本文關(guān)鍵詞：RNA干擾沉默HPV16 E6基因?qū)θ藢m頸癌SiHa細胞自噬的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究針對HPV16 E6基因的小干擾RNA是否能特異性抑制人宮頸癌SiHa細胞中HPV16 E6基因的表達,進一步從自噬體形態(tài)和自噬標志物方面觀察沉默HPV16 E6基因?qū)θ藢m頸癌SiHa細胞中自噬的影響,以探討HPV病毒感染對細胞自噬的影響,為宮頸癌防治的發(fā)展提供新的思路。方法:1.構(gòu)建并鑒定真核表達載體sh138-HPV16 E6 siRNA。用脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)SiHa細胞中,熒光顯微鏡動態(tài)觀察轉(zhuǎn)染情況;用EBSS處理SiHa細胞6h誘導(dǎo)自噬作為饑餓組(陽性對照組);Real-time PCR法檢測轉(zhuǎn)染前后各組細胞中HPV16 E6 mRNA表達情況。2.透射電鏡觀察沉默HPV16 E6基因前后各組細胞中自噬體的形成。同時用免疫細胞化學法檢測轉(zhuǎn)染前后各組細胞中Beclin 1蛋白的表達情況。結(jié)果:1.重組質(zhì)粒sh138-HPV16 E6 siRNA的PCR產(chǎn)物凝膠電泳結(jié)果和DNA測序圖譜分析均證實重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。將重組質(zhì)粒用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)入宮頸癌SiHa細胞,約12h后在藍光激發(fā)的熒光顯微鏡下能夠察看到些許綠色熒光表達,說明轉(zhuǎn)染成功。約48h后熒光表達程度最強,選擇10個200倍視野,計算發(fā)出綠色熒光的細胞數(shù)和總細胞數(shù)的比值,轉(zhuǎn)染效率約為(250±)%。轉(zhuǎn)染48h后實時熒光定量PCR結(jié)果表明SiHa-sh138-HPV16 E6 siRNA組細胞中HPV16 E6mRNA表達量明顯下降,與SiHa組、饑餓組(陽性對照組)、SiHa-sh138-NC組三者相比,結(jié)果具有顯著性差異(P0.001)。2.使用透射電鏡觀察細胞中自噬體的形態(tài)和數(shù)目,結(jié)果表明SiHa-sh138-HPV16 E6 siRNA組中自噬體的數(shù)量明顯少于SiHa組及SiHa-sh138-NC組(P0.05),饑餓組(陽性對照組)自噬體數(shù)量明顯多于SiHa組及SiHa-sh138-NC組(P0.05)。3.使用免疫細胞化學的方法檢測人宮頸癌SiHa細胞中Beclin 1蛋白的表達情況,結(jié)果表明SiHa-sh138-HPV16 E6組中Beclin 1蛋白表達水平明顯少于SiHa組及SiHa-sh138-NC組(P0.05),饑餓組(陽性對照組)Beclin 1蛋白表達水平明顯高于SiHa組及SiHa-sh138-NC組(P0.05)。結(jié)論:1.沉默HPV16 E6基因表達的sh138-HPV16 E6 siRNA重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。所構(gòu)建的重組質(zhì)粒能有效地沉默宮頸癌SiHa細胞中HPV16 E6基因的表達。2.HPV16 E6基因的沉默可明顯減少SiHa細胞中自噬體的形成,同時明顯下調(diào)細胞中Beclin 1蛋白的表達水平。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 小干擾RNA 自噬 HPV16 E6基因
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 常用縮寫詞中英文對照表10-11
• 前言11-14
• 第一部分 重組質(zhì)粒sh138-HPV16 E6 siRNA的構(gòu)建及鑒定14-33
• 1.材料與方法14-27
• 1.1 實驗材料14-16
• 1.2 實驗方法16-26
• 1.3 統(tǒng)計學方法26-27
• 2.結(jié)果27-32
• 3.討論32-33
• 第二部分 沉默HPV16 E6基因?qū)iHa細胞中自噬的影響33-46
• 1.材料與方法33-38
• 1.1 實驗材料33-34
• 1.2 實驗方法34-37
• 1.3 統(tǒng)計學方法37-38
• 2.結(jié)果38-43
• 3.討論43-45
• 4.結(jié)論45-46
• 參考文獻46-49
• 綜述49-58
• 參考文獻55-58
• 致謝58-59
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果59-60
• 個人簡歷60

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2 張清琴;寇小格;崔艷慧;楊軍;;茶多酚對人宮頸癌Hela細胞系生長的影響[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2010年11期

3 李華;韋立蓓;王育斌;;γδT細胞對人宮頸癌HeLa細胞增殖和凋亡的影響[J];湖北科技學院學報(醫(yī)學版);2013年01期

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8 李諾飛;杜開春;;人宮頸癌基因的克隆及其真核表達載體的構(gòu)建[J];中國實驗診斷學;2007年12期

9 劉蕓;劉愛華;吳向玲;江力瑋;姚琦;鄧鵬;姜勇;;人宮頸癌Hela細胞穿透肽的噬菌體展示技術(shù)篩選[J];微循環(huán)學雜志;2009年04期

10 黃光琦;Donald Blair;李茵;黃一峰;毛婷;寧其志;王艷萍;袁淑蘭;;人宮頸癌癌基因的研究——轉(zhuǎn)化活性及癌基因?qū)傩澡b定[J];遺傳與疾病;1989年04期

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1 黎欣;徐碧泉;曹蘭琴;;青年人宮頸癌的特點[A];2000全國腫瘤學術(shù)大會論文集[C];2000年

2 劉雨聲;牛巨偉;張衛(wèi)華;孔為民;鄧小虹;;聯(lián)合放療熱療對人宮頸癌HeLa細胞作用的實驗室研究[A];第三次全國婦產(chǎn)科基層醫(yī)師學術(shù)會議資料匯編[C];2005年

3 熊艷;胡玉玲;魏晚霞;;老年人宮頸癌放療的護理體會[A];全國第13屆老年護理學術(shù)交流暨專題講座會議、全國中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合護理學術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2010年

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5 朱克修;李旭;陳葳;程小麗;;人宮頸癌細胞凋亡的研究[A];中國抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第六次全國學術(shù)會議論文匯編[C];2001年

6 蘇寶山;楊軍;李牧;田瑋;李宗芳;;苦參堿對人宮頸癌HeLa細胞凋亡機制的研究[A];中華醫(yī)學會病理學分會2006年學術(shù)年會論文匯編[C];2006年

7 關(guān)燕清;屈曉丹;;人宮頸癌細胞凋亡的線粒體膜電位及細胞周期的研究[A];提高全民科學素質(zhì)、建設(shè)創(chuàng)新型國家——2006中國科協(xié)年會論文集[C];2006年

8 笪宇蓉;姚智;鄧為民;洪敬欣;何津巖;楊潔;;YD383,YD438對人宮頸癌細胞體外增殖及細胞周期的影響[A];中國免疫學會第五屆全國代表大會暨學術(shù)會議論文摘要[C];2006年

9 張蓓;劉嘉茵;韓素萍;候振;周靜;;Genistein對人宮頸癌Hela細胞的增殖及凋亡的影響及其作為放療增敏劑的初步探討[A];江蘇省抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第四次腫瘤學術(shù)研討會暨無錫市婦產(chǎn)科年會論文匯編[C];2005年

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1 李楠;CO_2對人宮頸癌Hela細胞VEGF-C和MMP9表達的影響[D];河北聯(lián)合大學;2014年

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5 任艷珍;莪術(shù)水煎液對人宮頸癌裸鼠移植瘤模型抗腫瘤作用的研究[D];山西中醫(yī)學院;2015年

6 曾婧;異紫堇堿對人宮頸癌SiHa細胞裸鼠皮下移植瘤影響的研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學;2016年

7 李婧;RNA干擾沉默HPV16 E6基因?qū)θ藢m頸癌SiHa細胞自噬的影響[D];山西醫(yī)科大學;2016年

8 周晨;5-烯丙基-7-二氟甲氧基白楊素對人宮頸癌HeLa細胞凋亡的影響[D];南華大學;2010年

9 謝晶;紫花牡荊素抑制體外培養(yǎng)人宮頸癌HeLa細胞生長增殖的研究[D];南華大學;2010年

10 曾源;8-硝基白楊素誘導(dǎo)體外培養(yǎng)人宮頸癌Hela細胞生長抑制和凋亡作用研究[D];南華大學;2007年

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