本文關(guān)鍵詞：PCL-PEI納米粒子介導(dǎo)的CXCL10基因治療對放療殺傷宮頸癌細胞作用影響的體外研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:宮頸癌(Cervical cancer)是一種起源于宮頸的惡性腫瘤。它是一種常見的惡性腫瘤,是世界上主要的惡性腫瘤之一。本實驗的研究目的在于初步探討PCL-PEI(Polycaprolactone-Polyethylenimine,聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺,PEA)介導(dǎo)的趨化因子CXCL10(Chemokine CXCL10)基因治療對放療殺傷宮頸癌細胞作用的影響。方法:利用PEI(1.8k Da)和PCL通過邁克爾加成反應(yīng)成功地合成了聚合物PCL-PEI,并用1H-核磁共振對聚合物的結(jié)構(gòu)進行了分析。使用激光粒度分析儀檢測PCL-PEI納米粒子的Zeta電位及粒徑。使用透射電鏡觀察PCL-PEI納米粒子以及PCL-PEI與CXCL10質(zhì)�？s合后的納米復(fù)合物的形貌。通過MTT實驗檢測PCL-PEI納米粒子的細胞毒性。在證實成功地合成了聚合物后,使用PCL-PEI納米粒子與綠色熒光蛋白質(zhì)粒(p EGFP)制備了PCL-PEI+p EGFP納米復(fù)合物,通過瓊脂糖凝膠電泳實驗得到納米粒子與質(zhì)�？s合的最優(yōu)質(zhì)量比。接下來,按照最優(yōu)質(zhì)量比制備PCL-PEI+p EGFP納米復(fù)合物,通過倒置熒光顯微鏡觀察該復(fù)合物轉(zhuǎn)染Hela細胞后綠色熒光蛋白質(zhì)表達情況。隨后使用PCL-PEI+p CXCL10納米復(fù)合物轉(zhuǎn)染Hela細胞,通過PCR實驗擴增CXCL10目標(biāo)基因片段,瓊脂電泳實驗證實轉(zhuǎn)染成功。最后,實驗將Hela細胞分成四組進行處理,分別為空白對照+放療組,PCL-PEI+放療組,PCL-PEI+p PUC4.1(空質(zhì)粒)+放療組,PCL-PEI+p CXCL10+放療組,待細胞轉(zhuǎn)染24小時后行6Gy放療,放療48h后利用流式細胞儀檢測細胞凋亡情況,放療4小時內(nèi)行克隆形成實驗測定各組的克隆形成能力。結(jié)果:成功地合成了可降解聚合物PCL-PEI,其能在PBS溶液中形成納米粒子,1H-核磁共振對聚合物的結(jié)構(gòu)進行了分析,利用透射電鏡對聚合物進行了形貌分析,證實其結(jié)構(gòu)與目標(biāo)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)一致。激光粒度分析儀測得PCL-PEI的Zeta電位及粒徑分別為:+15m V,213nm。瓊脂糖凝膠電泳實驗測得PCL-PEI納米粒子縮合質(zhì)粒DNA的最優(yōu)質(zhì)量比為1:1。MTT實驗表明,聚合物的毒性較小,在工作濃度時幾乎沒有表現(xiàn)出細胞毒性。倒置熒光顯微鏡觀察到經(jīng)PCL-PEI+p EGFP納米復(fù)合物轉(zhuǎn)染的Hela細胞成功地表達了綠色熒光蛋白。PCR-瓊脂凝膠電泳實驗證實了PCL-PEI+p CXCL10納米復(fù)合物成功地轉(zhuǎn)染了Hela細胞。最后,流式細胞學(xué)證實PCL-PEI+p CXCL10+放療組的凋亡率明顯提高,克隆形成實驗證實該組的克隆形成能力更弱。結(jié)論:1.成功地合成了聚合物PCL-PEI,其細胞毒性較低,細胞毒性與濃度呈正相關(guān),而在工作濃度時幾乎沒有表現(xiàn)出細胞毒性,是一種安全低毒的基因載體。2.PCL-PEI聚合物能在PBS中形成納米粒子,納米粒子表面帶正電荷,粒徑分布均勻。3.PCL-PEI納米粒子能縮合質(zhì)粒DNA,并能轉(zhuǎn)染細胞,在細胞中表達。4.初步證實成功表達了CXCL10的Hela細胞凋亡率更高,克隆形成能力更弱,表明PCL-PEI納米粒子介導(dǎo)CXCL10基因治療可提高放療對Hela細胞的殺傷作用。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 Hela細胞 CXC趨化因子配體10 CXCL10 IP10 聚乙烯亞胺-聚己內(nèi)酯 PCL-PEI 基因治療 放射治療
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-8
• 前言8-12
• 材料與方法12-23
• 結(jié)果23-32
• 討論32-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻38-49
• 英漢縮略詞對照表49-50
• 致謝50-51
• 趨化因子CXCL10 在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中的研究進展(綜述)51-63
• 參考文獻58-63

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本文編號：386133