本文關鍵詞：EFEMP1對卵巢癌增殖、侵襲與轉移作用探究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究依據(jù)卵巢癌為婦科惡性腫瘤,死亡率高居不下,其發(fā)病隱匿,易于腹腔廣泛播散和遠處轉移,是其發(fā)現(xiàn)晚、死亡率高的關鍵。EFEMP1分子是新發(fā)現(xiàn)的一種細胞基質fibulin家族蛋白,研究表明EFEMP1參與調節(jié)細胞的形態(tài)、生長、粘附和運動過程,并與多種腫瘤的發(fā)展、侵襲與轉移密切相關。我們利用有限稀釋法篩選出高、低轉移細胞株S1、S21,它們具有高度的同源性,能保證異質性最小的要求,且具有不同的侵襲轉移特性。我們利用DNA微陣列分析對兩者的基因表達差異進行分析,結果發(fā)現(xiàn)基因差異1.5倍以上的多達1596個基因,其中EFEMP1在高轉移克隆細胞株S1中呈現(xiàn)高表達,而在低轉移克隆細胞株S21中呈現(xiàn)低表達,兩者差異11.739倍,差異顯著(P=0.0030.001)。細胞爬片、Real time RT-PCR和Western blot均證實在高轉移克隆細胞株S1中EFEMP1的表達明顯高于低轉移克隆細胞株S21中的表達。同時在前期研究中,我們發(fā)現(xiàn)EFEMP1在卵巢癌組織中明顯上調,同時其過表達與卵巢癌惡性分期、分化程度、淋巴轉移及不良預后密切相關。據(jù)以上數(shù)據(jù),我們推測EFEMP1可能與卵巢癌的侵襲轉移存在密切關系。因此,本課題展開EFEMP1對卵巢癌侵襲轉移作用影響的探究。研究目的1.明確EFEMP1在影響卵巢癌細胞侵襲轉移過程中作用影響；2.明確EFEMP1在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為卵巢癌的預后判斷和更有效抑制侵襲性的卵巢癌提供理論基礎。研究方法(1)有限稀釋法從同一卵巢癌細胞系SKOV3中分離得到高轉移克隆細胞株S1、低轉移克隆細胞株S21,S1和S21具有高度同源性,能夠滿足異質性最小的要求。(2)利用DNA微陣列分析檢測兩細胞株基因表達差異,同時用細胞爬片、real time RT-PCR和western blot進行驗證。(3)構建慢病毒載體外源性強制EFEMP1在低轉移克隆細胞株S21中高表達,同時利用RNA干擾沉默EFEMP1在高轉移克隆細胞株S1中的表達,利用細胞體外功能分析技術比較外源性強制高表達EFEMP1前后與RNA干擾沉默EFEMP1前后細胞增殖、凋亡與侵襲移動能力變化。(4)進一步構建可視裸鼠移植瘤模型,體內模擬卵巢癌生長、侵襲和轉移的過程,深入研究EFEMP1在卵巢癌細胞增殖、凋亡、侵襲與移動作用影響。(5)體內體外全面深入研究EFEMP1分子在卵巢癌侵襲轉移的關系。研究結果1.EFEMP1分子在不同轉移能力細胞株中表達差異DNA微陣列分析結果顯示,基因差異1.5倍以上的多達1596個基因,主要涉及TRAIL、SIP、 TNF、 PI3K、 EGFR1、TGFBR等多條信號轉導通路,其中EFEMP1在高轉移克隆細胞株S1中呈現(xiàn)高表達,而在低轉移克隆細胞株S21中呈現(xiàn)低表達,兩者差異11.739倍,差異顯著(P=0.0030.001),細胞爬片、real time RT-PCR和western blot均證實EFEMP1在高、低轉移細胞株中表達差異。2.外源性強制EFEMP1與RNA干擾沉默EFEMP1前后細胞功能變化(1)慢病毒感染細胞后,轉染效率80%以上,real time RT-PCR、western blot及免疫組化驗證了轉染效果。(2)細胞生長曲線與細胞軟瓊脂克隆技術結果顯示RNA干擾沉默EFEMP1顯著抑制了高轉移細胞株細胞增殖,同時外源性強制EFEMP1高表達的低轉移細胞株增殖能力顯著提高。(3)細胞周期檢測結果, EFEMP1降表達導致G1/G0期細胞增多,S期(分裂期)細胞減少,抑制細胞增殖；EFEMP1過表達細胞株G1/G0期細胞減少,S期(分裂期)細胞增多,促進細胞增殖。(4)細胞侵襲與移動實驗表明,外源性強制EFEMP1過表達促進細胞侵襲與移動,而RNA干擾沉默EFEMP1抑制細胞侵襲與移動。3.建立裸鼠移植瘤模型,體內觀察EFEMP1對卵巢癌細胞侵襲轉移作用的影響(1)基因干擾組,所形成瘤體體積較小,腫瘤生長較緩慢,成瘤率亦較低；基因過表達組腫瘤生長快,體積大,成瘤率為100%。(2)基因過表達組所形成的瘤塊組織呈多結節(jié)狀,包膜間斷不完整,與周圍組織連接較為緊密,不易分離。基因干擾組所形成的瘤塊組織相對較小,形狀光滑橢圓,包膜也較為完整且易于分離。(3)移植瘤組織切片結果顯示,相對于高轉移克隆細胞株S1,EFEMP1干擾組小鼠腫瘤組織中腫瘤細胞較少,并且無肺轉移；而與低轉移克隆細胞株相比,EFEMP1過表達組中腫瘤細胞增多,肺轉移增加,低轉移組無肺轉移；S1、S21-exEFEMP1、的肺轉移率分別為100%、80%。研究結論(1)EFEMP1分子與卵巢癌發(fā)生發(fā)展密切相關；(2)EFEMP1分子促進卵巢癌細胞生長、侵襲與移動；(3)EFEMP1分子促使分裂期細胞增多,EFEMP1降表達造成細胞周期阻滯,從而促進細胞增殖,減少凋亡。
【關鍵詞】：EFEMP1 卵巢癌 增殖 侵襲 移動
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 縮略詞表13-15
• 前言15-17
• 材料與方法17-32
• 1. 實驗材料17-21
• 2. 實驗方法步驟21-32
• 結果與分析32-43
• 1. 細胞培養(yǎng)32-33
• 2. 慢病毒轉染情況33-35
• 3. EFEMP1影響卵巢癌細胞增殖能力35-37
• 4. EFEMP1對細胞周期影響情況37-38
• 5. EFEMP1對細胞侵襲轉移能力影響38-40
• 6. EFEMP1對裸鼠體內移植瘤生長情況40-43
• 討論43-46
• 結論46
• 創(chuàng)新性46-47
• 參考文獻47-53
• 致謝53-55
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文55-56
• 學位論文評閱及答辯情況表56

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 金曉琴;形態(tài)罕見的卵巢腫瘤1例[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志;2000年07期

2 覃英姿;卵巢腫瘤并發(fā)闌尾炎1例報告[J];中國校醫(yī);2000年02期

3 韓衛(wèi)紅,李青,李霞;經(jīng)陰道超聲在卵巢腫瘤診斷中的應用[J];青島醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年03期

4 ;卵巢腫瘤[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年10期

5 秦平,陳焰;二維超聲及彩色多普勒聯(lián)合應用對卵巢腫瘤的診斷[J];中國超聲醫(yī)學雜志;2001年07期

6 王月香;超聲多普勒技術在卵巢腫瘤診斷上的新進展[J];河北醫(yī)科大學學報;2001年06期

7 崔淑莉,徐愛哲,趙世強;經(jīng)陰式彩色多普勒對卵巢腫瘤性質判定的臨床意義[J];哈爾濱醫(yī)藥;2001年01期

8 史海英,姜勝健;卵巢腫瘤誤診13例分析[J];腫瘤防治雜志;2001年03期

9 趙信喜;微波快速石蠟切片診斷卵巢腫瘤206例分析[J];中國誤診學雜志;2001年05期

10 ;卵巢腫瘤[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2001年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李利;王超英;林忠乙;;老年卵巢腫瘤82例分析[A];中國抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第六次全國學術會議論文匯編[C];2001年

2 楊幼易;;老年婦女卵巢腫瘤手術治療140例臨床分析[A];中國抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第六次全國學術會議論文匯編[C];2001年

3 楊帆;楊太珠;羅紅;朱琦;郭文琪;田雨;陳嬌;;生育前期女性卵巢腫瘤39例超聲診斷[A];2005年全國醫(yī)學影像技術學術會議西部論壇論文匯編[C];2005年

4 張海;李光展;吳瑛;盧俊;王慧芳;鄧偉蓮;;經(jīng)陰道彩色多普勒血流圖檢測卵巢腫瘤血管的臨床價值[A];中華醫(yī)學會第六次全國超聲醫(yī)學學術年會論文匯編[C];2001年

5 洪樹勛;許紅;曹良杰;;801例卵巢腫瘤臨床分析[A];紀念卓越的人民醫(yī)學家林巧稚大夫誕辰100周年——全國婦產(chǎn)科高級學術論壇論文集[C];2001年

6 梁元姣;葉小勤;;老年婦女雙側卵巢巨大腫瘤1例報告[A];中國抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第六次全國學術會議論文匯編[C];2001年

7 劉力;李冰琳;張啟培;;836例卵巢腫瘤臨床病理分析[A];第八次全國婦產(chǎn)科學學術會議論文匯編[C];2004年

8 陳曉玲;紀莉;吳曉燕;魚紅菊;王琳;;彩色多普勒超聲在卵巢腫瘤診斷中的應用[A];第一屆全國婦產(chǎn)科超聲學術會議論文匯編[C];2006年

9 許幼峰;郭e

本文編號：439591