-25
• 結果25-30
• 討論30-38
• 結論38-39
• 參考文獻39-44
• 綜述部分 體外共培養(yǎng)對改善人類體外受精-胚胎移植技術的新進展44-62
• 參考文獻54-62
• 個人簡歷、在研究生期間發(fā)表的學術論文及研究成果62-63
• 致謝63

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