本文關(guān)鍵詞：先天性心臟病胎兒分子遺傳學(xué)診斷研究

  更多相關(guān)文章： 先天性心臟病 MLPA技術(shù) 22q11.2微缺失和微重復(fù) SNP-array技術(shù) 拷貝數(shù)變異 先天性心臟病 外顯子捕獲 高通量測(cè)序 基因突變

【摘要】：先天性心臟病(Congenital heart disease, CHD)是最常見(jiàn)的出生缺陷�；加邢忍煨孕呐K病的新生兒如果未進(jìn)行及時(shí)的干預(yù)和治療,其中大約有1/3會(huì)在出生后1個(gè)月內(nèi)因嚴(yán)重的病情和畸形而夭折,危害極其嚴(yán)重。流行病學(xué)研究表明環(huán)境因素和遺傳因素共同作用導(dǎo)致了先天性心臟病的發(fā)生,其中遺傳因素起重要作用。對(duì)先心胎兒進(jìn)行遺傳學(xué)檢測(cè)既可明確遺傳背景、為遺傳咨詢提供重要的信息,對(duì)再次生育夫婦進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；也對(duì)先天性心臟病胎兒預(yù)后判斷以及外科手術(shù)的效果具有指導(dǎo)價(jià)值。大量研究證實(shí)引起人類先心病的遺傳變異有染色體疾病、基因組疾病、基因突變等多種變異形式。本研究采用包含G顯帶、多重連接探針擴(kuò)增(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)、單核苷酸多態(tài)性-微陣列比較基因組雜交(Single Nucleotide Polymorphisms array-based comparative genomic hybridization, SNP-array)和外顯子捕獲-高通量測(cè)序(Exon-capture high-throughput sequencing, EC-HTS)綜合技術(shù)系統(tǒng)貫序進(jìn)行先天性心臟病的遺傳學(xué)診斷,尋找致病原因,評(píng)估再發(fā)風(fēng)險(xiǎn),并幫助判斷胎兒預(yù)后,并評(píng)估該體系應(yīng)用于先天性心臟病胎兒遺傳學(xué)檢測(cè)的效果。第一部分先天性心臟病胎兒的拷貝數(shù)變異檢測(cè)目的探討MLPA技術(shù)和SNP-array技術(shù)在檢測(cè)先天性心臟病胎兒拷貝數(shù)變異(copy number variations, CNV)·中的價(jià)值。方法選擇超聲心動(dòng)圖診斷為先天性心臟病且其羊水細(xì)胞培養(yǎng)的G顯帶結(jié)果均正常的236例胎兒作為研究對(duì)象；運(yùn)用MLPA技術(shù)檢測(cè)胎兒的基因組22q11.2的微缺失和微重復(fù)：陰性結(jié)果樣本(226例)進(jìn)一步采用SNP-array技術(shù)進(jìn)行全基因組拷貝數(shù)變異檢測(cè),得到胎兒CNV結(jié)果,進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,明確導(dǎo)致先心的遺傳學(xué)病因,進(jìn)行遺傳咨詢。結(jié)果236例胎兒中共檢測(cè)出10例22q11.2區(qū)域拷貝數(shù)變異,陽(yáng)性檢出率為4.2%(10/236),包括9例微缺失和1例微重復(fù),對(duì)其父母溯源發(fā)現(xiàn)8例微缺失為新發(fā),1例微缺失及1例微重復(fù)均遺傳于父親。SNP-array全基因組拷貝數(shù)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),226例胎兒中共發(fā)現(xiàn)71例CNV,經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),其中23例CNV為致病性,致病性CNV檢出率為10.1%(23/226)；40例CNV為良性病變,8例CNV臨床意義不明。MLPA結(jié)合SNP-array用于先天性心臟病胎兒遺傳學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性檢出率較常規(guī)核型分析提高14.0%(33/236)。結(jié)論基因組拷貝數(shù)變異是先心病胎兒的重要致病原因之一,MLPA技術(shù)和SNP-array技術(shù)可顯著提高先天性心臟病胎兒的CNV檢出率,有助于產(chǎn)前咨詢。第二部分先天性心臟病胎兒基因突變的檢測(cè)——外顯子捕獲一高通量測(cè)序技術(shù)目的運(yùn)用外顯子捕獲-高通量測(cè)序技術(shù)尋找先天性心臟病(Congenital heart disease, CHD)胎兒可能存在的遺傳學(xué)致病突變,并探討外顯子捕獲結(jié)合高通量測(cè)序技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的價(jià)值。方法超聲心動(dòng)圖診斷為先天性心臟病且G顯帶、MLPA和SNP-array檢測(cè)結(jié)果均正常的44例胎兒作為研究對(duì)象；將與人類先天性心臟病相關(guān)的63個(gè)已知致病基因作為檢測(cè)靶點(diǎn)并制成捕獲芯片。各個(gè)樣本DNA進(jìn)行外顯子捕獲后并用高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)行測(cè)序；原始數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)過(guò)濾、數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)、生物學(xué)軟件分析后得到最終病理性突變位點(diǎn)；Sanger測(cè)序進(jìn)一步驗(yàn)證病理性突變位點(diǎn)；并進(jìn)行遺傳咨詢。結(jié)果在44例先天性心臟病胎兒中共檢測(cè)到3560個(gè)基因突變位點(diǎn),數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)、生物信息學(xué)分析后得到16個(gè)可疑的致病性病理突變,其中5個(gè)突變點(diǎn)為已報(bào)道的致病性突變,其余11個(gè)突變位點(diǎn)尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道,明確致病性突變陽(yáng)性檢出率為11.4%；根據(jù)突變類型分類,其中2個(gè)為移碼突變,14個(gè)為錯(cuò)義突變,涉及10個(gè)基因包括：CITED2、CHD7、NOTCH2、JAG1、MYH7、ZFPM2、HAND2、 MLL2、MYH6和MID1,其中HAND2、MYH6和MID1基因遺傳方式未明,其余7個(gè)基因的遺傳方式為常染色體顯性遺傳。16個(gè)突變位點(diǎn)的Sanger測(cè)序驗(yàn)證結(jié)果與高通量測(cè)序結(jié)果均一致。父母溯源分析發(fā)現(xiàn)檢測(cè)得到的致病性突變點(diǎn)均為新發(fā)突變。結(jié)論本研究采用定制的外顯子捕獲芯片結(jié)合高通量測(cè)序技術(shù)在44例先天性心臟病胎兒中檢測(cè)出5例患者存在已知致病性突變是胎兒致病原因,11例存在可疑病理性致病突變。提示基因突變是先心病胎兒的重要原因之一,該技術(shù)用于先天性心臟病胎兒遺傳學(xué)檢測(cè)可顯著提高病因檢出率,對(duì)遺傳咨詢及預(yù)后判斷具有臨床應(yīng)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：先天性心臟病 MLPA技術(shù) 22q11.2微缺失和微重復(fù) SNP-array技術(shù) 拷貝數(shù)變異 先天性心臟病 外顯子捕獲 高通量測(cè)序 基因突變
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R714.5
【目錄】：

• 摘要5-9
• Abstract9-14
• 前言14-18
• 第一部分 先天性心臟病胎兒的拷貝數(shù)變異檢測(cè)18-40
• 一、研究對(duì)象與方法18-30
• 二、結(jié)果30-37
• 三、討論37-40
• 第二部分 外顯子捕獲測(cè)序技術(shù)用于先天性心臟病胎兒基因突變的檢測(cè)40-63
• 一、研究對(duì)象和方法41-54
• 二、結(jié)果54-57
• 三、討論57-63
• 全文小結(jié)63-64
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 文獻(xiàn)綜述68-78
• 參考文獻(xiàn)74-78
• 附錄78-80
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況80-81
• 致謝81

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 劉翠云;王艷;孫瑞紅;羅春玉;張菁菁;成建;梁棟;馬定遠(yuǎn);胡平;許爭(zhēng)峰;;外顯子捕獲-高通量測(cè)序技術(shù)用于法洛四聯(lián)癥胎兒遺傳學(xué)檢測(cè)[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2015年06期

2 郭奕斌;;基因診斷中測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用及優(yōu)缺點(diǎn)[J];遺傳;2014年11期

3 楊月華;胡婭莉;朱湘玉;莫緒明;王東進(jìn);姚金翠;盛敏;朱海燕;李潔;茹彤;王志群;;多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)在先天性心臟病22q11微缺失/微重復(fù)綜合征診斷中的應(yīng)用[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2009年11期

，

本文編號(hào)：608332