目的:宮頸癌患者死亡的主要原因是腫瘤的復(fù)發(fā)、未控和轉(zhuǎn)移,且約有35%的患者會(huì)發(fā)生復(fù)發(fā)/未控。復(fù)發(fā)/未控的治療難點(diǎn)在于:受之前治療手段的影響(手術(shù)、放療或化療),后續(xù)治療方法常常受到限制,預(yù)后很差。血管新生是宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的重要步驟,目前抗血管新生藥物聯(lián)合化療已成為復(fù)發(fā)/未控性宮頸癌的首選治療方案。但現(xiàn)有的抗血管新生藥物仍存在很多局限,在降低副反應(yīng)、降低費(fèi)用、提高療效等方面仍有很大的提升空間。臨床上迫切需要尋找經(jīng)濟(jì)有效、低毒安全的新型抗血管新生藥物,從植物提取物中研發(fā)抗血管新生藥物是一個(gè)極富吸引力的方向。7-二氟亞甲基-5,4’-二甲烷氧基異黃酮(7-difluoromethoxy-5,4’-dimethoxygenistein,DFMG)是本課題組前期從植物中提取的新化學(xué)實(shí)體,已證實(shí)能通過(guò)調(diào)控Toll樣受體4(Tolllike receptor 4,TLR4)抑制動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中的血管新生。有研究表明宮頸癌細(xì)胞中TLR4呈高表達(dá)狀態(tài),且與VEGF-A之間存在明顯正相關(guān)性,研究猜想DFMG是否可通過(guò)調(diào)控TLR4/VEGF-A路徑抑制宮頸癌血管新生。本課題以宮頸癌Siha細(xì)胞和靜脈內(nèi)皮...

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一部分 DFMG對(duì)宮頸癌血管新生的影響
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 細(xì)胞系
        1.1.2 藥品和試劑
        1.1.3 儀器和設(shè)備
        1.1.4 試劑的配制
        1.1.5 抗體
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力
        1.2.3 Matrigel基質(zhì)膠小管形成實(shí)驗(yàn)
        1.2.4 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        1.2.5 雞胚絨毛尿囊膜(Chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)血管形成實(shí)驗(yàn)
        1.2.6 酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)
        1.2.7 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)
        1.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.3.1 不同濃度的DFMG對(duì)細(xì)胞活力的影響
        1.3.2 宮頸癌Siha細(xì)胞上清液對(duì)Matrigel基質(zhì)膠小管形成的影響
        1.3.3 宮頸癌Siha細(xì)胞上清液對(duì)HUVE-12 細(xì)胞遷移能力的影響
        1.3.4 宮頸癌Siha細(xì)胞上清液對(duì)CAM膜血管形成的影響
        1.3.5 DFMG對(duì)宮頸癌Siha細(xì)胞VEGF-A蛋白分泌的影響
        1.3.6 DFMG對(duì)宮頸癌Siha細(xì)胞VEGF-A蛋白表達(dá)的影響
    1.4 討論
    1.5 小結(jié)
第二部分 TLR4/VEGF-A路徑對(duì)宮頸癌血管新生的影響
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 藥品和試劑
        2.1.3 儀器設(shè)備
        2.1.4 試劑的配置
        2.1.5 慢病毒載體與小干擾RNA靶序列
        2.1.6 引物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 TLR4 基因過(guò)表達(dá)慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染宮頸癌Siha細(xì)胞
        2.2.3 TLR4 基因小干擾RNA(Si RNA)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染宮頸癌Siha細(xì)胞
        2.2.4 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)
        2.2.5 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)
        2.2.6 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.7 Matrigel基質(zhì)膠小管形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 雞胚絨毛尿囊膜(Chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)血管形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 TLR4 基因過(guò)表達(dá)慢病毒和小干擾RNA(Si RNA)分別轉(zhuǎn)染宮頸癌Siha細(xì)胞的驗(yàn)證
        2.3.2 干預(yù)TLR4/VEGF-A后宮頸癌Siha細(xì)胞上清液對(duì)Matrigel基質(zhì)膠小管形成的影響
        2.3.3 干預(yù)TLR4/VEGF-A后宮頸癌Siha細(xì)胞上清液對(duì)HUVE-12細(xì)胞遷移的影響
        2.3.4 干預(yù)TLR4/VEGF-A后宮頸癌Siha細(xì)胞上清液對(duì)CAM膜血管形成的影響
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三部分 DFMG干預(yù)TLRE/VEGF-A對(duì)宮頸癌血管新生的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞系
        3.1.2 藥品和試劑
        3.1.3 儀器和設(shè)備
        3.1.4 試劑的配置
        3.1.5 抗體
        3.1.6 引物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        3.2.3 Matrigel基質(zhì)膠小管形成實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        3.2.5 雞胚絨毛尿囊膜(Chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)血管形成實(shí)驗(yàn)
        3.2.6 酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)
        3.2.7 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)
        3.2.8 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 DFMG干預(yù)TLR4/VEGF-A后宮頸癌Siha細(xì)胞上清液對(duì)Matrigel基質(zhì)膠小管形成的影響
        3.3.2 DFMG干預(yù)TLR4/VEGF-A后宮頸癌Siha細(xì)胞上清液對(duì)HUEV-12細(xì)胞遷移的影響
        3.3.3 DFMG干預(yù)TLR4/VEGF-A后宮頸癌Siha細(xì)胞上清液對(duì)CAM膜血管形成的影響
        3.3.4 DFMG干預(yù)TLR4/VEGF-A對(duì)宮頸癌Siha細(xì)胞VEGF-A蛋白分泌的影響
        3.3.5 DFMG干預(yù)TLR4/VEGF-A對(duì)宮頸癌Siha細(xì)胞TLR4、VEGF-A蛋白表達(dá)的影響
        3.3.6 DFMG干預(yù)TLR4/VEGF-A對(duì)宮頸癌Siha細(xì)胞TLR4、VEGF-A m RNA表達(dá)的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間主要成果
致謝



本文編號(hào)：3819939