發(fā)布時間：2017-05-23 19:17

  本文關(guān)鍵詞：鉑耐藥和鉑敏感上皮性卵巢癌中HMGB1、BRCA1和P62蛋白的表達及其臨床意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：在體外細胞水平從細胞自噬角度探討卵巢癌耐藥的發(fā)生機制,檢測自噬調(diào)節(jié)基因HMGB1和P62在卵巢癌中的表達。免疫組化檢測耐藥相關(guān)基因BRCA1和自噬調(diào)節(jié)基因HMGB1和P62在上皮性卵巢癌中的表達情況,分析其表達與組織學分級、FIGO分期、化療耐藥的關(guān)系以及兩兩之間表達的相關(guān)性,了解BRCA1、HMGB1和P62在卵巢癌中的表達、生物學行為及其預后的關(guān)系；進一步闡明卵巢癌中細胞自噬相關(guān)基因]HMGB1和P62與耐藥基因BRCA1的關(guān)系,探討卵巢癌耐藥的機理,為指導臨床選擇合適的治療方案、判斷預后以及尋找有效的逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥方法提供理論依據(jù)。方法：(1)采用CCK-8法檢測不同濃度順鉑(cisplatin, DDP)對SKOV3及SKOV3/DDP細胞的抑制作用,以及用半定量PCR (Semi-quantitative PCR, RT-PCR)、Western Blotting等技術(shù),檢測HMGB1和P62的表達。(2)采用免疫組織化學方法檢測BRCA1、HMGB1和P62在良性上皮性卵巢腫瘤組織、交界性腫瘤及上皮性卵巢癌組織中的表達。其中良性上皮性卵巢腫瘤組織13例；卵巢交界性腫瘤組織8例；上皮性卵巢癌組織共39例,其中漿液性腺癌23例、粘液性腺癌4例、子宮內(nèi)膜樣腺癌5例、透明細胞癌5例、混合性癌2例。組織學分級：高分化8例、中低分化31例。(2012年)FIGO分期為：Ⅰ-Ⅱ期19例,Ⅲ-Ⅳ期20例；鉑敏感26例,鉑耐藥13例；(3)用SPSS19.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行處理,采用χ2檢驗和Spearman等級相關(guān)分析對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。P0.05具有統(tǒng)計學意義。結(jié)果：1.不同濃度DDP處理SKOV3及SKOV3/DDP細胞后,均有抑制細胞生長及促凋亡作用,且呈時間和劑量依賴性。研究發(fā)現(xiàn)HMGB1 mRNA和蛋白在SKOV3/DDP細胞中的表達低于SKOV3細胞。P62 mRNA和蛋白在SKOV3/DDP細胞中的表達也低于SKOV3細胞。2.免疫組化結(jié)果顯示BRCA1蛋白位于細胞核中,呈棕褐色顆粒；而P62蛋白表達定位于胞漿中,呈棕褐色顆粒：HMGB1蛋白位于細胞胞核及部分胞漿,呈棕褐色顆粒。3. BRCA1蛋白的表達：在13例卵巢良性腫瘤組織中BRCA1蛋白表達陽性的有7例(53.8%)；8例卵巢交界性腫瘤中BRCA1蛋白表達陽性的4例(50%)；39例上皮性卵巢癌組織中表達陽性的有8例(23.1%)。上皮性卵巢癌組織中BRCA1蛋白的表達水平明顯低于良性腫瘤及卵巢交界性腫瘤組織,有顯著性差異(χ2=6.440,P=0.0400.05)。BRCA1表達與臨床病理學特征無顯著相關(guān)性(P0.05)。在上皮性卵巢癌中BRCA1蛋白在鉑敏感卵巢癌的陽性表達低于耐藥卵巢癌,具有極顯著的差異(χ2=7.863,P=0.0050.01)。4. HMGB1蛋白的表達：HMGB1在卵巢惡性腫瘤組織、卵巢癌交界性腫瘤、卵巢良性腫瘤組織中的陽性表達率分別為97.4%(38/39)、100%(8/8)、92.3%(12/13)。在不同卵巢組織中,HMGB1表達陽性率無顯著差異(P0.05)。HMGB1表達與腫瘤組織類型有關(guān)(P0.05),與其它臨床病理學特征無顯著相關(guān)性。HMGB1蛋白在鉑敏感和耐藥性上皮性卵巢癌中無統(tǒng)計學意義。5.P62蛋白的表達：P62在卵巢惡性腫瘤組織、卵巢癌交界性腫瘤、卵巢良性腫瘤組織中的陽性表達率分別為53.8%(21/39)、50%(4/8)、0%(0/13)。上皮性卵巢癌組織中P62蛋白的表達水平明顯高于良性腫瘤及卵巢交界性腫瘤組織,有顯著性差異(χ2=11.117,P=0.004)。P62表達與腫瘤分期有關(guān),而與其它臨床病理學特征沒有顯著相關(guān)性。上皮性卵巢癌中P62蛋白在鉑敏感中的陽性表達率高于耐藥卵巢癌,有顯著差異性(χ2=6.174,P=0.013)。6.在卵巢癌組織中,BRCA1和P62蛋白表達呈負相關(guān)(r=-0.399,P=0.012)。結(jié)論：1. HMGB1 mRNA和蛋白在SKOV3/DDP中的表達率下調(diào),HMGB1在兩種細胞中呈無或弱相關(guān)性,HMGB1可能與卵巢癌耐藥無關(guān)。P62 mRNA和蛋白在SKOV3/DDP中的表達率也下調(diào)。提示P62表達水平的變化在鉑耐藥卵巢癌中扮演著一定的角色,并可能與上皮性卵巢癌鉑耐藥的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。2.上皮性卵巢癌中BRCA1蛋白在鉑敏感卵巢癌的陽性表達低于耐藥卵巢癌,說明BRCA1蛋白可能介導卵巢癌耐藥的發(fā)生、發(fā)展過程。3. HMGB1蛋白表達在不同卵巢組織和鉑敏感卵巢癌及耐藥卵巢癌中無明顯差異,可能與卵巢癌耐藥過程無關(guān)。HMGB1表達與腫瘤組織類型有關(guān),說明HMGB1可能參與了卵巢癌的發(fā)生有關(guān)。4.P62蛋白的表達與卵巢癌臨床分期有關(guān),提示P62可能與卵巢癌的發(fā)展有關(guān)；上皮性卵巢癌中P62蛋白在鉑敏感卵巢癌的陽性表達高于耐藥卵巢癌,說明P62蛋白可能參與卵巢癌耐藥的發(fā)生發(fā)展過程。5. BRCAl和P62在卵巢癌中的表達呈負相關(guān),P62陽性表達越高,BRCA1陽性表達則越低。兩者可能共同參與了卵巢癌的疾病惡性進展過程及不良預后,對卵巢癌的預后及術(shù)后的治療可能有一定的指導作用。并且BRCA1和P62可作為預測上皮性卵巢癌鉑耐藥的標志性蛋白。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 BRCA1 HMGB1 P62 自噬 免疫組織化學
【學位授予單位】：昆明理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-16
• 英文縮略詞16-18
• 第一章 緒論18-30
• 1.1 卵巢癌及其耐藥的研究進展18-21
• 1.1.1 卵巢癌的危害18
• 1.1.2 卵巢癌的常用治療方法及作用機制18-19
• 1.1.3 卵巢癌化療耐藥19-21
• 1.2 卵巢癌與自噬21-22
• 1.3 自噬概述22-24
• 1.3.1 自噬的概念及功能22-23
• 1.3.2 自噬與腫瘤23-24
• 1.4 HMGB1概述24-26
• 1.4.1 HMGB1的基本結(jié)構(gòu)及功能24-25
• 1.4.2 HMGB1與腫瘤的關(guān)系25-26
• 1.5 P62概述26-27
• 1.5.1 P62的基本結(jié)構(gòu)及功能26-27
• 1.5.2 P62與腫瘤的關(guān)系27
• 1.6 BRCA1概述27-28
• 1.6.1 BRCA1的基本結(jié)構(gòu)及功能27-28
• 1.6.2 BRCA1與腫瘤的關(guān)系28
• 1.7 選題意義及目的28-30
• 第二章 自噬與人卵巢癌順鉑耐藥的關(guān)系和作用機制研究30-44
• 2.1 前言30
• 2.2 材料30-33
• 2.2.1 細胞株30
• 2.2.2 主要試劑及配制30-32
• 2.2.3 主要實驗儀器32-33
• 2.3 方法33-39
• 2.3.1 SKOV3/DDP耐藥細胞系的建立33
• 2.3.2 SKOV3和SKOV3/DDP細胞株培養(yǎng)33
• 2.3.3 CCK-8法檢測耐藥指數(shù)33-34
• 2.3.4 QRT-PCR檢測HMGB1、p62 mRNA的表達34-36
• 2.3.5 Western Blotting檢測HMGB1、p62蛋白在SKOV3和SKOV3/DDP細胞中的表達水平36-38
• 2.3.6 統(tǒng)計學處理38-39
• 2.4 結(jié)果39-41
• 2.4.1 細胞抑制情況及SKOV3/DDP細胞順鉑耐藥水平39
• 2.4.2 RT-PCR結(jié)果39-40
• 2.4.3 Western Blotting結(jié)果40-41
• 2.5 討論41-44
• 第三章 BRCA1、HMGB1、P62在上皮性卵巢癌中的表達及其臨床意義44-60
• 3.1 前言44-45
• 3.2 材料與方法45-46
• 3.2.1 臨床資料45
• 3.2.2 主要實驗試劑45
• 3.2.3 主要實驗儀器45-46
• 3.3 免疫組化46-48
• 3.3.1 石蠟切片逐級脫臘和水化的時間46
• 3.3.2 免疫組化步驟及注意事項46-47
• 3.3.3 免疫組織化學的用途47-48
• 3.4 結(jié)果判定48
• 3.5 統(tǒng)計學處理48
• 3.6 結(jié)果分析48-56
• 3.6.1 BRCA1蛋白的表達結(jié)果48-51
• 3.6.2 HMGB1蛋白的表達結(jié)果51-53
• 3.6.3 P62蛋白的表達結(jié)果53-56
• 3.6.4 BRCA1、P62蛋白在卵巢癌中表達的相關(guān)性56
• 3.7 討論56-60
• 3.7.1 BRCA1在BET、交界性腫瘤、EOC中的表達56-57
• 3.7.2 HMGB1在BET、交界性腫瘤、EOC中的表達57-58
• 3.7.3 P62在BET、交界性腫瘤、EOC中的表達58-60
• 第四章 結(jié)論與展望60-62
• 參考文獻62-71
• 致謝71-72
• 附錄72-74

【參考文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙婷秀;莪術(shù)瓜蔞湯含藥血清誘導人肺癌細胞凋亡的實驗研究[D];湖北中醫(yī)學院;2004年

  本文關(guān)鍵詞：鉑耐藥和鉑敏感上皮性卵巢癌中HMGB1、BRCA1和P62蛋白的表達及其臨床意義，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：388869