研究背景和目的:卵巢癌(ovarian cancer,OC)是女性常見的五大癌癥之一,并且是導(dǎo)致女性死亡的第一大生殖系統(tǒng)癌癥。據(jù)統(tǒng)計(jì),約有20%²5%卵巢癌的發(fā)生發(fā)展與遺傳因素有關(guān)。晚期卵巢癌患者5年生存率僅為25%⁴0%。根據(jù)課題組前期的全外顯子測序和sanger測序結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)在TP53、PTEN、CREBBP和NOTCH2基因中篩選出了7個點(diǎn)突變,通過對致病候選基因TP53、PTEN、CREBBP和NOTCH2基因及其突變進(jìn)行細(xì)胞功能性實(shí)驗(yàn),探討這4基因及其7個點(diǎn)突變對卵巢癌細(xì)胞蛋白表達(dá)、增殖、遷移及侵襲的影響。研究方法:選擇無內(nèi)源性TP53、CREBBP和NOTCH2蛋白表達(dá)的卵巢癌A2780細(xì)胞系進(jìn)行該基因的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),選擇無內(nèi)源性PTEN蛋白表達(dá)的卵巢癌CAOV3細(xì)胞系進(jìn)行該基因的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。每個基因組各分為野生型組、突變型組和空載體組。構(gòu)建TP53、PTEN、CREBBP和NOTCH2基因的野生型質(zhì)粒,利用點(diǎn)突變試劑盒構(gòu)建篩選到的TP53 G199X、TP53 V157fs、PTEN H122D、PTEN Q22X、CREBBP L...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 研究工作的背景與意義
    1.2 卵巢癌基因組測序的國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        1.2.1 全外顯子測序
        1.2.2 全基因組測序
        1.2.3 靶向性區(qū)域測序
        1.2.4 轉(zhuǎn)錄組測序
        1.2.5 其他測序技術(shù)
    1.3 卵巢癌相關(guān)基因的國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
    1.4 本文的主要貢獻(xiàn)與創(chuàng)新
    1.5 本論文的結(jié)構(gòu)安排
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞和質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和耗材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 質(zhì)粒的構(gòu)建和抽提
        2.2.2 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.3 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
        2.2.4 Western blot實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 雙熒光素酶檢測實(shí)驗(yàn)
    2.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 本章小結(jié)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 突變對蛋白質(zhì)表達(dá)的影響
    3.2 突變對細(xì)胞增殖活性的影響
    3.3 突變對細(xì)胞遷移能力的影響
    3.4 突變對細(xì)胞侵襲能力的影響
    3.5 NOTCH2 P2113S可以抑制CBF1 的轉(zhuǎn)錄活性
    3.6 本章小結(jié)
第四章 討論
    4.1 TP53 基因
    4.2 PTEN基因
    4.3 CREBBP基因
    4.4 NOTCH2 基因
    4.5 本章小結(jié)
第五章 全文總結(jié)與展望
    5.1 全文總結(jié)
    5.2 后續(xù)工作展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的成果



本文編號：3779729