目的:本課題選用柳氮磺胺吡啶(SAS)作為氧化應(yīng)激誘導(dǎo)劑,復(fù)制氧化應(yīng)激模型,以人卵巢上皮性癌順鉑敏感細(xì)胞(SKOV3、A2780)與耐藥細(xì)胞(SKOV3/DDP、OVCAR-3)為研究對象,研究卵巢上皮性癌順鉑耐藥細(xì)胞(SKOV3/DDP、OVCAR-3)中程序性壞死途徑的作用,以及多功能蛋白p62/SQSTM1(簡稱p62蛋白)在此途徑中的可能調(diào)控機(jī)制,揭示人卵巢上皮性癌順鉑耐藥細(xì)胞中程序性壞死途徑的作用及其調(diào)控機(jī)制,為靶向程序性壞死途徑、克服腫瘤耐藥提供新思路。方法:(1)利用MTT法檢測SAS對人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP、A2780、OVCAR-3細(xì)胞生存率的影響。(2)利用MTT法檢測SAS和程序性壞死抑制劑Necrostatin-1(Nec-1)聯(lián)合作用對人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP、A2780、OVCAR-3細(xì)胞生存率的影響。(3)RTCA法檢測Nec-1與SAS聯(lián)合作用對人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP細(xì)胞生存率的影響。(4)利用Western blotting方法檢測SAS對人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP、A2...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第1章 綜述
    1.1 卵巢癌的類型以及耐藥機(jī)制研究
    1.2 柳氮磺胺吡啶(Sulfalsalazine,SAS)在科研工作方面的應(yīng)用
    1.3 腫瘤細(xì)胞的死亡機(jī)制
        1.3.1 凋亡(apoptosis)
        1.3.2 自噬(autophagy)
        1.3.3 細(xì)胞程序性壞死(necroptosis)
        1.3.4 多功能蛋白p62 與程序性壞死
第2章 實驗研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗細(xì)胞株
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 實驗試劑的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 人卵巢上皮性癌順鉑敏感細(xì)胞及順鉑耐藥細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 MTT比色法
        2.2.3 RTCA實時無標(biāo)記細(xì)胞功能分析法
        2.2.4 Western blotting檢測相關(guān)蛋白表達(dá)
        2.2.5 免疫共沉淀
        2.2.6 質(zhì)粒的提取
        2.2.7 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染
        2.2.8 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.3 實驗結(jié)果
        第一部分 程序性壞死在人卵巢上皮性癌耐藥細(xì)胞SKOV3/DDP及OVCAR-3的作用研究
            2.3.1 MTT法檢測不同濃度SAS對人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP細(xì)胞生存率的影響
            2.3.2 MTT法檢測不同濃度SAS對人卵巢上皮性癌A2780、OVCAR-3 細(xì)胞生存率的影響
            2.3.3 MTT法檢測程序性壞死抑制劑Nec-1與SAS聯(lián)合作用對人卵巢上皮性癌SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞生存率的影響
            2.3.4 MTT法檢測程序性壞死抑制劑Nec-1與SAS聯(lián)合作用對人卵巢上皮性癌A2780及OVCAR-3 細(xì)胞生存率的影響
            2.3.5 RTCA法檢測程序性壞死抑制劑Nec-1與SAS聯(lián)合作用對人卵巢上皮性癌SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞生存率的影響
            2.3.6 Westernblotting法檢測SAS對人卵巢上皮性癌SKOV3 及SKOV3/DDP細(xì)胞中RIP1、RIP3、MLKL及磷酸化蛋白表達(dá)情況
            2.3.7 Westernblotting法檢測SAS對人卵巢上皮性癌A2780 及OVCAR-3 細(xì)胞中RIP1、RIP3、MLKL及磷酸化蛋白表達(dá)情況
            2.3.8 免疫共沉淀法(Immunoprecipitation,IP)檢測程序性壞死復(fù)合體的表達(dá)
            2.3.9 SAS對人卵巢上皮性癌SKOV3 以及SKOV3/DDP細(xì)胞中p62蛋白表達(dá)的影響
            2.3.10 SAS對人卵巢上皮性癌A2780及OVCAR-3 細(xì)胞中p62 蛋白表達(dá)的影響
            2.3.11 人卵巢上皮性癌SKOV3、A2780 細(xì)胞中過表達(dá)zz結(jié)構(gòu)域突變的p62 蛋白(zz-p62)對程序性壞死相關(guān)蛋白的影響
第3章 討論
    3.1 程序性壞死等新型細(xì)胞死亡途徑,為腫瘤防治帶來新的思路
    3.2 SAS誘導(dǎo)人卵巢上皮性癌順鉑耐藥細(xì)胞(SKOV3/DDP,OVCAR-3)發(fā)生程序性壞死
    3.3 多功能蛋白p62 參與SAS誘導(dǎo)人卵巢上皮性癌SKOV3/DDP、OVCAR-3 細(xì)胞程序性壞死調(diào)控
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3925111