本文關(guān)鍵詞：Smac模擬物對(duì)卵巢上皮性癌的體外抗腫瘤及化療增敏作用研究

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【摘要】：目的本研究旨在以凋亡抑制蛋白IAPs為腫瘤治療新靶點(diǎn),選擇人工合成的Smac模擬物BV-6為此靶點(diǎn)抑制劑,通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)觀察其有效劑量直接誘導(dǎo)卵巢上皮性癌SKOV3細(xì)胞凋亡發(fā)揮的抗腫瘤作用,以及無(wú)毒劑量降低腫瘤凋亡閾值產(chǎn)生的化療增敏作用,探討Smac模擬物成為新的抗腫瘤藥物和化療增敏藥物應(yīng)用于卵巢癌治療的前景,為臨床上治療卵巢癌,提高化療效果、降低毒副反應(yīng)開辟新的途徑。方法1、MTT法檢測(cè)BV-6不同濃度、不同時(shí)間對(duì)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用,篩選最佳有效劑量和無(wú)毒劑量,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2、光學(xué)顯微鏡觀察應(yīng)用最佳有效劑量BV-6不同時(shí)間后SKOV3細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化。3、RT-PCR法、Western blot法檢測(cè)應(yīng)用最佳有效劑量BV-6不同時(shí)間后SKOV3細(xì)胞內(nèi)TNF-αm RNA、蛋白的表達(dá)。4、MTT法檢測(cè)應(yīng)用無(wú)毒劑量BV-6與DDP不同濃度、不同時(shí)間對(duì)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用,通過(guò)計(jì)算IC50與單用DDP比較,觀察順鉑敏感性的變化,并選擇DDP適宜濃度與無(wú)毒劑量BV-6進(jìn)行聯(lián)合實(shí)驗(yàn)。5、RT-PCR法、Western blot法分別檢測(cè)BV-6組、DDP組與BV-6+DDP組SKOV3細(xì)胞內(nèi)Caspase m RNA、蛋白的表達(dá)。結(jié)果1、MTT結(jié)果:BV-6能夠有效抑制體外SKOV3細(xì)胞生長(zhǎng),呈時(shí)間-劑量依賴性。根據(jù)細(xì)胞毒性檢測(cè)結(jié)果,BV-6為0.01umol/L時(shí),24h、48h、72h細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率分別為(2.26±0.21)%、(4.50±0.38)%、(8.22±0.66)%,未見顯著細(xì)胞毒性作用。BV-6為0.4umol/L時(shí),生長(zhǎng)抑制率分別為(33.88±0.94)%、(48.67±0.87)%、(58.40±0.79)%,顯著抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng),同時(shí)光鏡下觀察SKOV3細(xì)胞出現(xiàn)凋亡性改變,隨時(shí)間延長(zhǎng)而更加明顯。因此,最終確定最佳有效劑量0.4umol/L、無(wú)毒劑量0.01umol/L進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2、RT-PCR結(jié)果:有效劑量組24h、48h、72h TNF-αm RNA表達(dá)逐漸升高,存在時(shí)間依賴關(guān)系,較對(duì)照組分別升高了0.60倍、1.19倍、1.68倍。其中,TNF-αm RNA 24h與48h表達(dá)含量無(wú)顯著性差異,其他組間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3、Western blot結(jié)果:有效劑量組24h、48h、72h TNF-α蛋白表達(dá)較對(duì)照組顯著升高,分別為0.23倍、0.78倍、1.89倍,隨作用時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增加,各組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、MTT結(jié)果顯示單用DDP 24h、48h、72h IC50分別為14.42±0.17ug/ml、6.73±0.04ug/ml、3.19±0.93ug/m,聯(lián)合無(wú)毒劑量BV-6后DDP IC50降為10.19±0.17ug/ml、3.53±0.04ug/ml、1.32±0.93ug/ml。其中,BV-6組、DDP組與BV-6+DDP組48h細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率分別為(4.50±0.38)%、(47.95±0.98)%、(60.78±0.66)%,BV-6顯著增強(qiáng)了DDP對(duì)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用(P0.05)。5、RT-PCR、Western blot結(jié)果顯示無(wú)毒劑量BV-6組與對(duì)照組Caspase m RNA、蛋白的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而BV-6+DDP組的表達(dá)含量比DDP組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1、高劑量BV-6通過(guò)直接誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞凋亡而發(fā)揮體外抗腫瘤作用,在有效劑量范圍內(nèi)呈時(shí)間-濃度依賴關(guān)系。2、低劑量BV-6可以降低腫瘤細(xì)胞凋亡閾值,增加SKOV3細(xì)胞的順鉑敏感性,具有時(shí)間依賴性,其增敏劑量本身基本無(wú)細(xì)胞毒性作用。3、BV-6可能通過(guò)促進(jìn)TNF-α表達(dá)、活化Caspase,激發(fā)腫瘤細(xì)胞內(nèi)死亡受體凋亡途徑和線粒體凋亡途徑,從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、降低凋亡閾值發(fā)揮抗腫瘤作用以及化療增敏作用。
【關(guān)鍵詞】：卵巢上皮性癌 Smac模擬物 BV-6 TNF-α 抗腫瘤 化療增敏
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、BV-6 誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞凋亡14-36
• 1.1 對(duì)象和方法14-26
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象14
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料14-17
• 1.1.3 SKOV3細(xì)胞培養(yǎng)17-18
• 1.1.4 MTT法篩選BV-6最佳有效劑量和無(wú)毒劑量18-19
• 1.1.5 光鏡觀察BV-6 誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化19-20
• 1.1.6 RT-PCR法檢測(cè)TNF-a mRNA的表達(dá)20-23
• 1.1.7 Western blot法檢測(cè)TNF-a蛋白的表達(dá)23-25
• 1.1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25-26
• 1.2 結(jié)果26-31
• 1.2.1 確定BV-6 最佳有效劑量和無(wú)毒劑量26-28
• 1.2.2 BV-6 誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化28-29
• 1.2.3 BV-6 對(duì)TNF-α mRNA表達(dá)的影響29-30
• 1.2.4 BV-6對(duì)TNF-α蛋白表達(dá)的影響30-31
• 1.3 討論31-35
• 1.4 小結(jié)35-36
• 二、BV-6 增加SKOV3細(xì)胞順鉑敏感性36-46
• 2.1 對(duì)象和方法36-37
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象及材料36
• 2.1.2 MTT法檢測(cè)BV-6 對(duì)順鉑IC50的影響36
• 2.1.3 RT-PCR法、Western Blot法檢測(cè)Caspase的表達(dá)36
• 2.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法36-37
• 2.2 結(jié)果37-41
• 2.2.1 BV-6 對(duì)SKOV3細(xì)胞順鉑順鉑敏感性的影響37-39
• 2.2.2 不同分組Caspase m RNA的表達(dá)39-40
• 2.2.3 不同分組Caspase蛋白的表達(dá)40-41
• 2.3 討論41-45
• 2.4 小結(jié)45-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明52-53
• 綜述 IAPs抑制劑--Smac模擬物的研究進(jìn)展53-61
• 綜述參考文獻(xiàn)57-61
• 致謝61-62
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 強(qiáng)娟;張虹;;Smac和XIAP與卵巢癌細(xì)胞耐藥及凋亡關(guān)系的研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2014年22期

2 李敏;林俊;;細(xì)胞凋亡途徑及其機(jī)制[J];國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志;2014年02期

3 ;Niclosamide,an old antihelminthic agent,demonstrates antitumor activity by blocking multiple signaling pathways of cancer stem cells[J];癌癥;2012年04期

4 徐欣然;張虹;;Smac/DIABLO在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J];國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志;2010年02期

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本文編號(hào)：820772