本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導妊娠期慢性應激促進子代成年后海馬Aβ形成及維生素D的保護作用

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【摘要】：目的:(1)探討妊娠期慢性應激是否通過子代海馬神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激,激活PERK,促使e IF2α磷酸化,引起B(yǎng)ACE1 m RNA翻譯增加,最終導致BACE1蛋白含量增加,從而促進Aβ的生成。(2)通過給予維生素D并檢測子鼠海馬組織GRP78、磷酸化的PERK、磷酸化e IF2α蛋白水平。探討維生素D對妊娠期慢性應激促進子代海馬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激是否有抑制作用。方法:以6個月齡的子代APPswe/PS1d E9雙轉(zhuǎn)基因小鼠為研究對象,實驗小鼠隨機分成4組,即產(chǎn)前慢性應激-子代慢性應激組(CPS+COS)、產(chǎn)前慢性應激-子代正常處理組(CPS)、產(chǎn)前正常處理-子代慢性應激組(COS)、產(chǎn)前正常處理-子代正常處理組(對照組)。對于4組的子代小鼠,運用ELISA法測定Aβ1-40和Aβ1-42水平;通過HE染色觀察海馬CA3區(qū)神經(jīng)元的組織病理形態(tài);采用Morris水迷宮檢測空間學習記憶能力;采用熒光酶標記法檢測BACE1的活性;采用Western blot法定量檢測小鼠海馬組織中GRP78、p-e IF2α、淀粉樣前體蛋白β位點裂解酶1(BACE1)以及p-PERK的表達量;運用免疫組化的方法,定位、半定量檢測海馬CA3區(qū)葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)的表達狀況。在上述實驗的基礎(chǔ)上,將小鼠隨機分為CPS+COS和產(chǎn)前慢性應激-子代慢性應激組-VD灌胃組(CPS+COS+VD)兩組,這兩組的子代小鼠,采用Y迷宮檢測子代小鼠的辨別性工作記憶及參考記憶;采用Western blot法定量檢測小鼠海馬組織中GRP78、p-e IF2α以及p-PERK的表達量;運用免疫組化的方法,定位、半定量檢測海馬CA3區(qū)GRP78的表達狀況。結(jié)果:1.ELISA結(jié)果顯示COS組海馬組織Aβ1-40和Aβ1-42表達量較對照組明顯增加(P0.05),CPS+COS組海馬組織Aβ1-40和Aβ1-42表達量較COS組明顯增加(P0.05)。2.HE染色結(jié)果顯示COS組小鼠海馬CA3區(qū)損傷的神經(jīng)元排列疏松紊亂,細胞體略小,核濃染固縮,神經(jīng)元數(shù)目較對照組明顯增多(P0.05);CPS+COS組小鼠的海馬CA3區(qū)損傷的神經(jīng)元數(shù)目較COS組進一步增多(P0.05)。3.水迷宮結(jié)果顯示COS組小鼠的逃避潛伏期時間和游泳距離較對照組延長(P0.05)、平臺象限游泳時間和穿越平臺次數(shù)較對照組減少(P0.05);CPS+COS組小鼠的逃避潛伏期和游泳距離較COS組明顯延長(P0.05)、平臺象限游泳時間和穿越平臺次數(shù)較COS組明顯減少(P0.05)。4.熒光酶標法檢測結(jié)果顯示,各組子代鼠海馬組織BACE1活性比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.Western blot結(jié)果顯示COS組小鼠海馬組織GRP78、p-e IF2α、p-PERK和BACE1蛋白的表達量較對照組明顯升高(P0.05);CPS+COS組小鼠海馬組織GRP78、p-e IF2α、p-PERK和BACE1的表達量較COS組明顯升高(P0.05)。6.免疫組化結(jié)果顯示,COS組小鼠海馬CA3區(qū)組織GRP78蛋白的表達量較對照組升高(P0.05);CPS+COS組小鼠海馬CA3區(qū)組織較COS組有更多的GRP78的表達(P0.05)。7.Y迷宮結(jié)果顯示,CPS+COS+VD組子代鼠進入各臂的次數(shù)和進入新臂的時間較CPS+COS組多。8.HE染色結(jié)果顯示CPS+COS+VD組小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元排列緊密,神經(jīng)元數(shù)目較CPS+COS組增多,核濃染固縮較CPS+COS組有所減少。9.Western blot和免疫組化結(jié)果顯示,CPS+COS+VD組的GRP78、p-e IF2α、p-PERK蛋白的表達量較對照組明顯減少(P0.05)。結(jié)論:1.妊娠期慢性應激可以通過子代長期升高的GCs,引起海馬神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激,激活PERK,引起e IF2α磷酸化,促進BACE1 m RNA翻譯增加,導致BACE1蛋白水平或活性升高,從而促進Aβ的生成,引起或促進淀粉樣斑塊的形成。2.適度的增補維生素D對妊娠期慢性應激促進子代海馬神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激有抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：產(chǎn)前應激 慢性應激 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激 Y迷宮 學習記憶
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R714.2
【目錄】：

• 英文縮略詞表7-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 1 前言12-14
• 2 材料與方法14-31
• 2.1 材料14-19
• 2.1.1 實驗動物14
• 2.1.2 主要儀器（型號）14-15
• 2.1.3 主要試劑15-17
• 2.1.4 主要溶液的配置17-19
• 2.2 實驗動物分組和實驗方法19-31
• 2.2.1 母代小鼠的飼養(yǎng)、繁殖19-20
• 2.2.2 母代小鼠的產(chǎn)前慢性應激方法20
• 2.2.3 雄性子代小鼠的基因鑒定20-22
• 2.2.4 子代小鼠的飼養(yǎng)及其成人后的慢性應激方法22-23
• 2.2.5 學習記憶能力測試23
• 2.2.6 觀察病理改變23-25
• 2.2.7 Western blot法測定海馬組織p-e IF2α、p-PERK、GRP78和BACE1的蛋白表達量25-28
• 2.2.8 ELISA法測定海馬組織中Aβ1-42和Aβ1-40的含量28-30
• 2.2.9 BACE1活性的測定30
• 2.2.10 統(tǒng)計分析30-31
• 3 結(jié)果31-41
• 3.1 產(chǎn)前應激對慢性應激所致子鼠海馬Aβ 形成和學習記憶的影響31-34
• 3.1.1 產(chǎn)前應激促進慢性應激所致6月齡雄性APPswe/PS1d E9子鼠海馬組織Aβ生成的31
• 3.1.2 產(chǎn)前慢性應激進一步加劇子代慢性應激所致的子鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元損傷31-32
• 3.1.3 產(chǎn)前慢性應激進一步加劇子代慢性應激所致的子鼠學習記憶能力損傷32-34
• 3.2 產(chǎn)前應激促進慢性應激所致的子鼠海馬Aβ 形成機理34-37
• 3.2.1 產(chǎn)前應激對子鼠海馬組織BACE1的表達量和活性的影響34-35
• 3.2.2 產(chǎn)前應激進一步加劇子代慢性應激所致的子鼠海馬GRP78、p-e IF2α、p-PERK表達35-36
• 3.2.3 產(chǎn)前慢性應激進一步加劇子代慢性應激所致的子鼠海馬CA3區(qū)GRP78和p-e IF2α的表達36-37
• 3.3 維生素D對妊娠期慢性應激促進子代海馬Aβ形成有抑制作用37-41
• 3.3.1 Y迷宮37-39
• 3.3.2 生素D對妊娠期慢性應激所致的子鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元損傷的作用39
• 3.3.3 Western blot39-40
• 3.3.4 維生素D對妊娠期慢性應激促進海馬CA3區(qū)GRP78的表達作用40-41
• 4 討論41-45
• 5 結(jié)論45
• 參考文獻45-51
• 附錄51-53
• 致謝53-54
• 綜述54-66
• 參考文獻62-66

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